不同免疫检验方法在抗人类免疫缺陷病毒 检测中的应用

卢永亮 陈冬莲 王满娣

作者单位：511500 广东清远，清远市中医院检验科

获得性免疫缺陷综合征（acquired immunodeficiency syndrome，AIDS）是一种由人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency disease，HIV）引起的传染病，具有病程较长、危害较大、病死率较高的特点。HIV主要对人体的免疫系统发起攻击，一旦被感染，不仅会影响患者的免疫系统，更会侵犯其他组织，造成器官功能丧失，从而降低患者的生活质量，甚至危及生命安全［1］。有研究表明，HIV的传播途径主要包括母婴传播、性传播和血液传播3种途径，同时AIDS的流行也成为严重影响人类健康和全球社会经济发展的公共卫生问题，因此早筛查、早诊断、早干预、早治疗刻不容缓［2］。目前，临床适用于抗HIV筛查的工具较多，其中血清学检测方法的应用范围最广，且特异度最高，常见方法有酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）、电化学发光法和免疫印迹法（Western blotting，WB）等［3］。 其中WB是临床公认的抗HIV血清确证试验方法，但因其成本较高、操作繁琐，故不适用于临床大批量筛查，相比之下电化学发光法和ELISA更适合用于大批量的标本筛查，且具有操作简单、成本较低、敏感度和特异度均较高的优势［4-5］。本研究为验证两种检验方法初筛结果的准确性，收集2016年1月—2021年12月在本院初筛HIV阳性的72例AIDS患者的临床资料，并进行分析，依次采用电化学发光法和ELISA检测，对初筛阳性的患者再次进行WB确证试验，比较两种检测方法所得结果的差异，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象与一般资料 选择2016年1月—2021年12月在本院就诊的72例AIDS患者作为研究对象，收集临床资料进行回顾分析。其中男性53例， 女性19例；年龄22～66岁，平均（44.69±3.74）岁。

1.1.1 纳入标准 ① 确诊为AIDS；② 仅对患者的检验数据进行回顾分析，经过患者或家属签署送检同意书及告知相关流程，对患者的身份信息严格保密，不纳入本研究信息范围；③ 既往无梅毒、乙型肝炎或丙型肝炎病毒感染史；④ 病情稳定、意识状态正常。

1.1.2 排除标准 ① 合并其他病原菌感染；② 近期使用过免疫球蛋白等药物；③ 合并高血压、高脂血症等慢性病；④ 患有其他传染性疾病；⑤ 中途退出本研究。

1.2 仪器与试剂 HIV抗体第三代ELISA试剂盒 （批号：201801091）购自北京万泰生物药业股份有限公司，PHOMO酶标仪和IWO-960洗版机购自郑州安图生物工程股份有限公司，罗氏cobas 6000电化学发光仪（批号：20180103）及配套试剂购自罗氏集团（中国）有限公司。移液器（批号：71469K100）购自赛默飞世尔科技公司，加温设备（批号：2069831）购自北京长源医用设备公司，离心机（批号：20163854） 由湖南湘智设备公司提供。所有试剂均为合格产品，且在有效期内；检测设备均已通过校准，且在正常状态下使用。

1.3 研究方法

1.3.1 样本采集 采集受检者空腹肘静脉血5 mL，静置血液待凝固后，以3000 r/min离心8 min，分离血清后进行检测，样本放置于-20 ℃环境中保存。

1.3.2 ELISA检测 标本采集后，严格按照ELISA试剂盒说明书要求进行检测操作，采用酶标仪（双波长450/620 nm）读取各孔吸光度值，并计算各样品吸光度值与cut-off值之比（S/CO）。ELISA初筛结果表明，S/CO值＞1或S/CO值为0.5～1.0的血液标本需进行原管双孔复检［5］，若复检结果仍与上述结果一致，则视为可疑标本，送至疾病预防控制中心 （Centers for Disease Control and Prevention，CDC）进行WB确证试验，最终以确证结果为准。保留所有数 据的原始资料。

1.3.3 电化学发光法试验 使用罗氏cobas 6000电化学发光仪，试剂为原厂配套的HIV抗原/抗体试剂盒，室内质控品使用伯乐质控定值血清。初筛结果显示，罗氏试剂COI值＜0.9为阴性，COI值为0.9～1.0（灰区）或COI值≥1.0的血液标本判定为阳性，需进行原管复查或采用ELASA复检。若复检结果与上述结果一致，则视为可疑标本，送CDC进行WB验证。所有操作均严格按照相关规定流程进行。保留所有数据的原始资料。

1.4 观察指标及评价工具 记录ELISA和电化学免疫发光法检测的初筛结果，对两种方法结果不一致的标本采用WB检测进行确证试验，比较ELISA和电化学发光法对检测筛查抗HIV感染的准确度、特异度和敏感度；以WB确证试验结果为确诊标准，比较两种检测方式的一致性。

1.5 统计学处理 使用SPSS 22.0软件处理数据。符合正态分布的计量资料以均数±标准差（±s）表示，采用t检验；计数资料以例（%）表示，采用χ2检 验。P＜0.05为差异有统计学意义。采用一致性检验验证患者检测结果，当κ＞0.74时，表示阳性和阴性检测结果的一致性良好；当κ值为0.40～0.74，表示检测结果的一致性一般；当κ＜0.40时，则表示检测结果的一致性较差。

