42%噁草酮·莎稗磷·西草净乳油的高效液相色谱分析

陈金红

(安徽众邦生物工程有限公司，安徽合肥 230088)

噁草酮是含氮杂环类除草剂，主要通过杂草幼芽或茎叶吸收，对萌芽期杂草尤为敏感，当杂草一发芽，芽鞘的生长就被抑制，其组织迅速腐烂，杂草死亡。莎稗磷是内吸性有机磷除草剂。药剂通过根系吸收，传导至幼芽或叶片，使植株生长受抑制，颜色转为深绿，有时脱色，停止生长，最后枯死。西草净属选择性内吸传导型除草剂，能通过杂草根、叶吸收，并传导至植株全身，抑制杂草光合作用，使叶片缺绿变黄而死亡[1]。这3 者复配可达到优势互补，既扩大了封闭除草的杀草谱，而且降低了用药量和用药成本，延缓抗性。通过黑龙江、安徽、江苏、湖南、广东等地试验，42%噁草酮•莎稗磷•西草净乳油药效均90%以上。此复配制剂分析方法未见公开报导，西草净的相关分析方法有报道[2]，噁草酮原药和莎稗磷乳油有国标分析法[3,4]。本试验建立了在同一液相色谱条件下，同柱分离检测噁草酮、莎稗磷和西草净的方法。该方法操作简单、快速、准确，可用于相关产品的质量控制。

1 试验部分

1.1 试剂

甲醇：色谱纯(德国默克公司)；水：新蒸二次蒸馏水。冰乙酸(≥99.5%)，分析纯(国药集团)；噁草酮标样：已知质量分数98.8%(北京勤诚亦信科技开发有限公司)；西草净标样：已知质量分数98.3%(北京勤诚亦信科技开发有限公司)；莎稗磷标样：已知质量分数98.9% (上海市农药研究所有限公司)；42%噁草酮·莎稗磷·西草净乳油样品(由安徽众邦生物工程有限公司配制)。

1.2 仪器

shimadzu LC-20A 高效液相色谱，具有紫外可变波长检测器和岛津配套色谱工作站Labsolution (日本岛津公司)；clipse Plus C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；过滤器：有机相滤膜(孔径0.45 μm)(上海安谱实验科技股份有限公司)；超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

1.3 液相色谱操作条件

流动相：甲醇+水+冰乙酸=85+15+0.4 (体积比)，流速：1.0 mL/min；柱温：室温(温差变化应不大于2 ℃)；检测波长：240 nm；进样体积：20 μL。保留时间：西草净3.9 min、莎稗磷7.2 min、噁草酮13.2 min (图1)。

图1 42%噁草酮·莎稗磷·西草净乳油的高效液相色谱图

1.4 测定步骤

1.4.1 标样溶液的配制

称取0.02 g (精确至0.000 2 g)噁草酮标样、0.04 g(精确至0.000 2 g)莎稗磷标样和0.02 5 g (精确至0.000 2 g)西草净标样于50 mL 容量瓶中，加入约40 mL甲醇，超声波振荡5 min 使标样溶解，冷却至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀。

1.4.2 试样溶液配制

称取试样0.2 g (精确至0.000 2 g)于50 mL 容量瓶中，加入约40 mL 甲醇，超声波振荡5 min 使标样溶解，冷却至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀。

1.4.3 测定

在上述色谱操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻2 针响应值变化小于1.5%后，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

1.4.4 计算

将测得的2 针试样溶液以及试样前后2 针标样溶液中噁草酮、莎稗磷和西草净峰面积分别进行平均。试样中噁草酮、莎稗磷和西草净质量分数X1(%)按式⑴计算：

式中：A1为标样溶液中噁草酮(或莎稗磷、西草净)峰面积的平均值；A2为试样溶液中噁草酮(或莎稗磷、西草净)峰面积的平均值；m1为噁草酮(或莎稗磷、西草净)标样的质量，g；m2为试样的质量，g；P为标样中噁草酮(或莎稗磷、西草净)的质量分数，%。

2 结果分析

2.1 检测波长的选择

从紫外扫描图可知噁草酮、莎稗磷、西草净的最大吸收波长分别约为240、210、220 nm，而在240 nm处噁草酮、莎稗磷和西草净都有吸收，故将检测波长确定为240 nm。

2.2 流动相的选择

比较了甲醇、乙腈和水为流动相分离噁草酮、莎稗磷和西草净的效果，结果发现以甲醇和乙腈为流动相，其分离效果无明显差异，但考虑到乙腈相对价格高和实际生产中成本控制需要，选择更经济的甲醇和水做流动相。由于西草净呈弱酸性，噁草酮、莎稗磷在酸性条件下稳定，为了使其峰形对称且具有良好的分离度，采用甲醇+水+冰乙酸=85+15+0.4 (体积比)为流动相。

2.3 特异性

本试验采用HPLC-DAD 峰纯度分析法来鉴别噁草酮、莎稗磷和西草净。试样中的噁草酮、莎稗磷和西草净HPLC-DAD 峰纯度均大于998，有效成分处无其他物质干扰，符合定量分析要求。

2.4 精密度

取统一均匀的样品，在上述色谱操作条件下进行分析，重复测定5 次，结果见表1。可见噁草酮、莎稗磷和西草净标准偏差分别为0.055、0.129 和0.065，变异系数分别为0.58%、0.69%和0.54%，说明该方法精密度高，重现性很好。

表1 测定方法精密度试验

2.5 方法的线性关系

按1.4.1 节标样溶液的制备方法，分别配制噁草酮(或莎稗磷、西草净) 5 个浓度级别的标准样品，按照本方法中所示条件，待仪器稳定后，按照顺序测定每个溶液中噁草酮(或莎稗磷、西草净)的峰面积，取2 次测定的平均结果。以噁草酮(莎稗磷、西草净)标准溶液的质量浓度为横坐标，峰面积平均值为纵坐标，绘制标准曲线(表2)。可见，噁草酮为0.228 1~0.532 3 mg/mL、莎稗磷为0.544 9~1.271 5 mg/mL、西草净为0.318 9~0.744 2 mg/mL 时，线性相关系数分别为0.999 8、0.999 7 和0.999 4，完全可以满足定量分析的要求。

表2 噁草酮(莎稗磷、西草净)的线性方程、线性范围、相关系数

2.6 方法的准确度

称取已知含量的42%噁草酮·莎稗磷·西草净乳油(噁草酮含量9.49%、莎稗磷含量18.78%、西草净含量12.02%)样品5 份，分别添加已知含量的噁草酮、莎稗磷和西草净标准品溶液，在上述色谱操作条件下分别进行分析，结果见表3。可见，噁草酮回收率为98.4~100.9%，平均回收率99.9%；莎稗磷回收率为98.1%~99.5%，平均回收率98.6%，西草净回收率为98.4~100.8%，平均回收率100.0%，说明该方法回收率好，准确度高。

表3 方法的准备度试验

3 结 论

本文采用高效液相色谱法建立了同时测定42%噁草酮·莎稗磷·西草净乳油产品中3 种有效成分的方法。本方法能同时测定噁草酮、莎稗磷和西草净含量。试验结果表明，本方法对噁草酮、莎稗磷和西草净复配制剂进行同柱分析，具有定量准确，重复性好，分析速度快，线性关系良好，操作简便特点，是一种可行的分析方法。