山东省部分地区规模化奶牛场副结核病血清学调查

陈志远，张宇名，迟丽丽，李树凡，王昆，徐守振

（1.青岛农业大学动物医学院，青岛 266109；2.青岛高通农业科技有限公司，青岛 266109）

牛副结核病（Bovine paratuberculosis）是主要由副结核分枝杆菌（MAP）引起的牛的慢性、增生性、顽固性肠炎和以消瘦为特征的传染病[1]。根据菌株培养特性及致病力的不同将副结核分枝杆菌分为3个亚型[2]。牛副结核病主要侵害的是消化道，回肠是最常见的感染部位，病畜的临床表现是持续性下痢、渐进性变瘦、生产能力下降。牛副结核病流行的范围比较大，多呈隐性感染且潜伏期比较长，往往得不到重视。该病没有特定的治疗方法，反刍动物是该病的主要宿主，除此之外还有猪、马和野生动物也有一些发病的现象，我国将其列为二类传染病[3]。世界上多个国家都出现过牛副结核病，如美国、英国、荷兰、丹麦、澳大利亚等国家。在美国，由于副结核病感染患病引起的年度损失已经高达2.25亿美元[4]。牛副结核病在我国大部分地区都存在，各个地区的感染率也比较高，给我国的养牛业带来了巨大的经济损失。因此，进一步全面开展牛副结核的流行病学调查，明确流行规律十分重要。2017年高海慧对宁夏地区9个奶牛养殖场随机采血1 796份进行奶牛副结核检测，结果显示，样品血清平均抗体阳性率为4.29%[5]。林涛和陈丰伟分别对北京市规模化奶牛场进行副结核血清学检测，结果显示，血清平均抗体阳性率分别为20.36%和13.39%[6]。山东省也是牛副结核病发生比较严重的地区，但目前鲜有对山东省各地区牛副结核病的血清学调查。为了解山东各地区副结核分枝杆菌的感染情况，本调查采用ELISA方法对2018年2月-2019年11月期间山东省9个地区的18个奶牛场2岁以上所有泌乳奶牛进行了副结核病的血清抗体检测，为山东省牛副结核病的综合防控提供参考。

1 材料与方法

1.1 被检血清

样品来自2018年2月-2019年11月期间山东省9个地区18个奶牛养殖场，采样对象为2岁以上泌乳牛，全群检测，共采集疑似牛副结核病的血清样品3 253份，其中济南454份、滨州413份、济宁165份、菏泽376份、聊城263份、青岛270份、潍坊367份、威海184份、德州501份。其中大型养殖场（≥1 000头）6个，样品总数为848份；中型养殖场（501～999头）6个，样品总数为1 673份；小型养殖场（100～500头）6个，样品总数为732份。

1.2 检测试剂盒

牛副结核分枝杆菌抗体检测试剂盒，购自IDEXX公司。

1.3 结果判定

抗体检测按照IDEXX ELISA试剂盒的说明书进行操作。用酶标仪在450nm波长下测定每个孔的OD值。试验结果成立的条件为：阳性对照OD450平均值≥0.350，且阳性对照OD450的平均值与阴性对照OD450的比值≥3.00，检测的结果有效，否则试验不成立，应重新检测。按照以下S/P百分值计算判定每个样品的结果：S/P（%）=100×（OD样本-OD阴性）/（OD阳性-OD阴性）。当样品的S/P≤45%，判为抗体阴性，样品45%＜S/P＜55%，判为抗体可疑；样品的S/P≥55%，判为抗体阳性。

1.4 统计分析

应用Origin2019软件对数据进行地区内差异显著性分析及置信区间上下限计算，P＞0.05为差异不显著，P＜0.05为差异显著，P＜0.01为差异极其显著。

2 结果与分析

2.1 牛副结核病总体调查结果

2018年2月-2019年11月期间山东省9个地区18个奶牛养殖场共采集血清样品3 253份，其中可疑病例21例，阳性病例579例，总体阳性率为17.80%（579/3253），其中2019年阳性率为22.31%（441/1976）；2018年阳性率为11.24%（138/1227）。

2.2 不同地区牛副结核病血清抗体的检测结果

检测结果表明，9个地区均检出抗体阳性奶牛，但不同地区阳性率有所不同，其中济南抗体阳性率最高为40.75%（185/454），聊城次之，阳性率为21.17%（57/263），威海抗体阳性率最低为5.98%（11/184），见表1。根据软件计算得出各地区区内置信区间均差异不显著（P＞0.05）。9个地区分布情况（图1），济南与其他地区均差异显著（P＜0.05），威海与潍坊差异不显著（P＞0.05），与其他地区差异显著（P＜0.05）。9个地区之间的阳性率差异显著性情况见表2。说明各地区之间的置信区间存在很大的差异，牛副结核病在山东省是普遍存在的。

