消化性溃疡Hp感染患者血清GAS、IL-33、miR-26a水平变化及与临床病理特征的关系

王 玺，糜 玲

消化性溃疡为全球性多发病和常见病，欧美消化性溃疡发病率为6%～15%，国内发病率为10%～12%，巨大的疾病负担已成为全球公共卫生问题[1-2]。该病主要与幽门螺杆菌(Hp)感染有关，目前临床诊断主要依靠Hp抗体检测、细菌培养等，但对病情变化、轻重无从判断，寻找安全准确、操作简便的生化标志物辅助诊断已成为国内外研究热点[3-4]。有研究指出，胃黏膜损伤可致胃泌素(GAS)分泌异常，故GAS表达变化差异，可能对Hp感染诊断具有指导意义[5]。杨俭等[6]研究显示，miR-26a在胃癌患者中表达异常，但miR-26a在消化性溃疡Hp感染患者中的表达及意义研究较少。白细胞介素-33(IL-33)在慢性炎症性疾病及多种免疫性疾病中发挥重要生物学作用，IL-33与消化性溃疡Hp感染患者之间关系鲜有报道[7]。鉴于此，本研究探讨消化性溃疡Hp感染患者血清GAS、IL-33、miR-26a水平变化及与临床病理特征的关系，报告如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2018年10月—2020年10月我院收治的214例消化性溃疡作为研究对象，Hp感染情况：阳性136例、阴性78例。①纳入标准：符合消化性溃疡诊断标准[8]，经消化内镜检查确诊；无认知功能障碍；患者均自愿签署知情同意书。②排除标准：合并其他类型胃部疾病者；妊娠或哺乳期女性；伴胃泌素瘤、胃食管反流者；合并免疫系统疾病者；伴十二指肠溃疡出血、幽门梗阻、胃穿孔者；接受Hp根除治疗者；伴心、肝、肾等器质性病变者；有消化内镜检查禁忌证者；合并其他感染性疾病者；无法配合本研究者。本研究经医院医学伦理委员会审核批准。

1.2方法

1.2.1资料收集：收集消化性溃疡患者性别、年龄、体质量指数、吸烟(每日≥3支，持续1年及以上)、饮酒(1年内平均每周≥1次)、家族胃肠道疾病史、暴饮暴食、辛辣饮食、既往病史、进食习惯、溃疡部位、溃疡面直径等临床资料。

1.2.2标本采集及处理：研究对象均于入院时，使用2支K2 EDTA抗凝管分别采集静脉血4 ml，以半径8 cm，3000 r/min离心15 min，其中一管在超净工作台将离心后上清吸取至无菌、不含RNA酶的EP管内，用于miR-26a测定；另一管取血清用于GAS、IL-33测定，均置于-80 ℃冰箱保存。

1.2.3GAS、IL-33检测方法：采用放射免疫分析法检测血清GAS水平，试剂盒购自上海西唐生物科技有限公司；采用ELISA法测定IL-33水平，试剂盒购自上海哈灵生物科技有限公司；检测由同一位经验丰富的检验医师按照说明书完成。

1.2.4miR-26a测定方法：采用Trizol试剂提取血清中总RNA，然后置于冰上，使用紫外分光光度计测定RNA浓度与质量，取1 μg RNA，将其反转录cDNA，保存于-20 ℃冰箱内，采用qRT-PCR对miR-26a进行相对定量分析，采用TransStart Top Green qPCR SuperMi试剂盒进行qRT-PCR扩增，PCR反应体系参照说明书，上下游引物各0.4 μl，模板0.5 μl，STBR Premix Ex Taq Mix 10 μl，总体系为20 μl，反应程序：95 ℃、3 min，95 ℃、30 s，60 ℃、30 s，40个循环；利用Bio-Rad CFX Manager软件进行数据分析，根据溶解曲线判断qRT-PCR产物特异性，采用2-ΔΔCt方法进行相对定量分析。

