Autotaxin对儿童难治性肺炎支原体肺炎的预测价值及其与炎性细胞因子的相关性

付彬彬 钟兰兰 叶婷婷 韩燕媚 邱小翠

（1.海口市妇幼保健院检验科，海南海口 570100；2.海口市妇幼保健院儿科，海南海口 570100）

肺炎支原体肺炎（Mycoplasma pneumoniaepneumonia，MPP）是由肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae，MP）感染导致的常见儿童呼吸道疾病，大部分患儿病情较轻，预后较好［1］，但仍有部分病例发展为难治性肺炎支原体肺炎（refractoryMycoplasma pneumoniaepneumonia，RMPP），表现为肺坏死、肺实变、胸腔积液及肺外多脏器损害，病情进展迅速、预后较差，严重时可造成患儿死亡［2］。因此，在RMPP临床诊疗过程中，如何早期诊断RMPP并及时治疗，对改善患儿预后具有重大意义。研究表明，炎性细胞因子在RMPP的发病过程中起到极为关键的作用，其中白细胞介素‐6（interleukin‐6，IL‐6）、白细胞介素‐8（interleukin‐8，IL‐8）及C‐反应蛋白（C‐reactive protein，CRP）均与RMPP 的发生发展密切相关［3-4］。近年来研究发现，自分泌运动因子（autotaxin）是一种具有溶血磷脂酶D活性的分泌型糖蛋白，参与细胞的增殖迁移、脂质代谢、血管生成及炎症病变等过程，在肺部疾病的进展过程中发挥重要作用［5］。然而，关于autotaxin在RMPP中的表达及其应用价值尚未清楚。为此，本研究通过检测RMPP患儿血清和支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）中autotaxin 水平的情况，探讨autotaxin 水平对儿童RMPP的预测价值，并分析其与IL‐6、IL‐8 及CRP 的相关性，以期为儿童RMPP 的早期诊断和临床治疗提供帮助。

1 资料与方法

1.1 研究对象

回顾性选取2019 年1 月至2021 年12 月收治的MPP患儿238例，男140例，女98例，诊断年龄2～13岁，平均（5.7±2.4）岁。纳入标准：（1）符合MPP 的 诊 断 标 准［6］，单 份 血 清MP 抗 体 滴 度≥1∶160，鼻咽抽吸物或BALF 中MP‐DNA 拷贝数＞500/mL；（2）均接受支气管镜检查，有发热、咳嗽等症状，结合肺部影像学检查确诊。排除标准：（1）合并免疫性疾病、恶性肿瘤及其他呼吸道疾病者；（2）肺部影像学检查和病原学检测结果缺失，不能配合本次研究者。根据RMPP 的诊断标准［7］：在确诊MPP 基础上，应用大环内酯类药物治疗≥1 周无效，合并肺外多系统并发症，仍持续存在临床发热、咳嗽等症状，肺部影像学检查无好转或加重者，238 例MPP 患儿分为RMPP 组（82例）和普通肺炎支原体肺炎（generalMycoplasma pneumoniaepneumonia，GMPP）组（156例）。

本研究经我院医学伦理委员会批准（20191105），并获得研究对象监护人知情同意。

1.2 资料收集

收集所有患儿的临床资料，包括年龄、性别、体重，临床表现［高热≥39℃、呼吸急促（1～5岁儿童呼吸频率≥40 次/min，5岁以上儿童呼吸频率≥30 次/min）、咳嗽、发绀、肺部细湿啰音和哮鸣音］，实验室检查（白细胞计数、血小板计数、中性粒细胞百分比、嗜酸性粒细胞百分比、血红蛋白、白蛋白、乳酸脱氢酶、铁蛋白）及肺部影像学检查（胸腔积液、肺实变、肺不张及肺坏死）等。

1.3 标本采集

所有患儿均于发病第1天（急性期）抽取静脉血3 mL 置于无抗凝剂的离心管中，3 500 r/min 离心10 min，取血清置于EP 管；所有患儿均于入院第1天（急性期）选择病变重的肺段进行纤维支气管镜肺泡灌洗，收集BALF 混匀，3 500 r/min 离心15 min，取上清液置于EP 管，均在-70℃保存待检。RMPP患儿继续给予内科保守治疗，其中73例RMPP患儿治疗病情好转后（恢复期）再次接受纤维支气管镜检查，进行第2次采集血液和BALF。

1.4 检测方法

应用博科全自动酶联免疫分析仪（山东博科生物有限公司，型号BK‐EL10C），酶联免疫吸附法检测血清和BALF中autotaxin、IL‐6及IL‐8水平，试剂盒由广州生物科技公司提供。另使用7180 日立全自动生化仪及配套试剂，免疫透射比浊法检测CRP水平。操作过程严格按照说明书进行。

