长胜七中简单苯丙素类化学成分研究*

2022-08-01刘媛媛田煦莹周益刚李玉泽张化为邓翀宋小妹张东东王薇

陕西中医药大学学报 2022年4期

刘媛媛田煦莹周益刚李玉泽张化为邓翀宋小妹张东东王薇

(陕西中医药大学药学院，陕西咸阳 712046)

华中五味子为五味子科五味子属植物，习称“南五味子”，为攀援灌木，主要分布于四川、湖北、陕西、山西、云南等地，其果实作为南五味子药材，应用广泛；其茎藤、根在民间作为血藤使用，具有养血消瘀、理气化湿的效用[1]；华中五味子中的化学成分为木脂素、三萜、黄酮和简单苯丙素等化合物[2-3]，其药理活性主要有保肝[4]、抗氧化[5]、抗炎[6]、抗肿瘤[7]、抗病毒[8]、免疫调节[9]、神经保护等[10]。长胜七，为五味子科五味子属华中五味子(SchisandrasphenantheraRehd.et Wils)的根皮，作为陕西秦岭特色中药“太白七药”之一，主要分布于秦岭山脉和大巴山区各地，具有健脾消积、止咳化痰、活血消肿之功效[11-17]。近年来，对华中五味子的研究主要集中在地上部分，而对其根或根皮研究较少[18-19]。因此，本实验对长胜七乙醇提取物的乙酸乙酯部位进行系统分离，以期寻找结构新颖且具有良好活性的化合物，为进一步开发应用长胜七提供科学依据，同时对合理开发和有效利用秦巴山区药用植物资源提供理论基础。

1 仪器与试药

1.1仪器 Burker AVANCE 400核磁共振波谱仪(瑞士Burker公司)；6550Q-TOF质谱仪(美国 Agilent Technologies)；WFH-203三用紫外分析仪(上海精科实业有限公司)；Sephadex LH-20(美国GE公司)；岛津LC-6AD型半制备液相色谱仪(检测器SPD-20A)；CAPCELL PAK C18MGⅡ半制备色谱柱，(10 mm×250 mm，5 μm)；薄层色谱用硅胶GF254(青岛海洋化工有限公司)；硅胶柱色谱(100～200和200～300目；青岛海洋化工厂产品)。

1.2试药长胜七药材于2019年9月采自陕西秦岭太白山，经陕西中医药大学王薇教授鉴定为五味子科五味子属华中五味子(SchisandrasphenantheraRehd.et Wils)的根皮；色谱甲醇，色谱乙腈(天津市科密欧化学试剂有限公司)；其他试剂均为分析纯(天津市天力化学试剂有限公司)。

2 提取与分离

长胜七15 kg，用80%乙醇提取3次(每次5 kg，30 L，提取1.5 h)，减压回收乙醇后得到浸膏，用水分散浸膏，依次用石油醚，乙酸乙酯萃取，得到乙酸乙酯部位(450 g)。乙酸乙酯部位(450 g)经硅胶柱分离，以二氯甲烷-甲醇 (1∶0～0∶1)梯度洗脱，得到14个组分(SSE1 ～ SSE14)，SSE9经硅胶柱层析，以二氯甲烷-甲醇(1∶0～0∶1)梯度洗脱，得到6个亚组分，(SSE9-1 ～ SSE9-6)，SSE9-3经过sephadex LH-20(三氯甲烷-甲醇1∶1)凝胶柱色谱洗脱后，经岛津制备液相，甲醇-水(42∶58)等度洗脱得到化合物1(tR=24 min，12 mg)，化合物2(tR=28 min，16 mg)，化合物3(tR=35 min，9 mg)，化合物4(tR=40 min，8 mg)和化合物5(tR=44 min，10 mg)。SSE9-4通过半制备液相，乙腈-水(34∶66)等度洗脱得到化合物6(tR=13 min，8 mg)，化合物7(tR=16 min，9 mg)，化合物8(tR=20 min，11 mg)和化合物9(tR=31 min，13 mg)。其化学结构见图1。

