贵港市孕期女性耳聋基因筛查结果分析及耳聋出生缺陷的防控策略

钟文富，黄菁雯，曾灏，叶慧芬，毛锦江，罗裕，杨日荣

(1.广西医科大学基础医学院免疫学教研室，广西 南宁 530021；2.贵港市人民医院检验科，广西 贵港 537100； 3.广西壮族自治区人民医院检验科，广西 南宁 530021)

0 引言

耳聋是最常见的出生缺陷之一，新生儿中听力缺陷患儿出生概率约为1/1000[1]。听力障碍给个人和家庭带来沉重的经济负担和精神压力，是严重影响人口素质和经济发展的重大疾患。对孕妇进行耳聋基因筛查，必要时行产前诊断，可以帮助评估生产聋儿的风险，最终避免出生缺陷的发生。本研究对2200名听力正常的孕妇进行基因筛查和产后随访，了解本地区耳聋基因突变的携带率，并对高危孕妇行产前诊断及遗传咨询，及时阻止耳聋患儿的出生，有效降低出生缺陷的发生率。

1 材料与方法

1.1 研究对象

为了得到箱梁翼缘板的准确正应力，将预应力加在两腹板上的点10位置处，如图1所示，两根钢束的预应力合力大小均为300 N。在ANSYS中利用LINK8单元模拟预应力作用，通过赋予初始应变得到所需预应力。研究初期，也曾用等效荷载加在同一位置处，提取的结果和用LINK8单元算出来的结果进行对比分析，最后发现误差较小，说明用LINK8单元模拟纵向预应力筋是准确的。跨中施加的集中荷载P亦可模拟车轮荷载作用下在跨中的等效集中力。

选择2200例听力正常的孕妇为研究对象，向其进行耳聋基因筛查内容宣教后，孕妇接受筛查并签署知情同意书。

1.2 实验仪器

Waters高效液相色谱仪：Waters515二元梯度泵，Waters2487DualλUV检测器。0.45 μm微孔滤膜(天津菲罗门)，旋转蒸发仪(上海亚荣RE-52型)。GA3，IAA和ABA标准样品均为Fluka公司的HPLC试剂，乙腈和甲醇为色谱级，实验用水均为二次蒸馏水。

8点了，营业部里的人陆续来上班了，大家都像往常一样打着招呼，可大家都觉得彼此的眼神和话语里好像多了些内容，到底是什么内容，大家都不好说，也不能说。

通过电话、网络等多种途径对已分娩孕妇进行了随访，4例新生儿听力初筛未通过，42天复查通过，尚未发现先天性耳聋患儿出生。

2200例孕妇中检查出耳聋基因携带者53例，携带率为2.41%。具体结果见表1。

为了庆祝李家庄整体建成李家社区，县电视台拍摄了一部《从农民到市民的跨跃》的专题片，采访的第一个对象就是我。当村支书李顺（对了，现在叫社区主任）带着记者上楼时，我正痴迷地看着我那个小鱼塘。

《后汉书》卷七十八《宦者列传》张让传：“(灵)帝本侯家，宿贫，每叹桓帝不能作家居，故聚为私藏，复寄小黄门常侍钱各数千万。常云：‘张常侍是我公，赵常侍是我母。’”[31](第9册，P2536)早年的贫穷并不必然导致关心民生疾苦，反而极有可能导致极端的贪婪。灵帝已是帝王之尊尚且如此，又何怪乎贪腐横行。正是基于此，我们反思钱穆所谓“全民政治”，平民进入政府是否必然保障政府关心平民？徐复观的反驳显然极有道理，“陈世美现象”就是最好的证明。一个人为了自己向上爬可以抛妻弃子，又怎能指望如此之人为民请命呢！

4个常见耳聋基因中的13个热点突变。

1.5 样本的检测

抽取被检者2mL静脉血，提取样本DNA进行PCR扩增，将PCR产物变性、冰水浴后进行膜条杂交，经过洗膜封闭膜等操作后显色观察结果。

1.4 检测位点

1.6 建议耳聋基因携带者的丈夫也进行同型基因检测，采样后送至广州凯普检验所行Sanger测序。1.7 对携带同基因型的夫妇提供遗传咨询，在夫妇充分知情同意情况下进行产前诊断，经超声介导行羊膜腔穿刺术抽取羊水，提取羊水细胞DNA进行基因检测。