表1 不同地区牛副结核病血清抗体的检测结果

图1 不同地区分布情况及牛副结核病血清抗体的检测结果

表2 不同地区牛副结核病阳性率差异显著性情况

2.3 不同月份牛副结核病血清抗体的检测结果

2018年2月-2019年11月期间，不同月份存在明显差异，其中8月份最高，为80.00%，7月份次之，为52.70%，2月份最低，为6.27%（图2）。

图2 不同月份牛副结核病血清抗体的检测结果

2.4 不同规模养殖场牛副结核病血清抗体的检测结果

6个大型养殖场的抗体阳性率为15.57%（P＞0.05），6个中型养殖场的抗体阳性率为20.14%（P＞0.05），6个小型养殖场的抗体阳性率为15.30%（P＞0.05），中型养殖场的抗体阳性率均大于大型和小型养殖场（表3），不同规模的养殖场之间牛副结核病阳性率均差异不显著（P＞0.05），见表4。

表3 不同规模养殖场牛副结核病血清抗体的检测结果

表4 不同规模养殖场牛副结核病阳性率差异显著性情况

3 讨论

牛副结核病是一种慢性消耗性疾病，主要临床症状包括腹泻、肠炎、体重迅速减轻、产奶量下降等，奶牛养殖场一旦有牛感染了该病可以从粪便中排出大量的病原菌，因此，病牛和带菌牛是该病重要的传染源[7]。怀孕母畜一旦感染，犊牛通过吮吸母牛乳汁经口感染，也可通过子宫垂直感染胎儿，子宫感染率可达50%以上[8]，致使胎儿先天感染，进而引起死亡。崔金磊对我国部分省（区）规模化牧场牛副结核病的流行病学调查发现，牛副结核分枝杆菌抗体总体阳性率为2.59%，其中安徽省8.00%、四川省5.23%、湖北省2.05%[9]。何利昆对辽宁省2017年14个地市奶牛场的860份牛血清样品进行了副结核病抗体检测，结果显示，所检血清样品总阳性率为5.6%[10]。韩猛利用提纯副结核菌素进行皮内变态反应的方法对2010-2012年山东省规模化奶牛场进行了流行病学调查，2012年牛副结核阳性率由2010年的29.34%下降到14.93%[11]。本次调查结果显示2018年2月-2019年11月山东省9个具有代表性的地区牛副结核总体阳性率为17.80%，与韩猛的调查结果基本吻合，但阳性率有所升高。调查结果表明，山东省牛副结核病的感染情况在国内处于较高水平，应引起饲养者和有关部门的重视。

山东省9个地区均检出了奶牛副结核抗体阳性病例，但各地区差异较大，其中济南地区最高，为40.75%，这可能与该地区养殖场的养殖模式、2岁以上泌乳牛的饲养管理水平、采样季节有一定的关系；该地区的养殖模式以规模化养殖为主，但是某些养殖场的饲养方式比较粗放，管理不够规范，对牛舍的消毒措施不到位，这些因素都有可能造成奶牛副结核病的发生。威海地区最低，为5.98%，可能与地理位置、气候差异有关。该地区的气候条件适宜，养殖场比较重视牛舍的卫生、清洁与通风换气，生物安全防范措施到位，这些措施都降低了奶牛副结核病的发生几率。各地区之间的置信区间存在很大差异，可能与牛群的健康状况、各地的动物疫病防控政策、养殖场规模化的程度，以及饲养管理有很大关系。牛副结核一年四季都有可能发生，但不同月份牛副结核血清抗体阳性率差异较大。其中8月份最高，为80.00%，7月份其次，为52.70%，2月份最低，为6.27%，这可能与气候条件有关，夏季天气炎热，温度、湿度高，有利于各种昆虫、细菌的孳生，昆虫可作为传播媒介，加快该病原菌的扩散和传播。本调查显示，牛副结核病血清抗体在不同规模养殖场阳性率为15.30%～20.14%，中型养殖场的阳性率最高，为20.14%，高于大型和小型养殖场，而大型和小型养殖场阳性率差别不大。鄢志刚在2017年对上海崇明地区6个规模化奶牛场副结核抗体检测结果表明，有4个奶牛场检出血清阳性牛，不同规模牛场的阳性率分别为：大型牛场1.8%、中型牛场7.7%、小型牛场8.6%[12]，这与本调查结果略有差异，可能与样本量大小有关。大型养殖场机械化程度较高，防控消毒措施、生物安全管理严格到位，阳性率相对较低。小型养殖场饲养数量少，易于饲养管理，所以阳性率较低。中型养殖场之所以阳性率较高，可能是养殖场对该病的重视程度不够，防控措施不到位所致。

4 结语

牛副结核病在不同地区、不同规模的养殖场中一年四季都有可能发生，且病原对外界的抵抗力较强，可在环境中存活较长时间，多数病畜呈隐性感染，可长期向体外排菌，无明显的临床症状，不易引起养殖人员的重视，可给养殖场造成很大的经济损失，也威胁着公共卫生安全。由于该病没有有效的治疗措施，也没有特异性的疫苗，因此，加强预防、尽早诊断、及时淘汰是控制该病流行的关键。养殖单位和防疫部门对此应高度重视，要加强预防控制，定期检疫，尽早发现病畜并及时隔离和淘汰，以实现牛群的净化，促进奶牛养殖业的健康发展。