一种免洗手消毒剂的消毒性能评价

李海伟

上海柯珑清洁技术有限公司，上海，201600

随着社会的不断发展，人们的卫生意识逐渐增强，同时对消毒产品的市场需求也在不断增加。消毒产品是指纳入消毒产品生产类别分类目录的消毒剂、消毒器械、指示物和卫生用品等与人体健康相关的产品[1,2]。免洗手消毒剂是消毒后不需要用水冲洗的手消毒剂，其剂型包括水剂、凝胶和泡沫型[3]；免洗手消毒剂属于消毒产品中的消毒剂，可在无水、缺水的场所使用，深受广大医务工作者、消费者的喜爱。目前市场上免洗手消毒剂种类较多，但有的是以醇类为主要有效杀菌成分，醇的气味较大，并且易引起个别人群不适（如过敏、皮肤干燥脱脂等）；有的免洗手消毒剂的黏度较高或较低，不利于均匀涂布于皮肤；有的消毒剂成分不稳定，启封使用后有效期短[4]。

季铵盐类是低效消毒剂，广泛应用于医疗、食品、日化等行业的卫生控制，季铵盐复配其他成分后可显著提高杀菌效果[5]。结合现有免洗手消毒剂情况和季铵盐类消毒剂的优点，本研究选用季铵盐类为主要杀菌成分，复配表面活性剂、保湿剂、稳泡剂等，研制出一种气味低、易于涂布、启封后成分稳定和启封后有效期长的泡沫型免洗手消毒剂（以下简称“免洗手消毒剂”）。

1 材料与方法

1.1 试验材料

本研究的免洗手消毒剂，复配后其主要成分是0.14%苯扎氯铵、表面活性剂、保湿剂、稳泡剂等，为无色澄清液体，pH值为7.01，与泡沫泵头配合使用即可挤压出细腻泡沫。

试验菌株购自中国工业微生物菌种保藏管理中心，活化后选用第4～8代的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa, ATCC 15442)；第5～6代真菌：白念珠菌(Candida albicans，ATCC 10231)；以及第9～11代的细菌：金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus, ATCC 6538)和大肠埃希菌(Escherichia coli, 8099)。

1.2 理化性能测试方法

1.2.1 含量与稳定性测定（加速试验法）

该免洗手消毒剂（苯扎氯铵）的含量、稳定性的测试，遵照2002年版《消毒技术规范》(以下简称“消规”)中的条款2.2.1.2.14和条款2.2.3.2.1进行：取包装完好的消毒剂成品，检测苯扎氯铵（M=358）的含量，然后放置在36～38℃的恒温箱内3个月后，再次测定其有效成分含量[6,7]。

1.2.2 启用后的使用有效期检测

参照GB 27950—2020《手消毒剂通用要求》。

1.2.3 铅、砷、汞的测定

铅（以Pb计）、砷（以As计）和汞（以Hg计）的含量参照《化妆品安全技术规范》(2015年版)进行检测。

1.3 微生物杀灭效果评价

1.3.1 中和剂鉴定试验

按照WS 628—2018《消毒产品卫生安全评价技术要求》及消规中的要求[1-2]，按不同的受试微生物进行实验，分别设计6组。

1.3.2 菌悬液定量杀菌试验

在室温（20±1）℃的环境中，向无菌试管内先后各加入0.5 ml的菌悬液和有机干扰物,然后再加免洗手消毒剂原液4.0 ml,立即混合均匀（用电动旋涡震荡混合器）。与受试微生物分别作用0.5 min、1 min和1.5 min后，用中和剂中和消毒剂然后取样计数培养。

1.3.3 现场手消毒试验（卫生手）

参照消规中的条款2.1.2.6，用免洗手消毒剂原液，对受试者进行手部消毒，作用时间1 min。

1.4 毒理性能评价[1]

1.4.1 急性经口毒性试验

用体重达到（20±2） g/只要求的ICR小鼠[SPF级别，采购自斯贝福（北京）生物技术有限责任公司]，雌雄各占总数的50%，数量20只，合格证号编号SCXK-(京)2019-0010。饲料来源：北京科澳协力饲料有限公司，合格证号编号SCXK-(京)2019-0003。所设剂量为5 g/kg·bw，采用24 h一次经口灌胃（2 ml/100 g·bw）方式试验。

1.4.2 多次完整皮肤刺激试验

采购体重2.1～2.4 kg的健康成年日本大耳白色家兔3只[普通级别，繁育单位：天津裕达实验动物养殖有限公司，合格证号编号SCXK（津）2016-0001]，饲料来源同1.4.1。参照消规中的条款2.3.3.4.2，采用手术剪在实验前24 h分别去掉白色家兔背部脊椎左右两边的被毛，不得损伤皮肤，去毛区域范围左右各为3 cm×3 cm。第二天将受试物（免洗手消毒剂原液）0.5 ml涂敷在一侧皮肤表面，另一侧涂敷清水，涂敷受试区域范围为2.5 cm×2.5 cm。在240 min后用温水清洗受试皮肤，以去除免洗手消毒剂原液。每天涂抹一次，连续涂抹14d，每次涂抹后24 h观察结果并记录皮层局部反应及皮肤刺激强度，同时并进行评分。

