EB病毒感染患儿T淋巴细胞亚群水平变化及临床意义分析

赵侗玲

辽宁省鞍山市妇儿医院检验科,辽宁鞍山 114000

EB病毒是一种常见的DNA病毒，属于疱疹病毒家族成员之一，较易感染儿童，尤其是男童，可引发发热、皮疹、淋巴结肿大等症状或体征[1]。EB病毒感染主要与患儿免疫力下降有关，因此临床可通过深入分析与EB病毒感染患儿病理变化相关的生物学指标，进而获得早期明确的诊断结果，以利于EB病毒感染疾病的防治。在临床中，可敏感反映机体细胞免疫功能状态的常见指标有外周血T淋巴细胞亚群水平、白细胞计数(WBC)、单核细胞等。其中T淋巴细胞亚群主要包括CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞等，其具有高度异质性的特点，临床常用于判断自身免疫性疾病、免疫缺陷症等[2]；白细胞具有防护作用，临床常用于判断机体的炎症状态[3]；单核细胞是机体血液中体积较大的血细胞，也是组成机体防御系统的重要部分，临床常用于判断机体的免疫功能[4]。本研究旨在探讨EB病毒感染患儿T淋巴细胞亚群的水平变化及临床意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择500例2019年10-12月本院收治的EB病毒感染患儿作为观察组，并选取同期体检健康儿童500例作为对照组，整理并分析其临床资料。对照组研究对象年龄1～10岁，平均(6.31±1.23)岁；男340例，女160例。观察组患儿年龄1～11岁，平均(6.32±1.17)岁；男345例，女155例；EB病毒载量：DNA≥1×105copy/mL 250例，DNA<1×105copy/mL 250例。两组性别、年龄比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。观察组纳入标准：患儿符合《EB病毒感染实验室诊断及临床应用专家共识》[5]中的诊断标准，且经过实验室检查确诊；临床资料齐全；伴有急性发热、淋巴结肿大等症状或体征；淋巴细胞、异形淋巴细胞比例增加。观察组排除标准：合并有其他恶性肿瘤者；有血液系统疾病者；伴免疫功能障碍者；严重肝、肾功能异常者；有其他感染性疾病者等。本研究经医学伦理委员会审核批准，所有研究对象家属均知情同意。

1.2方法 于观察组患儿入院当天进行EB病毒DNA获取：将50 μL强阳性、临界阳性、阴性质控品放置于离心管中，并加入DNA提取液(50 μL)，使其充分混匀，然后将其置于金属浴恒温(100 ℃)加热(10 min)，并使用美国贝克曼库尔特公司提供的超速离心机(离心半径：10 cm；离心速度：12 000 r/min；离心时间：5 min)进行离心，作为样品1备用。在含有淋巴细胞分离液(1 mL)的试管中加入全血(1 mL)，并使用超速离心机(离心半径：10 cm；离心速度：2 000 r/min；离心时间：20 min)进行离心，取白细胞层(中间云雾状细胞层)，再将其(1.5 mL)置于离心管中(离心半径：10 cm；离心速度：12 000 r/min；离心时间：5 min)进行离心，取下沉淀，然后在其中加入制备好的DNA提取液(50 μL)，并充分混匀，恒温(100 ℃)下处理(10 min)后，使用超速离心机(离心半径：10 cm；离心速度：12 000 r/min；离心时间：20 min)进行离心，以备用。聚合酶链反应(PCR)：在放入反应液的PCR管中，依据病毒含量由无到有、由少至多的顺序加入准备好的样品1上清液(2 μL)，样品有定量参考品、阴性质控品、标本、临界阳性质控品、强阳性质控品，然后将其放入PCR检测仪器(中山大学达安基因股份有限公司，型号：ABI7000)的样品孔内，参数设置：2 min 93 ℃；45 s 93 ℃；60 s 55 ℃共循环10次。30 s 93 ℃；45 s 55 ℃共循环30次。最后检测EB病毒水平。T淋巴细胞亚群水平检测：制备混合制剂，取单克隆抗体(CD127-PE、CD4-PC5、CD4-FITC/CD8-FE/CD3-PC、CD4-PC5)及CD4-PC5 各5 μL，加入EDTA-K2抗凝外周血(100 μL)，进行温育(室温)避光(20 min)，加入溶血素(2 mL)，避光温育(常温)10 min，磷酸盐缓冲液洗涤2次，并重悬细胞后，予以上机检测。

1.3观察指标 (1)观察组患儿与对照组研究对象外周血细胞变化情况比较：淋巴细胞比例、WBC、单核细胞比例。(2)观察组患儿与对照组研究对象T淋巴细胞亚群变化情况比较：CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞水平和CD4+/CD8+比值。(3)不同病毒载量患儿T淋巴细胞亚群变化情况比较。

