微小RNA-208a 及微小RNA-483 联合NT-proBNP 对维持性血液透析患者心血管事件发生的预测价值

麦壮艳，郭丽娟，林应源，万树莉，王婷婷

（1.海南西部中心医院心血管内科，海南儋州 571799；2.海南医学院第一附属医院心血管内科，海口 571700）

维持性血液透析（maintenance hemodialysis，MHD）是肾病患者终末期主要的替代治疗方法之一，但在治疗期间容易发生心血管事件，从而导致MHD 患者发生死亡［1］。对MHD 患者心血管事件的发生风险进行预测是改善MHD 患者预后的重要手段之一。微小核糖核酸（microRNA，miR）是一类非编码小分子RNA，参与细胞增殖、分化、凋亡和新陈代谢等过程，在心血管疾病的发生、发展中起到重要的作用［2-3］。有研究发现，miR-208a 及miR-483 在心血管疾病中异常表达，并能通过调控多种信号通路参与心血管疾病的发生、发展，可能为心血管疾病的诊断、治疗和预后方面提供帮助［4-5］。氨基末端脑利钠肽前体（N-terminal probrain natriuretic peptide，NT-proBNP）是由心室肌细胞合成和分泌的肽类激素，广泛应用于心血管疾病的诊断、治疗及预后评估，可有效预测心血管事件的发生风险［6］。本研究通过检测MHD 患者血清miR-208a、miR-483 及NT-proBNP 浓度，分析其预测MHD 患者心血管事件发生的价值，旨在为MHD 患者救治提供参考。

1 资料和方法

1.1 一般资料

选取2016年1月1日至2019年12月31日海南西部中心医院收治的MHD 患者163 例，其中男106 例，女57 例，年龄（57.30±11.28）岁。所有MHD患者均为常规血液透析，采用碳酸氢盐透析液，透析液流量为500 mL/min，血流量为200～350 mL/min，每周治疗2～3 次，每次透析时间为4～5 h。于MHD患者开始治疗为随访起始时间，随访6 个月为终点时间，根据随访期间是否发生心血管事件，分为心血管事件组65 例［心绞痛17 例，心律失常13例，心力衰竭28例，冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）7 例］和无心血管事件组98 例。

纳入标准：（1）符合MHD 患者相关诊断标准，年龄≥18岁；（2）接受MHD治疗时间≥6个月；（3）本研究经医学伦理委员会批准、患者知情同意。

排除标准：（1）既往存在严重心脏、肝脏、脑血管等疾病及恶性肿瘤的患者；（2）治疗期间转院或失访的患者。

1.2 观察指标检测方法

所有患者均于透析开始前空腹采集静脉血5 mL，离心分离血清，在ABI 7500 型荧光定量聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）仪（美国ABI 公司）上进行实时定量PCR（quantitative real time PCR，qRT-PCR）。PCR 总反应体系为20 μL：1 μL 引物及探针Mix（20×），10 μL TaqMan 通用混合物溶液（2×），1.33 μL 反转录产物cDNA，7.67 μL双蒸水；扩增条件为：95℃预变性10 min、95℃变性15 s、60℃退火60 s 进行45 个循环。采用2-△△Ct法计算miR-208a 及miR-483 浓度。NT-proBNP 浓度采用酶联免疫吸附法测定，试剂盒由上海酶联生物科技有限公司提供。另检测患者的血红蛋白（Hb）、钙（Ca）、磷（P）、钾（K）、空腹血糖（Glu）、血肌酐（SCr）及血尿素氮（BUN）浓度。

1.3 统计学分析

采用SPSS 20.0 统计软件分析。计量资料以（）表示，两组间比较采用成组t检验。计数资料以［n（%）］表示，比较采用卡方（χ2）检验。应用多因素Logistic 回归分析MHD 患者心血管事件发生的危险因素。采用受试者工作特征（receiver operating characteristic cure，ROC）曲线分析miR-208a、miR-483 及NT-proBNP 预测MHD 患者心血管事件发生的价值，曲线下面积（area under cure，AUC）比较采用Z检验。以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 心血管事件组和无心血管事件组患者临床资料比较

心血管事件组患者的首次透析年龄及血红蛋白浓度与无心血管事件组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；两组患者其他基线资料比较，差异无统计学意（P＞0.05），见表1。

