脓毒症患者肠道细菌紊乱与PCT、D-乳酸、内毒素水平的相关性

王溪 黄桔秀 王颖 朱海勇 陈燕

1.台州市中心医院（台州学院附属医院）全科医学科，浙江台州 318000；2.台州市中心医院（台州学院附属医院）急诊科，浙江台州 318000；3.临海市第一人民医院ICU，浙江台州 317000；4.浙江省台州医院特需病房，浙江台州 317000

脓毒症是一种全身炎症反应综合征，是严重感染、外科手术后常见的并发症，主要临床症状有呼吸急促、心率加快等，具有患病率高、死亡率高的特点。据相关流行病学调查结果显示，细菌、病毒、真菌等病原体感染为其主要危险因素。降钙素原（procalcitonin，PCT）是甲状腺C 细胞产生的一种蛋白质，D-乳酸（D-Lactate，D-LA）是肠道细菌发酵的产物；内毒素（endotoxin，ET）是菌体毒性物质的总称，位于细胞壁最外层。本文研究中对PCT、D-乳酸、内毒素表达检测，旨在探究PCT、D-乳酸、内毒素在脓毒症中的表达以及三者在该病中与肠道细菌紊乱关系的相关性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2020 年1 月～2021 年1 月台州市中心医院收治的脓毒症患者56 例设为脓毒症组，其中轻度脓毒症患者32 例，重度脓毒症患者24 例，另选取同期体检的健康志愿者30 名设为健康组做对照。脓毒症组男29 例，女27 例，平均年龄（45.5±15.6）岁，平均体质量指数（23.1±2.4）kg/m；健康组男17 例，女13 例，平均年龄（47.5±16.4）岁，平均体质量指数（24.5±2.8）kg/m。两组研究对象年龄、性别、体质量指数比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究经台州市中心医院批准。

纳入标准：①符合《2012 国际严重脓毒症及脓毒性休克诊疗指南》 中的关于脓毒症的诊断标准，确诊为脓毒症肠道细菌紊乱患者；②所有患者临床资料齐全，且自愿参与本次研究。

排除标准：①妊娠期或哺乳期女性；②患有自身免疫类疾病者；③患有过敏性疾病者；④患有动脉粥样硬化者。

1.2 检测方法

1.2.1 粪便常规检查检测研究对象肠道菌群情况采集所有研究对象1 g 粪便，置于厌氧试管中，加入磷酸缓冲盐溶液，震荡均匀，2000 r/min 离心15 min，收集上清液，将该混合液稀释度标记为10-1；厌氧试管中加入150 μl，添加0.9%氯化钠注射液100 μl，混合均匀，将此标本稀释度标记为10-2，继续稀释至10-8。将琼脂培养基置于沸水中直至溶化，放置于48℃恒温水中待用，将60 μl 细菌混悬液于加入平皿上，倾注琼脂培养基混合混匀，恒温培养48 h。

1.2.2 酶联免疫吸附法检测PCT、D-乳酸、内毒素水平采集所有研究对象静脉血5 ml，1000 r/min 离心5 min，-50℃备用。将待测血清加入加稀释液将进行稀释，酶标板置于桌面，每孔加入100 μl，胶纸封住反应孔，将其充分混合均匀，37℃静置50 min，弃反应液，每孔注满洗涤液，浸泡2 min，甩干，洗涤3 次，每孔加入生物素化抗体40 μl，胶纸封住反应孔，恒温孵育40 min，每孔注满洗涤液，浸泡2 min，甩干洗涤3次，每孔加入加酶标抗体40 μl，胶纸封住反应孔，恒温静置30 min，每孔加入显色剂40 μl，避光显色15 min，每孔加入终止液40 μl，待其混合均匀，在全自动酶标仪450 nm 波长处测量PCT、D-乳酸、内毒素水平。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 两组肠道菌群失调比较

与健康组比较，脓毒症组患者肠道菌群失调率较高，差异有统计学意义（P＜0.05）。与轻度脓毒症患者比较，重度脓毒症患者肠道菌群失调率较高，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两组肠道菌群失调程度比较[n（%）]

2.2 两组血清PCT、D-乳酸、内毒素水平比较

与健康组比较，脓毒症组患者PCT、D-乳酸、内毒素水平较高，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 两组血清PCT、D-乳酸、内毒素水平比较（）