2 结果

2.1 ELISA检测和电化学发光检测结果比较 72例 AIDS患者血清样本经ELISA检测显示阳性者57例 （阳性率为79.17%），阴性者15例（阴性率为20.83%）；电化学发光试验显示阳性者69例（阳性率为95.83%）， 阴性者3例（阴性率为4.17%)，两种方法的阳性率比较差异无统计学意义（χ2＝0.428，P＝0.369）。有15例患者两种方法的检验结果不一致，符合率为79.17%（58/72）。见表1。

表1 ELISA检测和电化学发光试验结果比较

2.2 ELISA和电化学发光试验与WB确证试验结果比较 经ELISA检测和电化学发光试验结果不一致的患者经WB确证后，结果显示15例患者中有3例为阴性，12例为阳性。两种检验方式的特异度和敏感度比较差异均无统计学意义（均P＞0.05），但阴性预测值和阳性预测值比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）。见表2～3。

表2 ELISA检测和电化学发光试验与WB确证结果比较

2.3 ELISA和电化学发光试验与WB确证试验的一致性比较 ELISA检测与WB确证结果比较κ值为0.815，表明一致性良好；电化学发光法检测与WB确证结果比较κ值为0.706，表明一致性一般。

表3 ELISA检测和电化学发光试验的诊断效能比较

3 讨论

自1985年我国首次正式报道AIDS以来，该疾病在国内的发病率呈快速上升趋势，一项数据研究显示，AIDS病例正以每年30%～40%的速度快速增长，已成为一个十分严峻的公共卫生问题［6］。由于AIDS是由于HIV感染引起的机体免疫功能缺陷，具有较高的传染性，且传播途径较广，其中90%以上的患者为通过性传播途径，其余可通过母婴和血液等途径传播［7-8］。因此，HIV抗体筛查成为遏制AIDS的关键环节。徐璐等［9］采用胶体硒法进行HIV抗体筛查，结果显示阳性率高于WB法确证试验，因此可作为一种可行的检测手段。

目前，在对AIDS患者抗HIV的临床筛查中多以血清学检测方式为主，其中WB检测方法一直被视为抗HIV检测的“金标准”，可以借助明胶颗粒包裹特异性的HIV抗原进行检测，一方面无需采用吸收剂，可有效避免生物因素对检测结果产生影响［10］；另一方面可以与抗HIV特异性抗体结合，发生明显的凝聚反应，从而具备较高的敏感度和特异度，但因该检测方法的试剂盒造价昂贵，且检测步骤操作繁琐，因此并不适用于临床大规模筛查［11-12］。

本研究采用ELISA和电化学发光试验分别对AIDS患者进行HIV检测，结果表明，72例受检者经ELISA检测显示，阳性率为79.17%，电化学发光试验显示阳性率为95.83%，二者比较差异无统计学意义；HIV抗体检测主要应用双抗原夹心ELISA定性检测受检者血清，也是一种针对HIV常用的检测手段，用于HIV感染的辅助诊断以及抗HIV药物治疗的效果监测。并且该方法具有较高的敏感度和特异度，加之操作简便，成本较低，适合临床应用，检测结果可以长期保留，故而更适用于大范围筛查［13-14］。 电化学发光法是通过电化学方法来产生一些特殊的物质，这些电生物质之间或电生物质与其他物质之间进一步反应而发生的一种发光现象。电化学发光法是化学发光方法与电化学方法结合的产物，保留了化学发光方法所具有的敏感度高、线性范围宽、观察方便和仪器操作简单等优点［15-16］。但检测结果显示，两种检测方法有15例患者的检测结果不一致，初筛结果的符合率为79.17%，表明两种检测方法均存在一定的假阳性和假阴性结果。本研究对采用ELISA与电化学发光试验所得结果不同的 15例患者经WB检测确证，结果显示，有3例结果为阴性，12例结果为阳性；经比较，ELISA检测的敏感度和阳性预测值均高于电化学发光法，并且ELISA检测与WB确证试验的结果一致性良好；电化学发光法与WB确证试验结果比较的一致性一般，提示电化学发光法更易产生假阳性结果，造成误诊；而采用ELISA对受检者抗HIV进行测定，具有操作简单，敏感度和特异度高，以及成本低的优势。但值得注意的是，ELISA在检测过程中易受保存方式、试剂制作工艺以及运输等因素的影响，导致检测标本的稳定性较差，而且该检测方法只能对血清标志物进行定性分析，而无法进行定量分析，因此具有较高的误诊和漏诊率［17］。

综上所述，ELISA检测和电化学发光法检测对抗HIV的敏感度和特异度比较无明显差异，但ELISA筛查的准确度更高，因此该方法值得作为初筛抗HIV的首选方法，但仍然建议针对异常结果再结合其他检验方法进行确证，以提高诊断准确率，与此同时还应加强相应的健康宣教工作，强化群众的防范意识，预防AIDS的传播。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突