血清lncRNA SNHG5与老年结直肠癌患者临床病理的关系及其诊断价值

于永洋 张福星 刘昭晖 黄耘 王思力

(厦门大学附属第一医院 1普外科，福建 厦门 361000；2血液科)

结直肠癌是消化系统常见的恶性肿瘤，多发于中老年人，我国结直肠癌的发病率和病死率在所有恶性肿瘤中均位于第5位，且还在呈上升的趋势〔1〕。由于早期结直肠癌可无明显症状，待病情发展至一定阶段时才会出现排便习惯改变、血便、腹痛等缺乏特异性的症状，因此大部分患者都是在中晚期才确诊，错过了最佳治疗的时机〔2〕。据统计在疾病早期结直肠癌的5年生存率为95%，而晚期则下降到35%〔3〕，由此可见尽早诊断对改善患者的预后具有重要的意义。长链非编码RNA(lncRNA)可参与调控DNA甲基化、基因组印记、组蛋白修饰、转录激活、转录干扰等，目前已有研究证实〔4，5〕，lncRNA在多种恶性肿瘤中均存在表达失调，并对疾病的发生、发展起到重要的作用。lncRNA小核仁RNA宿主基因(SNHG)5是与多种恶性肿瘤密切相关的lncRNA，相关研究显示〔6〕，外周血中lncRNA SNHG5对非小细胞肺癌有较高的诊断价值，细胞实验证实〔7〕，lncRNA SNHG5可促进结直肠癌细胞的增殖、转移和迁徙。然而目前尚不清楚血清lncRNA SNHG5对结直肠癌是否有辅助诊断价值，本研究旨在分析血清lncRNA SNHG5与老年结直肠癌患者临床病理的关系，并分析其与肿瘤标志物对结直肠癌的诊断价值。

1 资料与方法

1.1研究对象 选取2018年1月至2020年4月在厦门大学附属第一医院接受治疗的结直肠癌患者74例作为结直肠癌组，另选取30例同时期在厦门大学附属第一医院接受治疗的结直肠息肉患者作为息肉对照组，30例同时期在厦门大学附属第一医院体检的健康志愿者作为健康对照组。3组一般资料均无统计学差异(P>0.05)，见表1。纳入标准：①所有患者经病理确诊；②入组前未接受放化疗等任何形式的治疗；③均为首次发病；④均为年龄>60岁的老年患者；⑤对本次研究内容知情同意。排除标准：①合并有血液系统疾病、免疫功能障碍者；②合并有除结直肠癌之外的恶性肿瘤；③合并肝肾等重要脏器功能不全者；④合并全身感染性疾病者。

表1 3组一般资料比较

1.2方法 抽取3组空腹状态下的静脉血5 ml，离心10 min(3 000 r/min)后提取血清，置于-70℃的冰箱中保存待测。采用Trizol试剂(Invitrogen公司)提取血清中的总RNA，在分光光度计(Thermofisher公司，ND1000)确定RNA纯度和浓度，结果满意后进行逆转录反应，采用逆转录试剂盒(PrimeScriptTM RT Master Mix)对总RNA进行反转录反应得到cDNA，采用实时荧光定量PCR法检测血清lncRNA SNHG5的相对表达量。lncRNA SNHG5的引物如下，正向：5′-TACTGGCTGCGCACTTCG-3′，反向：5′-CAGTAAAAGGGGAACACCA-3′；内参基因 GAPDH的引物如下，正向：5′-CTCTTCCAGCCTTCCTTCCT-3′，反 向 ：5′-AGCACTGTGTTGGCGTACAG-3′。反应条件：95℃ 5 min；95℃ 30 s，60℃ 30 s，72℃ 30 s，35个循环。采用2-ΔΔCt计算lncRNA SNHG5相对表达量。 采用全自动电化学发光免疫分析仪(Roche，E170)检测血清癌胚抗原(CEA)及糖类抗原(CA)199的水平。

1.3统计学方法 采用SPSS23.0软件进行t检验、方差分析、LSD-t检验、Pearson相关分析。 受试者工作特征(ROC)曲线分析预测诊断评估价值。

2 结 果

2.1血清lncRNA SNHG5、CEA、CA199比较 3组血清lncRNA SNHG5、CEA、CA199整体比较差异均有统计学意义(均P<0.001)，结直肠癌组血清lncRNA SNHG5、CEA、CA199水平明显高于息肉对照组和健康对照组(P<0.05)，息肉对照组和健康对照组的血清lncRNA SNHG5、CEA、CA199水平比较差异无统计学意义(P>0.05，P<0.001)，见表2。

表2 3组血清lncRNA SNHG5、CEA、CA199比较

2.2结直肠癌患者血清lncRNA SNHG5与临床病理特征的关系 结直肠癌患者血清lncRNA SNHG5与性别、年龄均不相关(P>0.05)，与肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移及分化程度有关(P<0.05)，见表3。