1.4.3 微核试验

用体重为25～28 g的健康成年ICR小鼠50只（供应商同1.4.1）。其中受试物分低、中、高3个剂量组，即剂量分别为500 mg/kg·bw、2 000 mg/kg·bw、5 000 mg/kg·bw，每组动物数10只雌雄各半，灌胃法ICR小鼠给药剂量是2 ml/100 g·bw。同时设阴性和阳性对照组，阴性对照组小鼠灌胃给予稀释用的溶剂（水），阳性对照组小鼠以剂量40 mg/kg体重灌胃给予环磷酰胺。本试验采用2次给药法，2次给药间隔24 h，于第2次给药后6 h取股骨骨髓制片。

2 结果

2.1 理化性能试验结果

该免洗手消毒剂未添加香精和色素，是无色澄清的液体，其主要有效成分含量（苯扎氯铵）是0.13%。该免洗手消毒剂密封包装的成品，经加速稳定性试验（37℃，3个月）前后样品原液，主要有效成分含量由0.143%降低到0.139%，有效成分含量下降率为2.8%，产品稳定性（贮存有效期二年）符合消规的要求。该免洗手消毒剂pH值平均为7.1。该免洗手消毒剂原液中砷（以As计）＜0.01 mg/kg，铅（以Pb计）＜1.5 mg/kg，汞（以Hg计）＜0.002 mg/kg符合相关法规要求。启用后的使用有效期结果见表1。

表1 产品启用后使用有效期内样品中有效成分（苯扎氯铵）的含量及平均下降率

样品在启用后90 d、120 d的有效成分(苯扎氯铵)含量下降率均＜10%；在启用后0 d、90 d、120 d有效成分(苯扎氯铵)含量均未低于产品下限值0.126%,且细菌总数均＜10 CFU/ml,产品启用后使用有效期可定为120 d；与市场同类产品相比，本款免洗手消毒剂的启用后有效期更久。

2.2 杀菌试验结果

2.2.1 中和剂鉴定试验

结果显示，选择大肠埃希菌和白念珠菌作为试验菌株，使用D/E中和肉汤溶液中和剂，可有效中和最高浓度消毒剂的残留作用,且中和后的产物不影响受试培养基及受试微生物的生长,表明此中和剂满足试验的要求（表2）。

表2 中和剂鉴定试验结果

2.2.2 杀菌试验结果

经三次重复试验结果显示，将该免洗手消毒剂原液作用于受试菌，作用0.5 min、1 min和1.5 min后，对各受试微生物的杀灭对数值均高于4（表3）。

表3 免洗手消毒剂的杀灭效果

2.2.3 现场手消毒试验结果

经30人次模拟样本试验证明，该免洗手消毒剂原液作用1 min，对卫生手表面的自然菌杀灭对数值均达到1.8以上，符合消规中的规定（表4）。

表4 卫生手消毒现场试验结果

2.3 毒性试验结果

2.3.1 急性经口毒性试验

染毒（样品原液霍恩氏法）后实验小鼠未观察到任何给样相关的明显中毒体征，14d观察期间雌、雄动物均无死亡发生；实验完成后采用安乐死法处死的小鼠，未发现小鼠的各个脏器有异常。由实验而知该免洗手消毒剂（原液）对雌、雄小鼠的LD50（经口半数致死量）均大于5 000 mg/kg体重，属实际无毒消毒剂。

2.3.2 多次完整皮肤刺激试验

试验结果显示，在本试验条件下，该免洗手消毒剂（原液）对家兔的皮肤刺激反应平均积分为0.81，根据消规中条款2.3.3皮肤刺激试验，对试验样品多次完整皮肤刺激强度判定为轻刺激性。

2.3.3 微核试验

试验结果显示，在本试验条件下，试验样品免洗手消毒液对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验的检测结果为阴性，符合GB 27950—2020《手消毒剂通用要求》及消规的要求。

3 讨论

新型冠状病毒的防疫依然不可松懈，尤其是在秋冬季节，更应该加强防护[8]。个人防护的“三件套”和“五还要”还要继续执行，尤其是在缺水或无水的条件下，尽量使用免洗类消毒剂进行消毒防护。本研究结果表明，该免洗手消毒液对细菌和真菌均具有比较好的杀灭效果，且启用后产品的有效期可达到120d；解决了现有市场上同类产品，醇味较大、启用后有效期短的问题。本研究缺少对外科手术进行现场消毒测试，后续需加测，以便医务工作者也可使用。该制剂配方科学合理，不添加香精和色素，特别适用于食品行业从业人员的手部消毒。由于现场实际情况较为复杂（如温度、湿度、

空间洁净度等均处于动态），建议本免洗消毒液启用后尽快用完。