1.2.5Hp感染检测及分型标准：所有研究对象均于治疗前，采用快速尿素酶试验及W-S银染色法进行Hp感染检测，二者均为阳性即Hp感染阳性，反之为阴性。取Hp感染阳性患者血清标本，于恒温箱内复温至37 ℃，采用蛋白免疫印迹法对血清Hp抗体(UreA、UreB、CagA、VacA)进行定性检测。Hp感染Ⅰ型是产细胞毒素菌株，即CagA(+)和(或)VacA(+)，Ure(+)；Hp感染Ⅱ型仅产生Ure而不产生毒素。

1.3观察指标 ①比较Hp感染阳性或阴性患者GAS、IL-33、miR-26a水平。②分析影响消化性溃疡患者Hp感染的相关因素。③分析GAS、IL-33、miR-26a水平与Hp感染患者临床病理特征的关系。④比较不同分型Hp感染患者GAS、IL-33、miR-26a水平。⑤分析GAS、IL-33、miR-26a对Hp感染分型的鉴别诊断价值。

2 结果

2.1临床资料比较 消化性溃疡Hp感染阳性与阴性患者的临床资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 消化性溃疡Hp感染阳性、阴性患者临床资料比较(例)

2.2GAS、IL-33、miR-26a水平比较 消化性溃疡Hp感染阳性患者GAS、IL-33、miR-26a水平均高于阴性患者(P<0.01)。见表2。

表2 消化性溃疡Hp感染阳性、阴性患者GAS、IL-33、miR-26a水平比较

2.3消化性溃疡患者Hp感染影响因素 将上述比较差异有统计学意义的因素纳入多因素Logistic回归分析，变量赋值：GAS、IL-33、miR-26a以平均值为界，≤平均值=0、>平均值=1。结果显示，GAS、IL-33、miR-26a均为消化性溃疡患者Hp感染的影响因素(P<0.01)。见表3。

表3 影响消化性溃疡患者Hp感染的多因素Logistic回归分析

2.4GAS、IL-33、miR-26a水平与临床病理特征的关系 GAS、IL-33、miR-26a水平与消化性溃疡Hp感染患者溃疡面直径有相关性(r=0.569、0.571、0.594，P均<0.01)，而与溃疡部位无相关性(r=0.114、0.137、0.152，P=0.125、0.109、0.133)。

2.5不同分型Hp感染患者GAS、IL-33、miR-26a水平 Ⅰ型Hp感染患者GAS、IL-33、miR-26a水平高于Ⅱ型患者(P<0.01)。见表4。

表4 不同分型消化性溃疡Hp感染患者GAS、IL-33、miR-26a水平

2.6GAS、IL-33、miR-26a对Hp感染分型的鉴别诊断价值 GAS、IL-33、miR-26a联合诊断Hp感染分型的曲线下面积(AUC)最大，为0.832，敏感度为73.75%，特异度为82.14%。见表5，图1。

表5 GAS、IL-33、miR-26a对消化性溃疡Hp感染分型的鉴别诊断价值

图1 GAS、IL-33、miR-26a鉴别诊断消化性溃疡Hp感染分型的ROC曲线GAS为胃泌素，IL-33为白细胞介素-33，Hp为幽门螺杆菌，ROC为受试者工作特征

3 讨论

国内外研究指出，消化性溃疡患者病灶部位病原菌抵抗能力较弱，更易发生Hp感染，且Hp感染者产生的毒素可引发宿主免疫反应介导的胃黏膜损伤，进一步加重病情[9-10]。故早期明确消化性溃疡患者Hp感染发生情况，对临床合理制定治疗方案，及时控制病情尤为重要[11]。

