黄颡鱼养殖中迟钝爱德华细菌的抗生素、生物防治试验

简康

（济宁市渔业发展和资源养护中心，山东 济宁 272115）

黄颡鱼（），俗称昂刺鱼（黄骨鱼，黄拉丁，嘎鱼），属鲶形目，鲿科，黄颡鱼属，是常见的底栖杂食性鱼类，在我国大部分地区的天然水体中均有分布。其肉质嫩、细刺少、味鲜美、营养价值高，在日本、韩国、东南亚等国家有巨大的市场，是出口创汇的优良品种，也是济宁地区近几年主要推广品种之一。黄颡鱼在自然水域中生长速度缓慢，上市规格小，无法满足市场的需求,因而黄颡鱼市场售价高，养殖效益较好。在养殖过程中，黄颡鱼体常感染迟钝爱德华细菌，出现“红头病”症状，给渔业养殖户造成了损失。济宁市渔业发展和资源养护中心于2015年对黄颡鱼养殖过程中出现的主要病害“红头病”，进行了致病菌的鉴定以及抗生素、生物防治试验，旨在解决黄颡鱼“红头病”难防难治的问题。

1 材料与方法

1.1 池塘

试验地位于济宁市水产良种繁育基地3个标准化池塘，分别为1—3号，其中3号池塘为对照池塘。面积均约0.1 hm，水深均约1.5 m，底泥厚均约25 cm，其进水排水方便，水质良好，每个池塘均符合标准化池塘相关要求。

放鱼前15 d，对池塘干法清塘消毒，每667 m使用生石灰75～90 kg全池泼洒。每个池塘中心位置安装1台3 kW的增氧机。池塘消毒后第2 d，加注水至0.8～1.0 m深；第3 d，按4 500 kg/hm投入发酵好的腐熟有机肥，培育水体天然饵料；第10天，加注水至1.5 m深，再用225 kg/hm漂白粉全池泼洒；第16天投放鱼苗。

1.2 苗种放养

试验苗种符合检验检疫要求，体格健壮，规格为20～40 g/尾，无出血、烂鳃、肠炎等疫病现象。于4月30日投放，密度为30 000尾/hm。

1.3 日常管理

于每日早、中、晚巡塘，认真观察鱼类活动、摄食与生长情况，遇到问题及时处理。池塘每隔10 d注入20～30 cm新水，阴雨闷热高温天气要及时开启增氧机。饲料投喂按照“定质、定时、定位、定量”要求，投饲量以1 h内吃完为宜。黄颡鱼开口料以粒径2.0～5.0 mm颗粒饲料为主，成鱼料以5.0 mm颗粒饲料为主，一般以浮性饵料为主。池水的pH值为7.0～8.0，以保证鱼类正常生长。每隔15 d，用300 kg/hm生石灰全池泼洒消毒1次，改善水质。

2 试验

2.1 仪器与试剂

恒温培养箱、无菌工作台、生物显微镜、血球计数板、18 mm×180 mm试管、高压灭菌锅、100～1 000μL移液枪及枪头。

MHA培养基、0.65%无菌生理盐水、PCA培养基。

2.2 鱼种

8月中旬，黄颡鱼鱼种生长至体长（12±1）cm时，可以开始池塘内致病菌泼洒感染试验。

2.3 菌液洒

2.3.1 泼洒浓度

迟钝爱德华细菌的菌液在37℃下培养48 h后，经过血球计数板稀释后计数，浓度达到10cfu/mL。每个池塘各泼洒2 000 mL发酵后的菌液。

2.3.2 泼洒剂量

菌液泼洒剂量3个池塘均一样。

2.3.3 观察池塘

观察周期为4周，迟钝爱德华细菌泼洒到池塘之后，时刻关注3个池塘内黄颡鱼的吃食、活动、水质情况等。池塘中的黄颡鱼如果出现明显吃食量下降、巡边独游、在水中旋转等现象，需详细记录。发现死鱼，捞出后进行无害化处理。每次投喂需定量并记录。

2.3.4 水质检测

试验开始前1 d，检测1次池塘水样，参数为pH值、水温、化学需氧量（COD）、氨氮、亚硝态氮；感染致病菌之后24 h、96 h各检测水质1次。鱼体出现明显症状后，每隔5 d检测1次，连续28 d，水质采样依照《水质采样技术指导》（HJ 494—2009）要求执行。