1.8 孕妇生育后，对新生儿的听力状态进行追踪随访。

DNA提取试剂盒(广州凯普)，耳聋易感基因检测试剂盒(广州凯普)。

2 结果

2.1 孕妇耳聋基因筛查结果

1.3 实验试剂

表1 2200例孕妇耳聋基因突变类型及突变率(n=2200)

2.2 配偶基因检测结果

50例携带有GJB2或者SLC26A4 基因变异孕妇的丈夫，40例同意行相应基因检测，其中37例未检测出基因变异，3例检测出基因变异。具体结果见表2。

就目前我国枪械的性能来说,其总体性能与国外同类产品相比确实具有一定差距。我国某型号步枪的综合性能相当于美国的M16A2、俄罗斯的AK74M。该步枪的机械系统复杂,各种原因引起的故障问题不可避免。由于步枪多为单人手提武器,伴随士兵行动,使用时多为贴身操作,一旦发生故障,即有危害人身安全的可能[1-3],因此步枪故障问题的研究具有十分重要的意义。

表2 3个家庭耳聋基因检测结果

2.3 携带相同变异基因家庭的妊娠结局

携带相同变异基因家庭经过充分的遗传咨询和知情同意，1号孕妇接受产前诊断，羊水检测结果为c.235delC纯合突变，最终选择终止妊娠；2号与3号夫妇拒绝产前诊断，胎儿足月生产，均通过听力筛查并做了基因筛查。胎儿基因结果见表3

表3 3例胎儿基因检测结果

2.4 产后随访

核酸提取仪，PCR扩增仪，杂交仪，冰盒等。

3 讨论

每年新增的耳聋患儿绝大部分出生于听力正常的家庭，目前尚无有效的治疗办法，对家庭和社会产生巨大的压力。其中影响最大的是先天性耳聋，如果不能在言语发育前及时干预，不仅可能因聋至哑，甚至可能影响其认知、智力等的发育。因此，推广孕期耳聋基因筛查及对先天性耳聋早发现、早干预，对降低耳聋出生缺陷和对改善耳聋患儿生活质量意义重大。

夏 季 ：峰 时 段（8：00-11：00、13：00-15：00，18：00-21：00），平时段（6：00-8：00、11：00-13：00、15：00-18：00，21：00-22：00），谷时段（22：00-次日6：00）；峰时段电价 1.132 元/kWh，平时段电价0.700元/kWh，谷时段电价0.264元/kWh。

有调查发现超50%的非综合征型耳聋是因为GJB2、GJB3、SLC26A4及线粒体12SrRNA这四个基因突变引起，其中GJB2基因突变占比最高[2]。目前我国耳聋基因筛查主要是针对4个基因中的9-20个位点。据报道，筛查9个位点平均携带率为4.3%，筛查20个位点平均携带率为4.7%，随着检测位点的扩大，检出率增加[3]。尽管增加了检测位点，但仅提高很有限的检出率，同时检测成本也随之增加，因此各地区因根据自身流调依据，找出本地区突变率高的位点，选择适合本地区的筛查方案，节约检测成本的同时也提高检出率。本调查受检孕妇接受了4个基因13个位点的筛查，只检出53例，四个耳聋基因中的7种突变位点，携带率排在前3位的热点突变依次为235delC、IVS7-2A＞G、1229C＞T，本研究结果符合此前235delC为国内最常见基因突变的结论[4]。本次研究贵港地区耳聋基因携带率为2.41%，低于张昊晴等的报道[5]，考虑的原因有：(1)研究数量较少，抽样误差所致；检测位点偏少，或者检测的位点并非本地区热点；(2)检测方法学限制，相比二代测序，测序方法能检测到少见、新发突变或者临床意义不明确的突变；(3)耳聋基因具有较高的遗传异质性，不同地区、不同民族有各自的特点[6]。因此，后续需增加研究样本量，找出本地区覆盖率高的耳聋基因突变位点， 制定更适合本地的筛查方案服务临床。

GJB2突变后可导致感音神经性耳聋，患者多为先天性耳聋，发病时间早，临床表现严重，以235delC突变最常见。本研究一孕妇产前诊断羊水结果为GJB2 235delC纯合子突变，纯合子突变临床表现为出生后即有重度甚至极重度耳聋，经充分考虑家属要求终止妊娠，避免了先天性聋儿的出生。