表1 心血管事件组和无心血管事件组患者的基线资料比较 ［n（%），］

表1 心血管事件组和无心血管事件组患者的基线资料比较 ［n（%），］

2.2 两组患者血清miR-208a、miR-483 及NTproBNP 浓度比较

心血管事件组患者血清miR-208a、miR-483及NT-proBNP 浓度均明显高于无心血管事件组，差异均有统计学意义（P＜0.001），见表2。

表2 两组患者血清miR-208a、miR-483 及NT-proBNP浓度比较 ［n（%），］

表2 两组患者血清miR-208a、miR-483 及NT-proBNP浓度比较 ［n（%），］

2.3 多因素Logistic 回归分析MHD 患者心血管事件发生的危险因素

以MHD 患者是否发生心血管事件为因变量，将有统计学意义的项目：首次透析年龄、血红蛋白、miR-208a、miR-483 及NT-proBNP 浓度进行多因素Logistic 回归分析，结果显示miR-208a（OR=2.473，95%CI：1.752～5.490）、miR-483（OR=1.962，95%CI：1.358～3.704）及NT-proBNP（OR=2.750，95%CI：1.926～6.483）浓度升高是MHD 患者心血管事件发生的危险因素（P＜0.05），见表3。

表3 多因素Logistic 回归分析MHD 患者心血管事件发生的危险因素

2.4 血清miR-208a、miR-483 及NT-proBNP 浓度预测MHD 患者心血管事件发生的价值

miR-208a、miR-483 及NT-proBNP 三项联合预测MHD患者心血管事件发生的曲线下面积（area under the curve，AUC）（0.942，95%CI：0.882～0.995）明显高于单项miR-208a（0.850，95%CI：0.790～0.910）、miR-483（0.794，95%CI：0.736～0.855）及NT-proBNP（0.817，95%CI：0.757～0.876），差异有统计学意义（P＜0.05），其敏感度和特异度为97.3%和85.0%，见表4 和图1。

图1 血清miR-208a、miR-483 及NT-proBNP 浓度预测MHD 患者心血管事件的ROC 图

表4 血清miR-208a、miR-483 及NT-proBNP 浓度预测MHD 患者心血管事件发生的价值

3 讨论

心血管事件是MHD 患者在治疗过程中最常见的并发症，也是MHD 患者发生死亡的主要原因。miRNA 作为一类非编码RNA 分子，参与心血管疾病的发生、发展，是心血管疾病诊断和治疗的重要标志物［7-8］。研究发现，miR-208a 及miR-483在心血管疾病中存在异常表达，其表达和调控在心血管疾病中发挥重要作用，可能是一种潜在的具有高敏感性的心血管疾病早期诊断、治疗及预后判断的新型生物标志物［9-10］。NT-proBNP 是一种心室肌细胞合成与分泌的血清标志物，可作为心力衰竭诊断、治疗和预后评价的良好指标［11］。

本研究结果显示，心血管事件组患者血清miR-208a、miR-483及NT-proBNP 浓度均明显高于无心血管事件组，提示miR-208a、miR-483 及NTproBNP 在心血管事件患者中异常高表达，可能参与疾病的进展。Liu 等［12］研究显示，冠心病患者血清miR-208a 浓度明显升高，与冠心病的发生、发展过程有关，可作为冠心病早期敏感、快速诊断的辅助指标。Sun 等［13］研究发现，miR-483 在调节炎症、脂质代谢、心肌细胞增殖与凋亡等方面发挥关键作用，与动脉粥样硬化及冠心病发生密切相关，对心血管疾病的临床诊断和治疗具有较好的应用前景。另有研究证实，NT-proBNP 作为评价心功能及心肌损伤的重要指标，能较早、准确地发现心脏各腔室异常及心功能改变，是诊断心力衰竭的可靠指标［14］。本研究中进行多因素Logistic 回归分析，结果显示miR-208a、miR-483 及NT-proBNP浓度升高是MHD 患者心血管事件发生的危险因素。分析其原因一方面可能是miR-208a、miR-483作为miR 家族的成员，具有调节炎症、细胞增殖分化及凋亡的作用，可特异性高表达于损伤的心肌细胞中，参与心肌重构以及纤维化的形成，在预测心血管疾病发生中有着重要作用［15-16］；另一方面NT-proBNP 具有抑制交感神经的兴奋性和促进血管扩张的作用，当MHD 患者的心室负荷增大或者室壁张力增大时，可促使心室肌细胞加快NTproBNP的合成与释放，使得血清NT-proBNP浓度显著升高，增加了心血管事件发生的风险［17］。本研究ROC分析结果显示，miR-208a≥2.16、miR-483≥1.38及NT-proBNP≥3 804.20 pg/mL 三项联合预测心血管事件发生的AUC 最大，其预测效能最好。Zhang等［18］研究发现，冠心病患者miRNA-208a 表达增高，miRNA-208a 与动脉粥样硬化的发生及动脉粥样硬化的严重程度有关，可能是冠心病诊断、预后评估及靶向治疗的非侵入性生物标志物。另有研究认为，miR-483 在急性心肌梗死患者中显著高于非急性心肌梗死患者，其表达水平上调与急性心肌梗死发生有关，可为急性心肌梗死的早期诊断提供有用的信息［19］。

综上所述，血清miR-208a 及miR-483 浓度在心血管事件患者中明显升高，可能是预测心血管事件的生物标志物，联合NT-proBNP 对预测MHD患者心血管事件发生具有较好的价值。