图1 化合物1～9结构图

3 结构鉴定

化合物1：白色粉末(甲醇)，ESI-MSm/z:257 ([M+H]+)。1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ:3.75 (2H，dd，J=5.1，2.2 Hz，CH2-1)，4.15 (1H，m，H-2)，3.75 (2H，dd，J=5.1，2.2 Hz，CH2-3)，3.56 (2H，t，J=6.5 Hz，CH2-1′)，1.94-1.74 (2H，m，CH2-2′)，2.63 (2H，t，J=8.0，CH2-3′)，6.85 (1H，d，J=2.0 Hz，H-2″)，6.99 (1H，d，J=8.1 Hz，H-5″)，6.73 (1H，dd，J=8.1，2.0 Hz，H-6″)，3.83 (3H，s，-OCH3)；13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ:62.0 (CH2-1，CH2-3)，83.3 (C-2)，62.2 (CH2-1′)，35.5 (CH2-2′)，32.7 (CH2-3′)，138.3 (C-1″)，114.1 (C-2″)，152.0 (C-3″)，146.8 (C-4″)，119.4 (C-5″)，121.9 (C-6″)，56.5 (-OCH3)。以上数据与文献报道[20]基本一致，鉴定化合物1为lawsorosemarinol。

化合物2：白色粉末(甲醇)，ESI-MSm/z:149 ([M+H]+)。1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ:7.66 (1H，d，J=16.0 Hz，H-β)，6.48 (1H，d，J=16.0 Hz，H-α)，7.61 ～ 7.34 (5H，m，Ar-H)；13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ:170.3 (-COOH)，146.0 (C-1)，129.1 (C-2，C-6)，135.9 (C-4)，129.9 (C-3，C-5)，131.3 (C-β)，119.7 (C-α)。以上数据与文献报道[21]基本一致，鉴定化合物2为cinnamic acid。

化合物3：白色粉末(甲醇)，ESI-MSm/z:229 ([M+H]+)。1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ:6.91 (1H，d，J=1.7 Hz，H-2)，6.80 (1H，d，J=7.8 Hz，H-5)，6.74 (1H，dd，J=7.8，1.7 Hz，H-6)，4.07 (1H，d，J=6.5 Hz，H-7)，3.66 (1H，td，J=6.5，3.8 Hz，H-8)，3.42 (1H，dd，J=11.3，3.8 Hz，H-9a)，3.31 (1H，dd,J=11.3，6.5 Hz，H-9b)，3.85 (3H，s，3-OCH3)，3.21 (3H，s，7-OCH3)；13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ：131.5 (C-1)，111.8 (C-2)，149.1 (C-3)，147.5 (C-4)，116.0 (C-5)，121.6 (C-6)，77.1 (C-7)，85.6 (C-8)，63.9 (CH2-9)，56.8 (3-OCH3)，56.3 (7-OCH3)。以上数据与文献报道[22]基本一致，鉴定化合物3为erythro-7-methoxyguaiacylglycerol。

化合物4：白色粉末(甲醇)，ESI-MSm/z:213 ([M+H]+)。1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ:4.39 (1H，d，J=5.3 Hz，H-1)，3.82 (1H，m，H-2)，1.12 (3H，d，J=6.4 Hz，CH3-3)，6.98 (1H，d，J=1.8 Hz，H-2′)，6.74 (1H，d,J=8.2 Hz，H-5′)，6.74 (1H，dd,J=8.2，1.8 Hz，H-6′)，3.86 (3H，s，-OCH3)；13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ:134.8 (C-1′)，111.7 (C-2′)，148.7 (C-3′)，146.8 (C-4′)，115.6 (C-5′)，120.9 (C-6′)，72.4 (C-1)，79.0 (C-2)，18.4 (CH3-3)，56.3 (-OCH3)。以上数据与文献报道[23]基本一致，鉴定化合物4为erythro-1-(3-methoxy-4-hydroxy-phenyl)-propan-1,2-diol。

化合物5：白色粉末(甲醇)，ESI-MSm/z:199 ([M+H]+)。1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ:6.81 (1H，d，J=1.9 Hz，H-2)，6.70 (1H，d，J=8.0 Hz，H-5)，6.65 (1H，dd，J=8.0，1.9 Hz，H-6)，2.73 (1H，dd，J=13.8，5.8 Hz，H-7a)，2.59 (1H，dd，J=13.8，7.4 Hz，H-7b)，3.76 (1H，m，H-8)，3.49 (1H，dd，J=11.1，4.5 Hz，H-9a)，3.43 (1H，dd，J=11.1，6.3 Hz，H-9b)，3.83 (3H，s，-OCH3)；13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ:131.4 (C-1)，114.1 (C-2)，148.8 (C-3)，146.1 (C-4)，116.1 (C-5)，122.8 (C-6)，40.5 (CH2-7)，74.7 (C-8)，66.5 (CH2-9)，56.3 (-OCH3)。以上数据与文献报道[24]基本一致，鉴定化合物5为3-(4-Hydroxy-3-methoxy phenyl)propan-1,2-diol。