2 结 果

2.1观察组与对照组外周血细胞变化情况比较 观察组患儿外周血淋巴细胞比例、WBC高于对照组(P<0.05)，两组外周血单核细胞比例比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 观察组与对照组外周血细胞变化情况比较

2.2观察组与对照组T淋巴细胞亚群变化情况比较 观察组患儿外周血CD4+T淋巴细胞水平和CD4+/CD8+比值低于对照组，而外周血CD8+T淋巴细胞水平高于对照组(P<0.05)；观察组患儿外周血CD3+T淋巴细胞水平与对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

表2 观察组与对照组T淋巴细胞亚群变化情况比较

2.3不同病毒载量患儿T淋巴细胞亚群变化情况比较 与EB病毒DNA≥1×105copy/mL的患儿相比，EB病毒DNA<1×105copy/mL患儿的外周血CD4+T淋巴细胞水平和CD4+/CD8+比值较高，外周血CD8+、CD3+T淋巴细胞水平较低(P<0.05)，见表3。

表3 不同病毒载量患儿T淋巴细胞亚群变化情况比较

3 讨 论

EB病毒是一种可引起人类呼吸道感染、肿瘤的疱疹病毒，若未对患儿实施及时有效的治疗，病情将进一步发展，导致全身多个系统损伤，严重影响患儿身心健康。相关研究表明，EB病毒感染可造成患儿机体细胞免疫功能降低，进而出现传染性单核细胞增多症(IM)，同时其还可导致B淋巴细胞、T淋巴细胞等发生增殖和转化，为恶性疾病发生打下基础，且与多种恶性肿瘤的发生有密切关系[6]。近几年，EB病毒感染患儿的发病率呈逐年升高趋势，且男性患儿比例高于女性[7]。

淋巴细胞可发挥产生、运载抗体，防御病毒感染等作用，但当患儿发生病毒感染性疾病时，其在外周血中的比例会升高[8]；白细胞具有防御作用，可参与机体的防御反应，当病菌入侵机体时，其可包围﹑吞噬病菌，故在一些病毒感染性疾病中，其水平也可升高[9]；单核细胞可吞噬、清除受伤、衰老的细胞及其碎片，还可参与免疫反应，促进淋巴细胞发生特异性免疫反应，故其比例升高可辅助诊断机体已遭受病毒感染[10]。CD4+T淋巴细胞作为反映人体细胞免疫功能的主要指标，其主要负责对抗入侵的病菌，控制多种感染，故CD4+T淋巴细胞水平降低可提示患儿免疫功能降低，从而使发生病毒感染性疾病的风险增大，且易加重病情；CD8+T淋巴细胞主要源于白细胞分化，其可辅助T淋巴细胞受体识别抗原、特异性地杀伤靶细胞等，故患儿发生病毒感染疾病时，其水平较高[11]；CD3+T淋巴细胞主要通过与T淋巴细胞抗原受体结合，从而共同参与T淋巴细胞对抗原的识别、标记，当患儿发生病毒感染性疾病时，其水平偏高；CD4+/CD8+比值可作为反映细胞免疫反应是否平衡的敏感指标，当患儿发生病毒感染性疾病时，其比值降低，表示免疫功能受到抑制，机体防御能力降低[12]。

本研究结果显示，观察组患儿外周血淋巴细胞比例、WBC高于对照组(P<0.05)，外周血单核细胞比例与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)，外周血CD4+T淋巴细胞水平和CD4+/CD8+比值低于对照组(P<0.05)，外周血CD8+T淋巴细胞水平高于对照组(P<0.05)，外周血CD3+T淋巴细胞水平与对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。这表明当患儿发生EB病毒感染疾病时，其机体外周血T淋巴细胞亚群、WBC、淋巴细胞水平会发生变化，诱导一系列的免疫应答反应，进而对抗病毒感染，减轻机体损伤，与雷勋明等[13]研究结果基本一致。在EB病毒感染患儿中，其不同的病毒载量可反映机体感染的严重程度，病毒载量越高表明患儿的病情越重。本研究结果显示，与EB病毒DNA≥1×105copy/mL的患儿相比，EB病毒DNA<1×105copy/mL患儿的外周血CD4+T淋巴细胞水平和CD4+/CD8+比值较高，外周血CD8+、CD3+T淋巴细胞水平较低，表明当患儿发生EB病毒感染疾病时，其病情严重程度可随病毒载量的增加而加重，且机体免疫功能下降，与荣婷婷等[14]的研究结果基本一致。

综上所述，EB病毒感染患儿外周血T淋巴细胞亚群、WBC、淋巴细胞水平异常，诱发免疫应答反应，同时其病情严重程度可随病毒载量的增加而加重。因此，临床可通过外周血T淋巴细胞亚群、WBC、淋巴细胞检测，以评估EB病毒感染患儿的实际病情及预后情况。