2.3.5 治疗方案

菌液洒泼洒3个池塘，其中3号池为对照池塘，泼洒之后不采取任何防治措施，1号池、2号池塘在泼洒迟钝爱德华细菌的同时进行病害防治处理。试验结束后，对池塘鱼回捕。

2.3.5.1 生物防治

1号池塘选择益生菌（益生菌为实验室从土壤中分离的枯草芽孢杆菌）进行生物防治。开始感染时，池塘同时泼洒致病菌和益生菌；此后每隔5 d泼洒1次益生菌，持续4周，每日记录池塘情况。试验结束后，对池塘鱼回捕，记录捕获的健康黄颡鱼数量。

2.3.5.2 抗生素治疗

2号试验池选择诺氟沙星、恩诺沙星进行综合治疗（因为迟钝爱德华细菌容易对抗生素产生耐药性）。药物拌在饲料中，配比为1 kg饲料中加入1 g恩诺沙星和1 g诺氟沙星。拌药饲料每天定时定点投喂，分别于11：00、17：00各投喂1次。发病症状出现之后，治疗持续2周，然后对鱼类回捕，统计存活试验鱼数量，计算死亡率。

3 结果与分析

3.1 结果

采用不同处理方案的养殖试验结果见表1。由表1可见，1号池塘采用益生菌进行生物防治，发病鱼最少；2号池塘在发病时及时采取敏感抗生素治疗，疫情也得到了有效控制；不采取任何防治措施的3号池塘发病情况严重。

表1 采用不同处理方案的养殖试验结果

3.2 池塘水质参数

水体pH值、水温、COD值的监测持续了4周，测定了7次，结果发现水体pH值没有明显变化，池塘水温维持在25～26℃，也没有明显变化。1号池塘的COD值为0.25～0.53 mg/L，随时间的变化持续降低；2号池塘COD值为0.40～0.51 mg/L，先降低后逐步升高。3号池塘COD值为0.52～0.76 mg/L，随时间延长逐渐升高，反映出水体在喷洒致病菌后，水质有恶化趋势，见表2。

表2 不同处理方案的池塘COD监测结果 mg/L

不同处理方案的池塘氨氮监测结果见表3。由表3可见，1号池7次测定的氨氮值为1.77～0.98 mg/L，呈现逐渐下降趋势；2号池的氨氮值为1.72～1.99 mg/L，呈现逐渐升高趋势；3号池氨氮为1.74～2.57 mg/L，升高幅度大于2号池。

表3 不同处理方案的池塘水质氨氮监测结果 mg/L

不同处理方案的池塘水质亚硝态氮监测结果见表4。由表4可见，1号池的亚硝态氮值随时间的变化持续降低，从0.220 mg/L降低到0.091 mg/L。2号池亚硝态氮值变化较小。3号池塘亚硝态氮值随时间变化略有升高，水质有恶化趋势。

表4 不同处理方案的池塘水质亚硝态氮监测结果 mg/L

养殖试验结束后黄颡鱼回捕结果见表5。由表5可见，1号池塘无发病情况，且捕捞率达到94.2%；2号池塘回捕率也达到了83.3%；3号池塘回捕率只有19.6%，回捕率远低于1号池塘、2号池塘，差距非常明显。

表5 养殖试验结束后黄颡鱼回捕结果

4 结论

试验结果证明，1号池喷洒的枯草芽孢杆菌能够明显抑制迟钝爱德华细菌的生长，而且在池塘感染试验过程中，明显抑制池塘内黄颡鱼的发病。2号池塘在出现发病症状之后第一时间进行抗生素的拌料投喂，虽然有鱼发病死亡，但是经过25 d的治疗，鱼未发病死亡，基本遏制了迟钝爱德华细菌造成的损失。3号池塘为对照池塘，感染之后出现大批持续死亡现象，说明在池塘内的迟钝爱德华细菌浓度在持续增长，黄颡鱼自身的免疫力可能降低，池塘持续有病鱼、死鱼出现。

池塘的COD、氨氮、亚硝态氮3个检测指标的变化趋势相近，均表现为1号池水质改善，2号池略有变化，3号池水质恶化的趋势。试验结果显示，枯草芽孢杆菌对致病菌生长具有拮抗作用，能有效预防水产动物病害发生。

枯草芽孢杆菌菌体生长过程中产生的许多活性物质，如枯草菌素、制霉菌素、多黏菌素和短杆菌肽等，对致病菌或内源性感染的条件致病菌有明显的抑制作用。

5 结语

试验表明，采用生物防治方法，定期定量喷洒益生菌能够明显抑制致病菌迟钝爱德华细菌繁殖，进而抑制黄颡鱼“红头病”的发生。养殖生产中，如果池塘管理不善，不慎发生了黄颡鱼“红头病”，应采用多种组合治疗方案，一方面喷洒益生菌，抑制病菌生长，改善水质，提高存塘鱼的免疫力；另一方面，采用恩诺沙星和诺氟沙星等敏感抗生素，及时治疗，减少损失。