化合物6：白色粉末(甲醇)，ESI-MSm/z:199 ([M+H]+)。1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ:4.24 (1H，d，J=7.3 Hz，H-1)，3.82 (1H，m，H-2)，0.95 (3H，d，J=6.3 Hz，CH3-3)，6.76 (1H，d，J=8.2 Hz，H-2′)，6.94 (1H，d，J=1.5 Hz，H-5′)，6.73 (1H，dd,J=8.2，1.5 Hz，H-6′)，3.85 (3H，s，-OCH3)；13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ:73.0 (C-1)，80.3 (C-2)，19.3 (CH3-3)，134.8 (C-1′)，111.6 (C-2′)，148.9 (C-3′)，147.2 (C-4′)，115.8 (C-5′)，121.0 (C-6′)，56.4 (-OCH3)。以上数据与文献报道[25]基本一致，鉴定化合物6为threo-1-(3-methoxy-4-hydroxy-phenyl)-propan-1,2-diol。

化合物7：白色粉末(甲醇)，ESI-MSm/z:213 ([M+H]+)。1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ:5.11 (1H，dd，J=5.2，3.7 Hz，H-2)，3.74 (1H，dd，J=11.7，5.2 Hz，H-3a)，3.87 (1H，dd，J=11.7，3.7 Hz，H-3b)，7.56 (1H，brs，H-2′)，6.88 (1H，d，J=8.1 Hz，H-5′)，7.58 (1H，dd，J=2.4，8.4 Hz，H-6′)，3.92 (3H，s，-OCH3)；13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ:199.6 (C-1)，75.5 (C-2)，66.3 (CH2-3)，128.1 (C-1′)，112.5 (C-2′)，149.3 (C-3′)，153.9 (C-4′)，115.9 (C-5′)，125.1 (C-6′)，56.5 (-OCH3)。以上数据与文献报道[26]基本一致，鉴定化合物7为C-veratroylglycol。

化合物8：白色粉末(甲醇)，ESI-MSm/z:215 ([M+H]+)。1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ:7.02 (1H，d，J=1.8 Hz，H-2)，6.79 (1H，d，J=8.1 Hz，H-5)，6.83 (1H，dd，J=8.1，1.8 Hz，H-6)，4.54 (1H，d，J=6.4 Hz，H-7)，3.69 (1H，m，H-8)，3.50 (1H，dd，J=11.3，3.9 Hz，H-9a)，3.42 (1H，J=11.3，6.5 Hz，H-9b)，3.88 (3H，s，-OCH3)；13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ:134.8 (C-1)，111.5 (C-2)，148.8 (C-3)，147.1 (C-4)，115.8 (C-5)，120.6 (C-6)，77.6 (C-7)，75.4 (C-8)，64.2 (CH2-9)，56.3 (-OCH3)。以上数据与文献报道[27]基本一致，鉴定化合物8为guaiacylglycerol。

化合物9：白色粉末(甲醇)，ESI-MSm/z:215 ([M+H]+)。1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ:7.03 (1H，d，J=1.9 Hz，H-2)，6.79 (1H，d，J=8.1 Hz，H-5)，6.85 (1H，dd，J=8.1，1.9 Hz，H-6)，4.55 (1H，d，J=6.3 Hz，H-7)，3.76 (1H，m，H-8)，3.69 (1H，dd，J=11.3，3.8 Hz，H-9a)，3.60 (1H，dd，J=11.3，6.6 Hz，H-9b)，3.89 (3H，s，-OCH3)；13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ:134.8 (C-1)，111.9 (C-2)，148.8 (C-3)，147.0 (C-4)，115.7 (C-5)，121.0 (C-6)，76.6 (C-7)，76.1 (C-8)，64.5 (CH2-9)，56.4 (-OCH3)。以上数据与文献报道[27]基本一致，鉴定化合物9为erythro- guaiacylglycerol。

4 细胞毒活性测试

采用MTT法测定了化合物1～9对三种肿瘤细胞(人肺癌细胞A549、人结直肠癌细胞HCT116和SW620)的细胞毒活性，实验所用仪器材料以及实验过程均与本课题组前期报道一致[18]，顺铂为阳性对照，对A549、HCT116和SW620细胞的IC50值分别为(32.06±1.31)μM，(43.54±3.30)μM和(32.47±3.39)μM。实验结果表明化合物3对HCT116细胞株具有细胞毒活性，IC50值为(20.40±1.37)μM，其余化合物的IC50值均大于50 μM。