有研究指出，胃肠激素可能参与消化性溃疡患者Hp感染发生、发展过程，其中GAS在胃肠道运动、胃肠分泌功能及消化道黏膜细胞增殖中具有较强作用[12-13]。本研究结果显示，Hp感染阳性患者GAS水平较阴性患者高，与辛铭等[14]研究结果一致。这可能与Hp感染引起消化道黏膜受损有关，导致GAS释放入血，同时因损伤应激反应引起GAS的营养作用，增加胃黏膜血流，以促进受损的胃黏膜组织增生、修复。进一步探究表明，GAS水平与消化性溃疡Hp感染患者溃疡面直径有相关性，且Ⅰ型Hp感染患者GAS水平较Ⅱ型患者高，进而较为全面且细致明确Hp感染对GAS的不良影响，Ⅰ型Hp感染细胞毒性及侵袭性较强，引起胃黏膜细胞损伤严重，由此导致应激性修复作用提升，故GAS表达水平进一步升高[15]。后续ROC曲线分析表明，当GAS>119.40 pg/ml时，应警惕Ⅰ型Hp感染发生，并根据病情及时给予相关防治措施，以改善疾病预后。

已有研究证实，IL-33在自身免疫性疾病、心血管疾病、感染等多种疾病发生发展过程中发挥关键作用[16-17]。但目前关于IL-33在消化性溃疡Hp感染患者中表达情况的研究鲜见，本研究发现，Hp感染阳性患者IL-33水平较阴性患者高，且与Hp感染患者溃疡面直径有相关性，免疫炎症反应为Hp感染黏膜损伤的重要病理生理机制，Hp感染可诱导宿主细胞及体液免疫应答激活，引起局部及全身炎症反应，故IL-33水平呈高表达。机体感染Hp后，可迅速发生免疫反应，在多种细胞及生物因子作用下，致使溃疡进一步加重。国内外研究证实，CagA可激活核因子-κB和MAPK信号传导途径，进而促进IL-32合成、分泌[18-19]。本研究中，Ⅰ型Hp感染患者IL-33水平较Ⅱ型高，可能与Ⅰ型Hp感染患者CagA(+)有关，但也可能存在其他途径引起的IL-33活化，还需进一步研究证实。ROC曲线分析显示，IL-33鉴别诊断Hp感染分型的AUC为0.760，提示监测消化性溃疡患者IL-33水平可为临床诊疗提供重要参考信息。

张峰等[20]研究发现，Hp感染相关胃疾病患者miR-26a表达异常，通过调节miR-26a表达可影响相关胃炎及胃癌进展，提示miR-26a与Hp感染相关胃疾病有关，本研究观点与上述结果存在相似之处，microRNA是靶向信使RNA非翻译区的非编码短RNA，Hp感染后引起相关炎症及黏膜损伤，可诱导胃部miR-26a表达增加。本研究仅以消化性溃疡Hp感染患者为研究对象，从基因水平检测miR-26a表达，发现Ⅰ型Hp感染患者miR-26a水平较Ⅱ型患者高，分析原因可能为，Ⅰ型Hp感染更易引起胃黏膜组织炎症反应，诱导宿主细胞及体液免疫应答激活，miR-26a通过调节氧化酶-2表达影响胃黏膜上皮细胞增殖，抑制疾病进展，但具体作用机制仍需进一步探究。本研究通过ROC曲线分析发现，miR-26a鉴别诊断Hp感染分型AUC为0.747，具有较高应用价值。

消化性溃疡Hp感染患者发病机制复杂，需多个指标进行综合诊断及病情评估。本研究发现，GAS、IL-33、miR-26a联合鉴别诊断Hp感染分型的AUC高达0.832，可在一定程度上提高诊断效能，为临床提供更全面的疾病诊疗信息。此外，对于吸烟、饮酒、家族胃肠道疾病史、暴饮暴食、辛辣饮食、有既往史、共餐、溃疡面直径>2 cm者，Hp感染发生风险较高，应作为重点观察对象，并制定相应预防措施，以控制疾病发生发展。

综上，GAS、IL-33、miR-26a与消化性溃疡患者Hp感染存在一定相关性，三者联合鉴别诊断Hp感染分型的敏感度、特异度较高，可辅助评估Hp感染的发生及病情严重程度。