QuEChERS-GC-MS/MS法测定植物源性 食品中的百菌清

◎ 王 琴，张若良，王 静，杨慧敏

（赣州市食品药品检测所，江西 赣州 341000）

百菌清是一种多作用位点的保护性广谱杀菌剂，主要用于叶面喷洒，防治多种作物如蔬菜、果树和小麦等的多种病害，如早疫病、晚疫病、霜霉病、白粉病和叶斑病等[1-4]。百菌清在蔬菜和水果中的应用广泛，主要通过抑制孢子萌发和游动孢子运动而起作用。目前百菌清的检测方法有气相ECD检测法，该法前处理需要过柱等，较为烦琐，且样品基质干扰较大。本文建立了以QuEChERS为前处理方法，三重四极杆气质联用法测定植物源性食品中的百菌清，此法方便快捷且样品基质干扰较小，能快速、准确地检测出植物源性食品中的百菌清，检测结果可为植物源性食品的种植生产和流通监管提供参考[5]。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

样品均为市场采购，总共有13种，分别是番茄、梨、沃柑、芒果、火龙果、韭菜、大白菜、茄子、辣椒、胡萝卜、苹果、香蕉和甜瓜。

标准物质：百菌清（批号：T16A7T13207；HPLC≥98%），源叶生物；环氧七氯B（批号：07102KC），Accustandard；QuEChERS salts（4 g 硫酸镁+1 g氯化钠+1 g柠檬酸钠+0.5 g柠檬酸氢二钠），深圳逗点生物技术有限公司；QuEChERS净化管1（150 mg PSA+900 mg MgSO4），深圳逗点生物技术有限公司；QuEChERS净化管2（150 mg PSA+15 mg GCB+885 mg MgSO4），深圳逗点生物技术有限公司；乙腈为色谱纯，乙酸乙酯为农药残留级。

1.2 仪器与设备

TQ8050NX 气相色谱质谱仪，配有电子轰击源（EI），日本岛津公司；BP211D型万分之一电子天平和HLD-6002百分之一电子天平。

1.3 试验方法

1.3.1 气相色谱条件

色谱柱：SHIMADZU SH-RXi-5SilMS毛细管柱（30 m×250 µm×0.25 µm）；载气：高纯氦；碰撞气：高纯氩；柱温程序：100 ℃保持1 min，以30 ℃·min-1升温至270 ℃，保持4 min；进样口温度：260 ℃；进样量：1 µL；进样方式：不分流进样；进样量：1 µL。

1.3.2 质谱条件

检测器增益：相对于调谐结果，+0.30 kV；接口温度：270 ℃；溶剂延迟：5.0 min；电子轰击源：70 eV，离子源温度：200 ℃，接口温度：280 ℃；动态多反应监测（MRM），百菌清及内标的质谱参数见表1[1]。

表1 百菌清及内标的质谱参数表

1.3.3 溶液的制备

（1）内标溶液的制备。精密称取环氧七氯B约0.02 g置于10 mL容量瓶中，用乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，制得约2 mg·mL-1环氧七氯B溶液，再精密量取适量环氧七氯B溶液用乙酸乙酯稀释至5 µg·mL-1内标溶液。

（2）百菌清标准溶液制备。精密称取百菌清约0.015 g，置于10 mL容量瓶中，用乙酸乙酯溶解并稀释至刻度；精密量取百菌清标准溶液适量，逐级用空白基质稀释成质量浓度为 0 µg·mL-1、0.005 µg·mL-1、0.010 µg·mL-1、0.050 µg·mL-1、0.100 µg·mL-1、0.250 µg·mL-1和 0.500 µg·mL-1的百菌清标准系列工作溶液，用0.22 µm滤膜过滤，用于上机测定。

（3）样品溶液的制备。准确称取样品10 g，置于50 mL塑料离心管中，准确加入10 mL乙腈和QuEChERS salt及一颗陶瓷均质子，盖上离心管盖，剧烈振荡1 min后，4 200 r·min-1离心5 min。吸取6 mL上清液加到QuEChERS净化管1中，对于颜色较深的样品将6 mL上清液加到QuEChERS净化管2中，涡旋混匀1 min后，4 200 r·min-1离心5 min，准确吸取2 mL上清液于10 mL试管中，40 ℃水浴中氮气吹至近干。氮吹管中加入20 µL的内标溶液，1 mL乙酸乙酯复溶，过0.22 µm滤膜，用于上机测定。

2 结果与分析

2.1 线性范围

取1.3.3（2）的百菌清标准系列工作液，供气相色谱-质谱联用仪测定。以标准溶液质量浓度和内标质量浓度的比值为横坐标，以定量离子峰面积和内标定量离子峰面积的比值为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。当百菌清浓度在0～0.5 µg·mL-1，得到线性回归方程为Y=8.983 0X-0.067 599，相关系数为0.999 1，线性良好。

2.2 回收率试验

取阴性样品（样品中百菌清结果为未检出），精密称取阴性样品9份，每份取样量为10 g。将这9份阴性样品分为3组[6]。每组3份阴性样品，分别加入百菌清标准溶液适量，3组样品加标量分别为0.10 µg、0.25 µg、1.25 µg，按1.3.3（3）样品溶液的制备进行制备，上机测定含量，计算回收率，结果见表2。

表2 回收率测定结果表

2.3 精密度试验

取标准溶液浓度为0.1 µg·mL-1的百菌清，连续进样5针，记录百菌清定量离子峰面积，再分别计算各成分峰面积的RSD。试验得到5针百菌清标准物质的峰面积平均值为4 938，精密度为1.8%，可见此方法测定百菌清稳定性和重复性良好。

2.4 样品测定

取13种蔬菜水果每个品种各一批，共计13批，分别按1.3.3（3）制备样品溶液，供上机测定。百菌清标准图谱、样品阴性结果图谱和样品阳性结果图谱（样品中检出百菌清）结果分别见图1、图2与图3。

图1 百菌清标准溶液测定图谱图

图2 阴性样品测定图谱图

图3 阳性样品测定图谱图

2.5 重复性试验

取“2.4”项下阳性样品5份，测定其含量，结果见表3。

表3 重复性试验结果表

3 结论与讨论

3.1 讨论

①提取溶剂的选择。乙腈作为QuEChERS法中最常用的提取溶剂，适用于提取极性范围较宽的农药，对蔬菜水果含水量较高的样品可直接提取。②质谱条件的选择。

色谱柱应选用强极性的色谱柱，试验前选用SHIMADZU毛细色谱柱SH-Rtx-1701（30 m×250 µm×0.25 µm），百菌清在50～60 min出峰，时间过长，故采用SHIMADZU毛细色谱柱SH-RXi-5SilMS（30 m×0.25 mm×0.25 µm），百菌清在6.4 min出峰。结合常规农药残留检验基础，参考岛津农药数据库，并以基质加标进行验证，多反应检测扫描方式响应高，干扰小，利于植物源性食品中百菌清的检测。

3.2 结论

本文的样品制备方法、气相色谱条件和质谱条件适合百菌清的检测。其中QuEChERS技术应用于样品前处理，处理速度快，溶剂使用量少，百菌清回收率以及精确度和准确度高。本文建立的以QuEChERS为前处理方法，三重四极杆气质联用法方法能快速、准确地检测出植物源性食品中的百菌清，为百菌清的检测提供了一种高效的新方法。