HPLC法测定香莲祛痛霜中血竭素含量

陈依春　孙芳云　张芳侠　郝婷婷　李捷　朱爱华

【摘 要】 目的：采用高效液相色譜（HPLC）法建立香莲祛痛霜血竭素含量的测定方法。方法：按照HPLC法（中国药典2015年版四部通则）测定。色谱条件与系统适用性试验色谱条件。色谱柱：AgilentC18（250 mm×4.6 mm，5 μm）; 流动相：乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钠溶液（45∶55）;检测波长：440 nm;流速：1 mL/min;柱温：40 ℃;进样体积：10 μL。结果：血竭素对照品溶液，以浓度对峰面积进行回归，在5.817～58.17 μg/mL之间呈线形关系，平均峰面积675.2，RSD为0.35%;香莲祛痛霜平均峰面积314.7，RSD为1.36 %;稳定性试验血竭素高氯酸盐对照品溶液均峰面积674.6， RSD为0.25%，样品中血竭素高氯酸盐平均峰面积362.2，RSD为2.32%;血竭素高氯酸盐的平均回收率为97.8%，RSD（n=9）为2.29%;三组不同批次的样品1 g血竭素含量为0.03248%。结论：本方法简便易行，结果准确，重复性好，可作为香莲祛痛霜质量控制标准使用。

【关键词】 香莲祛痛霜;血竭素;高效液相色谱;质量标准

【中图分类号】R284.1【文献标志码】 A  【文章编号】1007-8517（2022）05-0042-04

基金项目：西藏自治区科技厅-香莲祛痛霜Ⅱ期临床试验研究（No.2015xzo1G62）;陕西省科技统筹创新工程计划（2015KTCQ03-07）。

作者简介：陈依春（1990-），女，汉族，硕士，讲师，研究方向为藏药筛选及药理药效研究。E-mail： 15835116973@163.com

通信作者：朱爱华（1960-），女，汉族，本科，研究员，研究方向为中药新药开发研究。E-mail： dlg606 @ 163.com

Determination of Dracodrin in Xiang Lian Qu Tong Cream by High-Performance Liquid Chromatography

CHEN Yichun1 SUN Fangyun1 ZHANG Fangxia1 HAO Tingting1 LI Jie1 ZHU Aihua^2*

1.Engineering Research Center of Tibetan Medicine Detection Technology， Ministry of Education， Basic Research Laboratory

of Life Science and Tibetan Medicine Screening Laboratory of Basic Medical College of Tibetan University for Nationalities，

Xianyang 712082，China;

2.Shanxi Institute of Traditional Chinese Medicine， Xi'an 712000， China

Abstract：Objective To establish a High-Performance Liquid Chromatography（HPLC） method for the determination of dracodrin in Xiang Lian Qu Tong cream. Methods According to the four general principles of Chinese Pharmacopoeia 2015 edition. Chromatographic Conditions and System Applicability Test Chromatographic Conditions. Chromatographic Column： Agilent C18（250 mm×4.6 mm， 5 μm）; Mobile Phase： Acetonitrile-0.05 mol/L Sodium Dihydrogen Phosphate Solution（45∶55）; Detection Wavelength： 440 nm;Flow Rate： 1 mL/min; Column;Temperature： 40 ℃;Injection： 10 μL. Results dracorhodin reference solution showed a linear relationship between 5.817 and 58.17 μg/mL， with an average peak area of 675.2 and RSD of 0.35%. The average peak area of Xianglian Qutong Cream was 314.7 and RSD was 1.36%. The average peak area of dracorhodin perchlorate reference solution was 674.6 and RSD was 0.25%. The average peak area of dracorhodin perchlorate was 362.2， RSD was 2.32%. The average recovery rate of dracorhodin perchlorate was 97.8%， RSD（n=9） was 2.29%. The content of dracorhodin in 1 g of three groups of samples was 0.03248%. Conclusion The method is simple， accurate and reproducible. It can be used as the quality control standard of Xianglian Qutong Cream.335A77C9-C0DD-45C5-936F-EC0409F51462

Key words：Xiang Lian Qu Tong Cream; Dracorhodin; High-performance Liquid Chromatography; Quality Standard

香莲祛痛霜为国家六类新药，为中藏药复方制剂，由雪莲花、乳香、没药、西红花等十五味中藏药组成，具有活血化瘀，消肿止痛的功效，主治软组织挫伤和关节扭伤^[1]。该新药已完成新药临床前研究，取得了临床批件（批件号：2008 L02173）。已经完成1期临床试验，临床实验对生命体征、神经系统、呼吸系统、心血管系统、消化系统等进行观察， 均未发生不良事件^[2]。本次研究的主要内容：按照国家食品药品监督管理局《中药、天然药物注册分类及申报资料要求》中药六类的要求及临床批件的要求，建立主药和贵细药材血竭素含量测定方法，确定质量控制标准，完善质量标准，完成香莲祛痛霜Ⅱ期临床试验，为Ⅲ期临床研究给药剂量方案提供依据，为市场提供优效、安全、质量可控的新药产品。

1 实验材料

1.1 仪器 Agilent 1260液相色谱仪，电子分析天平AG 135（德国METTLE ）。

1.2 试剂与对照品 试剂：二水和磷酸二氢钠（分析纯）天津盛奥化学试剂有限公司;对照品：血竭素高氯酸盐对照品（批号为：0811-9302），购于中国药品生物制品鉴定所;乙腈：色谱纯 fisher scientific;甲醇：色谱纯 fisher scientific;磷酸：分析纯 成都市科龙试剂厂。

1.3 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：Agilent C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）;流动相：乙腈-0.05 moL/L磷酸二氢钠溶液（45∶55）;检测波长：440 nm;流速：1 mL/min;柱温：40 ℃;进样量：10 μL。