表3 结直肠癌患者血清lncRNA SNHG5与临床病理特征的关系

2.3结直肠癌患者血清lncRNA SNHG5与CEA、CA199的相关性分析 结直肠癌患者血清lncRNA SNHG5与CEA、CA199均呈正相关(r=0.478、0.362，P=0.000、0.002)。

2.4血清lncRNA SNHG5与CEA、CA199对结直肠癌患者的诊断价值分析 进一步探讨血清lncRNA SNHG5与CEA、CA199对结直肠癌患者的诊断价值，以结直肠癌组为阳性样本，以健康对照组、息肉对照组为阴性样本，建立ROC诊断分析模型。三指标均参考临床实践划分成8～12个组段。经ROC曲线分析知：各指标均具有较高的诊断价值，LncRNA ROC曲线下面积(AUC)分别为0.784、0.763、0.746。联合应用对结直肠癌患者的预测/诊断价值：AUC为0.876。显然其诊断效能比单一指标均有明显提高。见表4和图1。

表4 血清lncRNA SNHG5与CEA、CA199对结直肠癌患者的诊断价值分析

图1 血清lncRNA SNHG5与CEA、CA199诊断结直肠癌的ROC曲线

3 讨 论

2018年结直肠癌新发病例约128万，死亡病例约88万，我国是结直肠癌高发的国家，发病率和死亡例数均位居全球第一〔8，9〕。血清肿瘤标志物检测是临床诊断恶性肿瘤的重要手段，《中国结直肠癌诊疗规范(2017年版)》中明确指出结直肠癌患者在诊断、治疗前、评价疗效和随访时必须检测相关肿瘤标志物：CEA及CA199〔10〕，但采用CEA、CA199诊断依然存在一定的误诊和漏诊的情况，其诊断价值有待进一步提高。随着分子生物学技术的发展，lncRNA逐渐成为恶性肿瘤领域研究的热点，部分lncRNA与肿瘤的恶性增殖、侵袭浸润等多种生物学活动密切相关，结肠癌相关转录因子1、肺癌转移相关转录本1等lncRNA已被证实具有早期辅助诊断结直肠癌的潜力〔11，12〕。由于lncRNA可在血液样本中稳定表达，具有临床取样方便、重复性好等特点，且部分lncRNA可在肿瘤早期即异常表达，因此lncRNA有望成为结直肠癌诊断、治疗和预后评估的新型分子标志物，具有较为广阔的研究和应用前景。

lncRNA SNHG5位于染色体6q14.3上，长度为524 bp，含有6个外显子，具有完整剪接U50宿主基因的能力〔13〕。lncRNA SNHG5是一种与恶性肿瘤密切相关的lncRNA，但其在不同恶性肿瘤中发挥的作用有所差异〔14〕。Chi等〔15〕发现，lncRNA SNHG5在乳腺癌中表达上调，且可通过调控增殖细胞核抗原的表达促进乳腺癌细胞增殖。细胞实验发现〔16〕，抑制黑素瘤细胞系中lncRNA SNHG5的表达可促进细胞凋亡，并能抑制细胞的增殖和侵袭能力。然而在胃癌组织中lncRNA SNHG5表达下调，且其具有抑制胃癌细胞增殖和转移的能力〔17〕。在肺腺癌中增加lncRNA SNHG5的表达则可增加癌细胞对吉非替尼的敏感性〔18〕。本研究结果显示，血清lncRNA SNHG5水平表达越高预示着更大的肿瘤直径、更高的分期、更低的分化程度及有淋巴结转移，这均提示lncRNA SNHG5在结直肠癌中是一种促癌因子。Zhang等〔7〕研究显示，lncRNA SNHG5可通过调控微小RNA-132-3p影响CAMP反应元件结合蛋白5的表达，进而促进结直肠癌的恶性进展。而Damas等〔19〕研究显示，lncRNA SNHG5的缺失可导致结直肠癌细胞周期阻滞，抑制肿瘤的生长，且过表达lncRNA SNHG5可增加癌细胞对奥沙利铂的耐药性。由此可见，lncRNA SNHG5是一种与结直肠癌密切相关的lncRNA，可促进疾病的恶性进展，有作为诊断结直肠癌生物标志物的潜力。本研究通过ROC分析发现，血清lncRNA SNHG5诊断结直肠癌的价值较高，曲线下面积为0.784，但其敏感度还有待进一步提升。由于单一生物标志诊断具有一定的局限性，目前多项生物标志物联合诊断已成为趋势所在〔20〕，本研究进一步发现，lncRNA SNHG5、CEA、CA199三指标联合可有效提升对结直肠癌的诊断价值，提示三指标联合检测对结直肠癌有较高的辅助诊断价值，具有一定的临床应用前景。