泽漆质量标准研究

李振兴，张晓林，宋莹，丁晓红，路立峰，单雪梅，郭珊珊，李景云

（山东药品食品职业学院，山东 威海 264210）

泽漆（Euphorbia helioscopia L.）是大戟科大戟属一年生或两年生草本植物，味辛、苦，性微寒，4~5 月开花时采收，全草晒干后入药，具有行水、消痰、杀虫及解毒功效，用于治疗水气肿满、痰饮喘咳、痢疾、菌痢、瘰疬、癣疮，结核性瘘管和骨髓炎[1]。目前对泽漆的研究主要集中在化学成分及药理作用研究[2-6]，对泽漆的质量标准研究较少。本文对泽漆的质量标准进行研究，并对不同产地的泽漆进行测定，测定方法进行方法学研究，旨在建立准确可靠的质量研究方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器与材料

LC-20A 高效液相色谱仪（日本岛津）；LE204E 电子天平（日本ANG）；DRHH-S4 数显恒温水浴锅（上海双捷实验设备有限公司）；KQ-400KED 超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）；ZXRD-B5210 鼓风干燥箱（上海智诚分析仪器制造有限公司）。

1.2 试药

槲皮素对照品（中国食品药品检定研究院提供，批号100081-201610）；甲醇为色谱纯（MERCK）；水为超纯水；其余试剂均为分析纯；泽漆10 批药材采自山东、江苏及安徽等地（见表1），经山东药品食品职业学院路立峰副教授鉴定为泽漆，药材现保存于山东药品食品职业学院标本馆。

2 方法与结果

2.1 泽漆鉴别

2.1.1 显微鉴别 本品粉末显黄绿色。置显微镜下观察：花粉粒亮黄色，类圆形，直径15~30m，壁较厚，表面有颗粒状的雕纹，有萌发孔3 个，见图1-h 和1-i。纤维众多，多成束，稀有单个散在，木化，有的具单纹孔，见图1-a 和1-b。螺纹导管多见，直径15~40m，见图1-c。叶表皮细胞垂周壁念珠状增厚或深波状弯曲，见图1-d 和1-e。薄壁细胞类圆形或类长圆形，有较大细胞间隙，有的细胞内含淡黄棕色颗粒状物，见图1-f。木栓细胞淡棕色或黄棕色，表面观多角形，壁稍厚，栓化，见图1-g。

图1 泽漆显微鉴别图Fig.1 Microscopic identification of Euphorbia helioscopia L.

2.1.2 薄层色谱鉴别 供试品溶液的制备：取本品粉末1.0 g，加80% 甲醇50 mL，超声处理1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加水10 mL 使之溶解，用乙醚振摇提取2 次，每次10 mL，弃去乙醚液，水液加稀盐酸10 mL，置90 ℃水浴锅中加热1 h，取出，迅速冷却，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，用水30 mL洗涤，弃去水液，乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇2 mL使之溶解，作为供试品溶液。点样1L。

对照品溶液的制备：取槲皮素对照品（中检院提供，批号100081-201610），加甲醇制成每1mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。点样2L。

薄层板：青岛海洋化工厂生产的预制硅胶H 薄层板，厚度0.20~0.25 mm，批号为20191130。

展开剂：甲苯-甲酸乙酯-甲酸（10:8:1）。

展开条件：温度25 ℃相对湿度70%。

显色：3%三氯化铝乙醇溶液，105 ℃加热数分钟。

检视：紫外光灯（365 nm）。

结果：供试品色谱中，10 批泽漆均与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点，故收入正文。见图2。

图2 泽漆药材的TLC 鉴别图谱Fig.2 TLC chromatograms of 10 batches of Euphorbia helioscopia L.

2.2 检查

按照《中国药典》2020 年版水分测定法（烘干法，通则0832）、灰分测定法（通则2302）和浸出物测定法（热浸法、冷浸法，通则2201）对10 批泽漆药材进行测定，每批样品平行操作2 份，见表1。

表1 10 批样品检查项测定（n=2）Table 1 Loss on drying,total ash,acid-insoluble ash and ethanol-soluble extractives of 10 batches of Euphorbia helioscopia L.(n=2)

2.3 泽漆的含量测定

2.3.1 色谱条件及系统适应性实验 以十八烷基键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.2% 磷酸溶液（50:50）为流动相，检测波长371 nm，柱温40 ℃，理论塔板数按槲皮素峰计算不得低于5 000，分离度不小于1.5。

2.3.2 对照品溶液制备 取槲皮素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL 含槲皮素40g 的溶液，即得。

2.3.3 供试品溶液的制备 取本品粉末（过3 号筛）0.5 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-25%盐酸溶液（4:1）50 mL，密塞，称定重量，置于85 ℃水浴锅中加热回流30 min，立即冷却，再称定重量，用甲醇-25% 盐酸溶液（4:1）补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3.4 空白溶剂 甲醇-25%盐酸溶液（4:1）。