2 实验方法

2.1 对照品溶液的制备 精密称取血竭素高氯酸盐对照品8.01 mg置于10 mL棕色量瓶中，用12%磷酸甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为浓度为58.17 μg/mL血竭素储备液，吸取储备液1 mL于10 mL棕色量瓶中，用12%磷酸甲醇稀释至刻度，摇匀，作为血竭素二级储备液。精密吸取二级储备液5 mL置10 mL量瓶中，用12%磷酸甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，即得浓度为29.08 μg/mL血竭素对照品溶液。（血竭素重量=血竭素高氯酸盐重量/1.377）。

2.2 供试品溶液的制备 精密称定样品2 g，置25 mL棕色量瓶中，加12%磷酸甲醇定容至刻度，摇匀，超声处理30 min放冷，用12%磷酸甲醇补足缺失重量，过滤即得。

2.3 线性关系的考察 精密吸取储备液浓度为58.17 μg/mL对照品溶液1.0 mL置于10 mL棕色量瓶中，用12%磷酸甲醇定容，得浓度为5.817 μg/mL的溶液;精密吸取储备液5 mL置于10 mL棕色量瓶中，用12%磷酸甲醇定容，得浓度为29.08 μg/mL的溶液;精密吸取濃度为29.08 μg/mL的溶液5 mL置于10 mL棕色量瓶中，用12%磷酸甲醇定容，得浓度为14.54 μg/mL的溶液;精密吸取二级储备液7.5 mL置10 mL量瓶中，用12%磷酸甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，即得浓度为43.63 μg/mL血竭素对照品溶液。以浓度对峰面积进行回归，在5.817～58.17 μg/mL之间呈线形关系。

3 结果

3.1 线性关系考察结果 详见表1。

3.2 精密度试验 精密吸取对照品溶液，连续进样5次，测得面积值。结果见表2。精密吸取供试品溶液，连续进样5次，测得面积值。结果见表3。

3.3 溶液稳定性试验 取血竭素高氯酸盐对照品溶液进样，考察12 h血竭素高氯酸盐对照品稳定性。结果见表4。取同一样品溶液进样，考察12 h血竭素高氯酸盐稳定性结果见表5。试验结果表明，供试品溶液、对照品溶液在12 h内是稳定的。

3.4 重现性试验 取同一批号供试品5份，精密称定，按供试品溶液制备方法制备，分别取10 μL溶液注入液相色谱仪，记录血竭素高氯酸盐面积值，按外标法计算含量。结果见表6。

3.5 加样回收试验 取已测定含量的供试样品适量，精密称定后，分别置5 mL棕色容量瓶中，共9份，3份为一组，每组分别加入浓度为14.54 mg/mL、29.08 mg/mL、43.63 mg/mL血竭素高氯酸盐对照品溶液2 mL，加12%磷酸甲醇定容至刻度，摇匀，超声处理30 min放冷，用12%磷酸甲醇补足缺失重量，即得。按拟订的方法进行回收实验，结果见表7。结果表明，本方法血竭素高氯酸盐的平均回收率为97.8%，RSD（n=9）为2.29%，回收率符合要求。

3.6 三批样品含量测定 精密称取三组不同批次的样品1g，每批次称取两次制成平行样。编号为1-1、1-2;2-1、2-2;3-1、3-2。按照供试样品配制方法：精密称定样品2g，置25 mL棕色量瓶中，加12%磷酸甲醇定容至刻度，摇匀，超声处理30 min放冷，用12%磷酸甲醇补足缺失重量，过滤即得。

依次配成三组平行样，用既定的液相条件进行检测。检测结果见表8。

4 讨论

香莲祛痛霜是以药材中所含有效成分理化性质研究的基础上，按照其有效成分构成和性质来确定生产工艺路线的。其中处方中的血竭属于贵细药，进行倍力微粉技术制备微粉进入制剂。血竭为棕榈科植物麒麟竭Daernonorops draco Bl.果实渗出的树脂经加工制成。根据《中华人民共和国药典》2015年版一部血竭项下血竭素含量测定的方法，采用高效液相色谱法对香莲祛痛霜中血竭素的含量进行了测定，在研究中流动相采用乙腈与0.05 mol/L磷酸二氢钠溶液^[3]，参考相关文献^[4-5]，对乙腈和0.05 mol/L磷酸二氢钠的配比进行了优化。当乙腈的比例增加时，血竭素的保留时间过短，出现杂峰干扰，将二者的配比定为45∶55时，能得到良好的分离效果。

本研究采用高效液相色谱法建立香莲祛痛霜血竭素含量的测定，经考察，该方法精密度高，重复性好，回收率符合定量分析要求，结果准确，重复性好，可作为香莲祛痛霜质量控制标准使用。

参考文献

[1]孙芳云， 张敏， 曾南阳，等. 香莲祛痛霜的镇痛及活血化瘀作用研究[J]. 中药药理与临床，2004， 20（2）： 46-47.

[2]赵丽丽， 姜春梅， 赵春艳，等. 香莲祛痛霜Ⅰ期临床耐受性试验研究[J]. 中药药理与临床， 2013， 29（6）： 166-168.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M]. 北京：中国医药科技出版社， 2015.

[4]何轶， 丁宁， 王瑞忠，等. 冠脉宁片中化工染料检查及血竭素高氯酸盐含量测     定研究[J].中国药学杂志， 2015， 50（2）： 120-124.

[5]康勤洪，王雨来.络能片中血竭素含量的反相高效液相色谱法测定[J]. 时珍国      医国药， 2014， 25（3）： 608-609.

（收稿日期：2021-07-12 编辑：陶希睿）335A77C9-C0DD-45C5-936F-EC0409F51462