1.5 统计学分析

采用SPSS 22.0统计软件进行数据分析。符合正态分布计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用两样本或配对t检验；非正态分布的计量资料以中位数（四分位数间距）［M（P25，P75）］表示，组间比较采用Mann‐WhitneyU检验。计数资料以例数和频率（%）表示，组间比较采用χ2检验或Fisher 确切概率法。绘制受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC） 曲线分析autotaxin水平对儿童RMPP的预测价值，曲线下面积（area under the cure，AUC）比较采用Z检验。相关性分析采用Pearson法。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 RMPP组和GMPP组患儿临床资料比较

RMPP 组患儿住院时间长于GMPP 组，高热、胸腔积液、肺实变、肺不张的比例，以及中性粒细胞百分比、乳酸脱氢酶及铁蛋白水平均高于GMPP 组，RMPP 组白蛋白水平低于GMPP 组（P＜0.05），见表1。

表1 RMPP组和GMPP组患儿临床资料比较

2.2 RMPP 组 和GMPP 组 血 清 和BALF 中autotaxin、IL‐6、IL‐8及CRP水平比较

RMPP 组血清和BALF 中autotaxin、IL‐6、IL‐8及CRP水平均高于GMPP组（P＜0.001），见表2。

表2 RMPP组和GMPP组血清和BALF中autotaxin、IL‐6、IL‐8及CRP水平比较 （±s）

表2 RMPP组和GMPP组血清和BALF中autotaxin、IL‐6、IL‐8及CRP水平比较 （±s）

注：［autotaxin］自分泌运动因子；［IL‐6］白细胞介素‐6；［IL‐8］白细胞介素‐8；［CRP］C‐反应蛋白；［GMPP］普通肺炎支原体肺炎；［RMPP］难治性肺炎支原体肺炎；［BALF］支气管肺泡灌洗液。

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2.3 RMPP 患儿急性期和恢复期血清和BALF 中autotaxin、IL‐6、IL‐8及CRP水平比较

RMPP患儿急性期血清和BALF中autotaxin、IL‐6、IL‐8及CRP水平均高于恢复期（P＜0.001）。见表3。

表3 RMPP患儿急性期和恢复期血清和BALF中autotaxin、IL‐6、IL‐8及CRP水平比较 （±s）

表3 RMPP患儿急性期和恢复期血清和BALF中autotaxin、IL‐6、IL‐8及CRP水平比较 （±s）

注：［autotaxin］自分泌运动因子；［IL‐6］白细胞介素‐6；［IL‐8］白细胞介素‐8；［CRP］C‐反应蛋白；［BALF］支气管肺泡灌洗液。

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2.4 血清autotaxin、IL‐6、IL‐8 及CRP 水平对儿童RMPP的预测价值

以RMPP 为研究对象，GMPP 作为参考线绘制ROC曲线，结果显示血清autotaxin水平最佳截断值为14.25 mg/L 时，其预测儿童RMPP 的AUC 大于IL‐6、IL‐8 及CRP（分别Z=6.217、7.248、6.105，P＜0.001），灵敏度为87.4%，特异度为83.7%。见表4和图1。

表4 血清autotaxin、IL‐6、IL‐8及CRP水平对儿童RMPP的预测价值

图1 血清autotaxin、IL‐6、IL‐8 及CRP 水平预测儿童RMPP的ROC曲线

2.5 BALF 中autotaxin、IL‐6、IL‐8 及CRP 水平对儿童RMPP的预测价值

以RMPP为研究对象，GMPP作为参考线绘制ROC曲线，结果显示BALF中autotaxin水平最佳截断值为10.86 mg/L时，其预测儿童RMPP的AUC大于IL‐6、IL‐8及CRP（分别Z=5.163、6.637、6.824，P＜0.05），灵敏度为81.4%，特异度为86.0%。见表5和图2。

图2 BALF中autotaxin、IL‐6、IL‐8及CRP水平预测儿童RMPP的ROC曲线

表5 BALF中autotaxin、IL‐6、IL‐8及CRP水平对儿童RMPP的预测价值

2.6 RMPP 患儿血清和BALF 中autotaxin 水平与各临床指标的相关性

Pearson 相关分析显示，RMPP 患儿血清和BALF 中autotaxin 水平‐5 IL‐6、IL‐8 及CRP 水平均呈正相关（P＜0.001）。见表6。

