羊肚菌干鲜子实体组织分离效果初探

周 帅 陈鑫伟 郑东方 韩 彬 闫延梅

（商丘市农林科学院，河南商丘 476000）

羊肚菌Morchella，菌盖表面凸凹似网状，像花生外壳又像羊肚状，故称羊肚菌，是世界上珍贵的稀有食用菌之一。羊肚菌味道鲜美，营养丰富，含有8种维生素和18种氨基酸[1]，具有益肠胃、助消化、化痰理气、补肾壮阳、健脑提神、预防感冒、增强人体免疫力等功效。近十年来我国人工栽培羊肚菌发展较快，已实现大面积季节性人工栽培羊肚菌，且产量和质量逐步提高。但人工栽培羊肚菌技术仍有待提高，产量易受气候、菌种、管理等多种因素影响，稳定性差。

羊肚菌属子囊菌，菌种退化速度快，需要频繁提纯复壮[2]。菌种质量直接影响羊肚菌的质量和产量，关系到菇农的切身利益。因此，培育优良的羊肚菌菌种，对生产具有重要的意义。为此，笔者开展羊肚菌干子实体与新鲜子实体组织分离培养菌种比较试验，以期为羊肚菌菌种生产提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

（1）羊肚菌子实体：六妹羊肚菌菌株。新鲜羊肚菌子实体选自栽培田，菌肉肥厚、大小适中、颜色正常、无病虫害、六至八分熟（一般含水量在90%左右）；干羊肚菌子实体：新鲜子实体在阳光下晾晒至含水量60%~70%或经晾晒后贮藏但未发潮、霉变，含水量60%~70%。（2）其他试验材料和工具包括：镊子、剪刀、装有PDA培养基的试管、封口膜、75%酒精、酒精灯和无菌工作台等。

1.2 试验方法

1.2.1 制备PDA培养基

（1）以制作1 000 mL培养基为例：马铃薯200 g，葡萄糖20 g，硫酸镁2 g，琼脂20 g，蛋白胨0.5 g，牛肉膏0.5 g，加水1 000 mL，pH自然。

（2）培养基制作方法

马铃薯去皮、切块，置1 000 mL水中文火煮30 min左右，用纱布过滤取汁。将琼脂、葡萄糖、硫酸镁、蛋白胨、牛肉膏添加到马铃薯滤汁中，加热至琼脂等全部溶化，用开水补足水。培养基分装试管，装至试管的1/3高度（注意培养基不沾到试管口，以免沾湿棉塞，易染杂菌），用棉花封住试管口。装好培养基的试管，9管一捆用牛皮纸或报纸包裹，用绳子捆绑好，放入高压锅内灭菌。控制高压锅温度为120~125℃，灭菌30 min。灭菌结束待压力表回0后，取出试管，摆斜面，倾斜度以培养基离试管口1/3试管长为宜。培养基冷却凝固后，取一些试管放入25~30℃恒温箱中5 d，确认无杂菌，才能用于培养菌种。

1.2.2 组织分离及培养方法

无菌条件分离组织，具体方法：先用酒精棉球将子囊果柄、盖擦拭干净（注意及时更换酒精棉球），然后同75%酒精、装有PDA培养基试管、接种用工具等放入超净工作台。

用75%的酒精消毒双手，将镊子、剪刀等接种用具用酒精消毒，再用酒精棉擦拭，酒精灯外焰上灼烧一下，剪开羊肚菌，剪取菌柄与菌盖交接处菌柄部组织块2~5 mm，用镊子夹住，放入试管，塞好棉塞，于20~24℃恒温箱避光培养。

每个处理3个重复，每个重复10支试管。

1.2.3 考察内容

萌发率[3]/%=接入羊肚菌组织试管总数/组织萌发试管数×100

平均萌发时间=试管萌发总天数/萌发试管数量

菌丝长满试管平均时间=试管长满总时间/长满试管数量

平均产核时间=试管开始产核总时间/产核试管数量

2 结果与分析

由表1可知，两处理萌发率、菌丝平均萌发时间、平均长满试管时间差异不大，但晾晒后子实体组织分离培养的菌丝生长浓密，长势旺盛、生长速度较快；新鲜羊肚菌子实体分离培养菌丝体生长较密，但生长速度相对较慢。由表2可知，晾晒后羊肚菌子实体组织分离培养母种，菌核数量多；鲜子实体分离培养母种，菌核数量较少，出现菌核时间较晚。

表1 两种分离组织母种菌丝体长势对比

表2 两种分离组织培养母种培养基上菌核对比

3 小结

试验结果表明，羊肚菌组织分离培养母种可以选用稍晾晒后的子实体（含水量60%~70%），且较鲜子实体组织萌发率高，菌丝生长浓密，长势旺盛，生长速度较快。综合试验结果：晾晒后子实体组织分离培养出的母种均略优于鲜子实体组织，今后有待进行生产应用试验。