随着基因测序技术的发展，大量未知的突变位点被发现，因缺乏临床数据的支持，许多临床意义不明确的变异位点给临床遗传咨询带来了巨大的困扰。本研究中丈夫的 GJB2 基因测序结果中发现2例c.109G＞A突变，近年研究发现 c.109G＞A 普遍存在于亚洲人群中，且该变异位点的致病性存在很大分歧[7]，主要是c.109G＞A纯合子或者复合其他突变在临床表现差异性极大，这给遗传咨询和产前诊断的工作开展带来了困惑。本研究中，经遗传咨询告知夫妇c.109G＞A位点变异的临床表现差异性很大，充分考虑后拒绝产前诊断，胎儿足月出生且通过听力筛查。其中一例新生儿基因型为c.109G＞A/c.235delA复合杂合变异，后期这类携带者的临床表现并不清楚，定期的听力检测及长期的追踪随访，对明确c.109G＞A/c.235delA复合杂合变异的致病性有重要意义。针对这类携带者的遗传咨询需小心谨慎，明确告知该基因型的遗传表型多样化，并让家属充分知情选择是否进行产前诊断及胎儿抉择。

SLC26A4 基因变异可导致后天中度以上感音神经性耳聋，多为语后聋[8]，也俗称“一巴掌打聋”。患儿出生时大部分听力正常，多在1岁后逐渐出现症状，表现为听力逐渐下降，因此必须在患儿听力损失不重的时候及早发现并积极干预，及早验配助听器；并对患者家属进行看护指导，避免剧烈活动及头部撞击引起耳道破裂造成迟发性耳聋。少部分成年后由于头部受到碰撞、打击等刺激后出现听力减退甚至进展为耳聋，具有表型差异性，容易被忽略。因此，通过筛查及早发现高危人群，并加强对高危人群的管理和宣教，能有效避免后天性遗传性耳聋发生和发展。本研究SLC26A4 基因的检出率是仅次于 GJB2 基因，本地区携带率为 1.09%，最常见突变位点有两个，即IVS7-2A＞G和1229C＞T，与大规模流调的结果有差异[9]，可能原因是SLC26A4基因突变位点存在明显的地域差异。

线粒体12SrRNA基因突变会导致药物性耳聋，表现为母系遗传[10]。线粒体12SrRNA基因突变位点以1555A＞G最常见，一旦误用氨基糖苷类抗生素，将导致细胞内线粒体功能障碍，即使少量的氨基糖苷类抗生素也可能导致不可逆的听力损伤。本次调查发现2例孕妇为药物性耳聋基因携带者，占0.09%，较耿国兴等报道[11]的比率偏低。当前，药物性耳聋尚无有效的治疗措施，通过筛查及时发现携带者，对该基因携带者及其母系家族成员提供遗传咨询及相关用药的指导，能有效避免因误用药物导致耳聋的悲剧发生。

GJB3基因是夏家辉院士定位并克隆的第一个本土基因，与进行性高频耳聋相关。GJB3基因c.537C＞T位点变异的致病性争议较大[12]，因此很多遗传咨询专家不建议对该基因进行产前诊断。本研究中仅检出 1例 GJB3 c.538C＞T 变异位点携带者，自述无耳聋家族史且目前听力正常。GJB3 基因突变在我国人群中发病率普遍不高，本地区 GJB3 基因携带率也仅为0.045%。针对目前GJB3基因突变的致病性尚存异议，遗传咨询医生需结合临床表现，谨慎给出对于 GJB3 c.538C＞T的遗传咨询，并通过长期随访其听力进展来增加临床数据。

她处于极度的绝望，坐在风雪中，仰望天空，雪在空中凝固了，风在空中凝固了，一切在这一刻都停止了呼吸，就连高高的烟囱上面飘散出来的浓烟和热气，这一刻也定格成一种僵硬的造型。

本实验采用PCR+导流杂交方法仅对常见的4种基因13个位点的耳聋基因进行筛查，不可避免会漏检部分突变位点，这是本研究的局限性。二代测序技术的研发应用，将成为极具潜力的耳聋基因筛查和诊断工具，其高通量的性能非常适合大规模人群的普筛及流行病学的调查[13]，对耳聋出生缺陷的防治意义非凡，但鉴于测序成本高，仪器设备昂贵，目前临床推广难度较大。

本研究对孕期女性进行常见耳聋基因筛查，同时对携带者的丈夫进行基因测序，针对高危孕妇行产前诊断可有效避免聋儿的出生，实现耳聋出生缺陷的二级防控[14-15]。高携带率是我国耳聋残疾高发的根本原因，因此，建议把耳聋基因筛查纳入婚检、产检及新生儿听力筛查项目，早发现早干预，从根本上阻断致病基因的传递，降低耳聋出生缺陷的发生。