图3 系统适应性图谱Fig.3 Spectra of the system adaptability

2.3.6 标准曲线绘制 取槲皮素对照品溶液（浓度为85.226g/mL）精密吸取1 mL、2 mL、4 mL、6 mL、8 mL、10 mL 置于10 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为线性溶液，取线性溶液10L 注入液相色谱仪，分别测定峰面积。以槲皮素对照品的进样量（g）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，进行线性回归，得回归方程为：y=4 574 489.17x+4 505.48，R2=0.999 9。结果表明，槲皮素在0.085 226~0.852 26g 范围内线性关系良好。

2.3.7 精密度试验 取同一供试品溶液，按上述色谱条件连续进样6 针，结果槲皮素峰面积的RSD 为0.16%（n=6），表明仪器精密度良好。

2.3.8 重复性试验 取供试品（批号：泽漆-济宁）按照2.3.3 方法制备供试品溶液，共6 份，按上述色谱条件测定，结果槲皮素的平均含量为0.483 4 mg/g，RSD为0.99%（n=6），表明该方法重复性良好。

2.3.9 中间精密度 由实验人员B 取泽漆-济宁（批号：泽漆-济宁）供试品按照2.3.3 供试品制备方法制备供试品溶液，共6 份，按上述色谱条件测定，结果槲皮素的平均含量为0.480 7 mg/g，RSD为1.01%（n=12），表明该方法重复性良好。

2.3.10 稳定性试验 取同一供试品溶液（批号：泽漆-济宁），分别于制备后的0 h、1 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h按上述色谱条件测定，测得槲皮素峰面积的RSD 为1.02%，结果表明供试品溶液在12 h 稳定。

2.3.11 加样回收试验 精密量取槲皮素对照品1.0mL（浓度为1.117 8 mg/mL）6 份，分别置于6 个250 mL具塞锥形瓶中，吹干，取已测知含量的泽漆样品（批号为210 420，水分为8.39%，槲皮素含量为0.490 2%）约0.25 g，精密称定，共取6 份，按照2.3.3 方法制备供试品溶液。依法测定，计算回收率。槲皮素的平均加样回收率为99.28%，RSD为0.79%（n=6），结果见表2。

表2 加样回收率试验结果（n=6）Table 2 Results of recovery tests (n=6)

2.3.12 样品的测定 取收集的10 批样品，按照2.3.3方法制备供试品溶液。依法测定，按外标法计算槲皮素的含量，结果见表2。

表3 不同产地泽漆含量测定结果Table 3 The results of content from different origins

3 讨论

3.1 泽漆的鉴别参考《江苏省中药材质量标准》2016年版“泽漆”项下选用槲皮素作为指标性成分[7]。通过对槲皮素对照品溶液进行紫外-可见分光光度法扫描确定检测波长为371 nm。

3.2 通过查阅文献[8-11]，研究中考察流动相甲醇-0.2%磷酸溶液（47:53）及甲醇-0.2%磷酸溶液（50:50），两者均满足分离条件，由于第2 种流动相保留时间更短，故采用第2 种流动相。

3.3 依据文献[12-15]测量指标特点，在供试品溶液制备时考察了不同的提取溶剂[甲醇-18%盐酸溶液（4:1），甲醇-25% 盐酸溶液（4:1），甲醇-36%盐酸溶液（4:1）]、不同提取方法（超声，回流）、不同提取时间（30 min、60 min和90min）、不同提取温度（85℃、90℃和95℃），研究表明在甲醇-25%盐酸溶液（4:1）溶剂下提取时间超过30 min槲皮素含量会下降，回流提取效果比超声提取好，回流温度对提取影响不大，综合考虑节能环保等，选取甲醇-25%盐酸溶液（4:1）50mL 的溶剂85 ℃水浴回流30 min 作为提取条件。

3.4 本文对不同产地10 批泽漆的槲皮素含量测定表明，个体差异较大，一是由于本品是草本植物，全草用药，在采收干燥和运输过程中叶、茎、根比例不一致，二是可能与各产地生长气候条件有关，因采集时间集中，生长时间对含量影响较小。

3.5 参照《中国药典》2020 年版四部通则[16]分别测定10 批样品水分、总灰分、酸不溶性成分和浸出物，结果见表1。水分在7.5%~10.4%之间，平均值为8.8%。总灰分在10.59%~13.37% 之间，平均值为11.3%。酸不溶性灰分在0.28%~1.06%之间，平均值为0.6%。分别考察了不同浸出方法（冷浸法和热浸法）和不同溶剂（乙醇、70%乙醇、稀乙醇和水），结果表明采用热浸法，以70%乙醇作溶剂，浸出物含量最高，测定10 批样品，结果在19.8%~24.4%之间，平均值为23.0%。