表6 RMPP患儿血清和BALF中autotaxin水平与各临床指标的相关性

3 讨论

近年来，RMPP发病率呈升高趋势，诊治难度大、病情较重、疗效不佳，常合并多种严重肺内外并发症，严重危及患儿生命［8］。本研究发现，RMPP 组患儿住院时间长于GMPP 组，高热、胸腔积液、肺实变、肺不张的比例，以及中性粒细胞百分比、乳酸脱氢酶及铁蛋白水平均高于GMPP组，RMPP 组白蛋白水平低于GMPP 组。目前RMPP 缺乏有效的生物学指标，严重影响了RMPP的早期诊断和临床治疗。因此，如何对RMPP进行有效的早期诊断尤为重要。autotaxin是一种被认为起源于脂肪组织的分泌型糖蛋白，在大多数情况下的生物液体中都可以检测到，包括血液和BALF，autotaxin 通过细胞外产生溶血磷脂酸参与许多慢性炎症疾病的发病机制过程，如血管内环境稳定、骨骼和基质重塑、淋巴细胞运输和免疫调节等，在慢性炎症疾病中具有重要意义［9］。研究认为，autotaxin在肺细胞和免疫细胞中具有多种作用，与血管炎症、糖脂代谢及肺部炎症反应有关［10］。

本研究中RMPP 组血清和BALF 中autotaxin 水平明显高于GMPP 组，且RMPP 患儿急性期autotaxin 水平明显高于恢复期。提示autotaxin 水平变化与RMPP发生和病情恢复程度有关；恢复期患儿病情得到有效控制，autotaxin 水平明显下降。autotaxin作为一种能够加强细胞迁移的因子，在生物体内发挥着广泛的生物学效应，其可能通过调节机体免疫炎症反应来参与RMPP的发病过程，具有很大的潜在应用价值。Gao 等［11］研究指出，血清autotaxin水平升高与病情进展有关，是预测急性肺损伤患者死亡的独立危险因子，可作为判断疾病严重程度和预后的生物学指标。

炎性细胞因子在RMPP的发病机制中起关键作用，炎性细胞因子水平升高是过度炎症反应的表现，是影响RMPP 发生发展的重要因素［12］。研究认为，过度的细胞免疫性反应和过高的炎性细胞因子表达在RMPP 发病过程中起着重要的作用［13-14］。IL‐6是一种重要的炎性细胞因子，具有很强的促炎作用，参与机体的炎症反应，在RMPP的发病过程起到很大的作用［15］。IL‐8主要由单核-巨噬细胞产生，具有促进炎症发展的作用，是判断呼吸道疾病严重程度的辅助指标［16］。CRP 是一种急性时相反应蛋白，在机体感染或炎症损伤时可显著升高，参与炎症反应过程，可作为监测感染性疾病严重程度的有效指标［17］。本研究显示，RMPP 组血清和BALF 中IL‐6、IL‐8 及CRP 水平均明显高于GMPP组，且RMPP患儿急性期IL‐6、IL‐8 及CRP 水平均明显高于恢复期。提示IL‐6、IL‐8及CRP 水平变化与RMPP 发病和病情恢复程度有关。这主要是机体感染病原体后，不同淋巴细胞与非淋巴细胞自发或受刺激后形成，促进IL‐6、IL‐8及CRP大量产生，最终炎性细胞因子之间的相互作用共同参与RMPP 发病和进展；恢复期患儿，炎症反应减轻，由促炎因子引发的过度炎症反应得到控制，减少了机体损害。关敏等［18］研究表明，血清IL‐6、IL‐8及CRP水平在MPP患儿急性期时显著升高，与病情严重程度有关，对重症MPP的诊断及病情评估均有很好的帮助。

本研究ROC 曲线分析显示，血清autotaxin 水平≥14.25 mg/L 或BALF 中autotaxin 水平≥10.86 mg/L时，其预测儿童RMPP 的AUC 均大于0.850，而且其AUC 均 大 于IL‐6、IL‐8 及CRP。说 明 血 清 和BALF 中autotaxin 水平对儿童RMPP 均具有较好的预测价值，有望作为预测儿童RMPP 的生物学指标。相关分析显示，RMPP 患儿血清和BALF 中autotaxin 水平与IL‐6、IL‐8 及CRP 水平均呈正相关，提示autotaxin 水平升高可能促进RMPP 患儿IL‐6、IL‐8及CRP的释放，引发过度的细胞炎症反应，进而共同参与RMPP的发生发展。既往研究认为，急性肺损伤患者血清autotaxin 水平明显升高，对促进内皮功能障碍有重要作用，与疾病的过度炎症和死亡有关［19］。

综上所述，RMPP 患儿血清和BALF autotaxin水平明显升高，其与病情恢复程度和炎性细胞因子有关，有望作为预测儿童RMPP 的生物学指标，对指导临床治疗具有一定帮助。但本研究为单中心的临床研究，样本选择可能存在偏倚，未来仍需大规模、多中心的前瞻性研究来进一步证实。