2.3 脓毒症组不同程度脓毒症患者血清PCT、D-乳酸、内毒素水平比较

与轻度脓毒症患者比较，重度脓毒症患者PCT、D-乳酸、内毒素水平较高，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 脓毒症组不同程度脓毒症患者血清PCT、D-乳酸、内毒素水平比较（）

2.4 脓毒症组患者APACHEⅡ、MAGE 比较

与轻度脓毒症患者比较，重度脓毒症患者APACHEⅡ评分较高，MAGE 水平较高，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表4。

表4 脓毒症组患者APACHEⅡ、MAGE 比较（）

2.5 Logistic 回归分析脓毒症患者肠道细菌紊乱与PCT、D-乳酸、内毒素相关性

脓毒症患者肠道细菌紊乱作为因变量，PCT、D-乳酸、内毒素为自变量进行多因素Logistic 回归分析，结果显示，PCT、D-乳酸、内毒素为脓毒症患者肠道细菌紊乱的发生因素，与脓毒症患者肠道细菌紊乱的发生相关，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表5。

表5 Logistic 回归分析脓毒症患者肠道细菌紊乱与PCT、D-乳酸、内毒素相关性

2.6 PCT、D-乳酸、内毒素相关性分析

使用Pearson 对PCT、D-乳酸、内毒素相关性分析发现，PCT、D-乳酸呈正相关（r=0.781，P=0.001）；PCT、内毒素呈正相关（r=0.696，P=0.001）；D-乳酸、内毒素呈正相关（r=0.670，P=0.001）。

3 讨论

脓毒症是由病原微生物侵入人体任何部位后感染而引起，是临床常见的疾病之一。据国外流行病学调查结果显示，脓毒症的病死率已超过心肌梗死成为非心脏病死亡主要原因。脓毒症发病机制多样，可能与立克次体、螺旋体等病原细菌感染相关，主要表现为心率加快、白细胞增加等。近年来，我国脓毒症患病率及病死率逐年上升，已成为研究热点。

本文研究显示，脓毒症患者血清中PCT 水平较高。PCT 是一种单拷贝基因，位于11 号染色体上，可反应出全身炎症反应的活跃度。相关学者调查结果发现，脓毒症患者存在肠道细菌紊乱情况，可能与患者免疫应答紊乱相关。另据廖宴等研究显示，脓毒症患者的严重程度和预后可由PCT、CRP 水平及血小板相关参数评估。本研究结果发现，PCT 在脓毒症患者血清中水平较高，且随着病情的加重水平随之上升，重度脓毒症患者血清中PCT 水平较高，PCT 水平变化与脓毒症患者肠道细菌紊乱具有相关性，可作为脓毒症患者肠道细菌紊乱的检测指标，D-乳酸又称D-2-羟基丙酸，是一种化工中间体。有关研究显示，急性胃肠损伤分级、D-乳酸、内毒素均是脓毒症患者的独立危险因素，三者联合可较准确预测脓毒症患者的预后。

本文研究显示，脓毒症患者血清中内毒素水平较高。内毒素是革兰阴性杆菌的细胞壁的成分之一，覆盖于细胞壁的黏肽上，耐热性较强，可引起机体微循环障碍等。相关调查结果显示，降钙素原、血乳酸、内毒素水平随着病情的加重水平随之上升，可作为评估重症肺炎合并脓毒症病情严重程度的指标。本研究结果发现，随着脓毒症患者病情的加重患者血清中内毒素水平随之升高，内毒素水平在重度脓毒症患者血清中呈现高表达，且其水平变化和脓毒症患者肠道细菌紊乱呈现出相关性，可用于脓毒症患者肠道细菌紊乱的诊断。

图1 PCT、D-乳酸、内毒素相关性分析图

综上所述，本文中对脓毒症患者肠道细菌紊乱与PCT、D-乳酸、内毒素的关系研究结果发现，PCT、D-乳酸、内毒素在脓毒症肠道细菌紊乱患者血清中水平异常上升，且随着病症的不断加重，PCT、D-乳酸、内毒素的水平随之升高，有望成为诊断脓毒症肠道细菌紊乱患者病情严重程度的临床指标。