罗氏全自动电化学发光免疫分析仪检测 白细胞介素-6的方法学评价

卫丽 刁晓艳 梁涯

作者单位： 810007 青海西宁，青海省人民医院医学检验科（卫丽、刁晓艳）

510006 广东广州，广州市中医医院同德围分院检验科（梁涯）

白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）是一种多效性细胞因子，且在人体中功能较多。大量研究显示，IL-6不仅对B细胞有生理活性作用，对T细胞、造血干细胞、肝细胞和脑细胞也有生理活性作用［1］。 在外科手术后、患肿瘤时以及发生内外伤、感染、脑死亡或其他急性炎症反应时，机体会快速产生IL-6［2-3］。 手术患者的IL-6水平对是否会发生手术并发症有一定预测作用［4-5］。对重症监护病房（intensive care unit，ICU）患者的IL-6水平进行监测能有效评估疾病严重程度和预后情况〔如系统性炎症反应综合征（systemic inflammatory response syndrome，SIRS）、 脓毒症、脓毒性休克等〕［6-8］。另外有研究表明，IL-6可作为脓毒症的早期预警指标［9-11］，与类风湿关节炎等慢性炎症疾病也有关［12-13］。本实验室将国际标准化组织（International Organization for Standardization， ISO）制定的ISO15189：2007《医学实验室质量和能力认可准则》［14］作为工作质量的管理标准，通过IL-6项目全面验证和评价罗氏Cobas E602全自动电化学发光免疫分析仪的检测性能（包括仪器检测精密度、线性、方法学比较等），现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本研究检测的血清标本（高、中、低值浓度）来自青海省人民医院门诊、住院、体检中心患者的新鲜血清（无溶血、黄疸和脂血）。低值标本在正常参考值范围内，未经稀释的高值标本高于正常参考值范围的上限，但可被本仪器正常检出。

1.2 仪器与试剂 使用德国罗氏诊断公司Cobas E602全自动电化学发光免疫分析仪及原装试剂。校准品和质控品均为仪器原装配套定标液和血清基质复合质量控制（质控）血清。

1.3 研究方法

1.3.1 准确度评价实验 对不同于当前使用校准品批号的另一个校准品进行检测，与当前使用的被检校准品的靶值比较，计算相对偏差［15］。判断标准为相对偏差在±12.5%以内。

1.3.2 精密度验证实验［16］选择低、中、高值IL-6水平（分别为25.10、127.01、688.92 ng/L）的新鲜血清，连续检测20次，计算平均值（x）、标准差（standard deviation，SD）、变异系数（coefficient of variation，CV）， 并计算批内精密度。同时将高、中、低值血清标本各分装20份，储存于2～8 ℃冰箱中，每日分别测量2次，持续10 d，计算批间精密度。评价试验结果判定：计算出的批间精密度结果小于生产厂家所提供的参考范围（CV＜8.5%），即为验证合格。

1.3.3 检测线性范围评价 参照美国临床和实验室标准协会（Clinical and Laboratory Standards Institute，NCCLS）制定的标准EP6-A评价方案［16］，选取各 1份高值（H）和低值血清样本（L），样本的IL-6水平与仪器生产厂家说明的检测范围相近，将样本按不同比例（5L、4L+H、3L+2H、2L+3H、L+4H、5H）混 合，得到6份样品，每份重复测定4次，计算均值。横 坐标x为理论值，纵坐标y为实测值，列出回归方程，绘制线性范围，并计算相关系数。判断线性范围的标准：回归方程为y＝bx+a，若b在0.97～1.03，a值 接近0则说明检测结果可达到验证高限。

1.3.4 交叉污染率评估实验 将1份低值浓度标本和1份高值浓度标本分别连续测定3次，结果分别为L1、L2、L3和H1、H2、H3。按以下公式计算：交叉污染率＝（L1-L3）/（H3-L3）×100%。

2 结果

2.1 准确度评价实验 检测系统使用批号168763的IL-6校准品进行校准，再检测批号169837和178635的IL-6校准品，比较测定值与靶值，相对偏差为-3.01%～3.84%，表明检测系统准确度较高。准确度评价实验结果见表1。

表1 IL-6的准确度评价实验结果

2.2 精密度验证实验 罗氏Cobas E602全自动化学发光自动免疫分析仪检测IL-6高、中、低值浓度标本的批内和批间精密度均符合要求。见表2。

表2 IL-6精密度验证实验结果

2.3 线性评价实验 进行回归分析，得到回归方程：y＝1.0081x-1.0009（R2＝0.99996），从而证实预 期值与实际测得值的相关性较好。因此，IL-6在线性 范围内呈线性，接近厂家提供的参考范围，见表3。线性回归图见图1。

表3 IL-6线性评价实验结果

图1 IL-6的线性范围及线性回归图

2.4 交叉污染率评估 低值和高值浓度标本检测结果分别为L1＝24.26 ng/L，L3＝23.76 ng/L，H3＝627.0 ng/L，按公式计算可得IL-6的携带污染率为0.077%，符合标准（交叉污染率＜3.0%）。

3 讨论

本研究采用罗氏Cobas E602全自动电化学发光免疫分析仪定量检测IL-6，该仪器具有敏感度和特异度高、重复性好、无放射性危害等优点［17-18］，近年来广泛被临床使用。罗氏全自动电化学发光免疫分析仪根据夹心法，采用罗氏公司的封闭检测系统对IL-6进行检测，所有试剂和消耗品都来自德国罗氏诊断公司。全自动免疫分析仪的厂家说明书中提供的仪器指标参数均在最佳检测条件下完成，与实际操作实验室的环境和条件有差异，因此，本实验室旨在验证罗氏全自动电化学发光免疫分析仪对IL-6的检测性能，并评价该仪器的分析功能。

精密度是指在规定条件下不同批次检测结果间的一致程度，是反映仪器检测功能的重要指标，也是进行其他方法学验证实验的前提。为验证检测仪器的精密度，可选择已经检测过的样本、质控品、标准品作为标本。本研究采用低值、中值、高值3个IL-6水平的患者新鲜血清，设计天数和重复次数进行精密度验证实验，从而得到批内和批间精密度，方法简单，适合用于临床实验室。结果显示，IL-6的验证结果符合厂商要求。在NCCLS制定的标准EP6-A2中，线性实验的多项式回归统计方法要求检测结果具有较高的精密度，否则会降低统计功效，因此，实验前一般先使用集合分差（set difference，SDr）来判断检测的精密度。结果显示，IL-6的SDr＜5%目标允许总误差（allowable total error，TEa）时线性评价有意义。SPSS 13.0软件拟合结果显示，IL-6检测的线性范围为0.24～70.00 ng/L，基本接近说明书提供的＜7.00 ng/L范围。

综上，罗氏Cobas E602全自动电化学发光免疫分析仪对IL-6的检测性能验证结果与厂商声明的基本一致，同时，该仪器也具有检测速度快、敏感度高、线性范围宽等优点，符合临床实验室检验质量的目标要求，可以正式投入实验室使用，应用于临床标本检测。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突