犊牛大肠杆菌分离鉴定与药敏试验

李国良 吉春花

摘要：犊牛腹泻通常是由致病性的大肠杆菌侵染引发的一种威胁严重的消化道疾病，短时间内引发大量的新生犊牛死亡，造成的经济损失不可估量。犊牛出生后由于机体的抗病能力较差，身体抵抗能力不足，胃肠道消化功能不完善，再加上养殖管理不当，面临较多应激因素刺激，会给致病性大肠杆菌的侵染提供条件。2周龄内的哺乳犊牛受大肠杆菌危害较为严重，感染后常会出现严重的腹泻和败血症，死亡率达30%以上。为了了解青海省海西州大肠杆菌病的发生情况，针对海西州某养殖场的发病情况进行了大肠杆菌病的分离鉴定和药敏试验，筛选出几种敏感药物，为大肠杆菌病的防治治疗奠定坚实基础，避免了不科學用药造成的大肠杆菌产生耐药性的问题。

关键词：犊牛腹泻;大肠杆菌病;分离鉴定;药敏试验

中图分类号：S858.23文献标识码：Bdoi：10.3969/j.issn.2096-3637.2022.01.026

Isolation，Identification and Drug Sensitivity Test of Calf Diarrheal Escherichia coli LI Guoliang，JI Chunhua

（Datong Cattle Breeding Farm，Qinghai Province，Datong Qinghai 810102，China）

Abstract：Calf diarrhea is usually a serious gastrointestinal disease caused by pathogenic Escherichia coli infection. It will cause a large number of newborn calves to die in a short period of time，and the economic loss is immeasurable. After the calf is born，due to poor disease resistance，insufficient body resistance，imperfect digestive function of the gastrointestinal tract，and improper breeding management，it will face more stress and stimulation，which will infect pathogenic E.coli provide conditions .Suckling calves within 2 weeks of age are more severely affected by E.coli，and severe diarrhea and sepsis often occur after infection，and the mortality rate is as high as 30%.In order to understand the occurrence of colibacillosis in cattle breeding farms in HaiXi County，Qinghai Province，the isolation and identification of colibacillosis and drug sensitivity test were carried out for the incidence of a breeding farm and several sensitive drugs were screened for the prevention and treatment of colibacillosis.The work laid a solid foundation and avoided unscientific use of drugs，which caused E. coli to develop drug resistance.

Keywords：calf diarrhea ，colibacillosis，isolation and identification，drug sensitivity test

0引言

犊牛腹泻性大肠杆菌病是新生犊牛群体中发病流行率较高的一类细菌性传染性疾病，有时发病率高达90%，致死率高达30%。犊牛腹泻性大肠杆菌病主要表现为严重的腹泻和败血症，机体严重脱水，短时间内死亡，即便是能够渡过急性期，也会表现为生长发育不良，甚至停止生长，使犊牛的淘汰率显著升高，危及到养殖场的经济效益。随着牛养殖业的迅猛发展，需要养殖户高度重视犊牛腹泻性大肠杆菌病的针对性防控，及时采取措施做好有效的病原分离鉴定，并筛选出敏感的药物，确保短时间内将病情控制住，避免病原产生耐药性，保证防治的针对性、合理性。

1养殖场发病情况

青海省海西州的某种牛场以养殖牦牛为主，2020年3月13日，在新生犊牛群体中出现一类腹泻疾病，患病牛表现为严重的腹泻，排出的腹泻物中夹杂很多没有消化的凝乳块和饲料，身体迅速脱水，眼球向内凹陷，并表现出不同程度的败血症症状，短时间内出现了死亡病例。发病后种牛场的兽医按照细菌性腹泻开展抗生素治疗，选择青霉素、链霉素、庆大霉素等药物进行治疗，没有取得很好的效果，随后将病情上报上级的兽医站，兽医到达养殖场后结合整体的发病情况和典型的病理解剖，初步判定犊牛为大肠杆菌引发的腹泻，随后采集了病死牛的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、淋巴结组织进行病原分离鉴定。

2病原分离鉴定及药敏试验

大肠杆菌分离鉴定主要涉及到营养琼脂培养基、革兰氏染色液、恒温培养箱、载玻片、药敏试验纸片、光学显微镜、麦康凯琼脂培养基、伊红美蓝琼脂培养基、SS琼脂培养基、高压灭菌蒸汽锅、全自动微生物生化分析仪、药敏鉴定仪、无菌超净工作台。

将上述采集到的病变组织充分研磨之后，划线接种到营养组织培养基和麦康凯琼脂培养基、伊红美蓝琼脂培养基、SS琼脂培养基上，37 ℃放置在恒温培养箱内，持续培养24h。小心挑取分离得到的菌落制作成涂片后，选择使用革兰氏染色液进行全面的染色处理，然后放置在显微镜下观察病原的染色情况[1]。再将分离得到的病原菌放置在鉴定管道中编码处理，持续培养24 h进行生化鉴定。

藥敏试验过程中，将分离得到的致病菌选择使用14 种临床常用的药物进行药敏试验。抑菌圈的直径越大，表示该抗生素对大肠杆菌的敏感性较强，分别判定为高敏、中敏和低敏。

3结果

3.1病原形态分析

通过将采集到的病料经过研磨处理后，划线接种到营养组织培养基和麦康凯琼脂培养基、伊红美蓝琼脂培养基、SS琼脂培养基上，持续培养24 h后，能够发现在普通营养琼脂培养基上生长出灰白色露珠状表面光滑的菌落，在SS琼脂培养基上生长出粉红色的致病菌菌落，在伊红美蓝培养基上生长出了圆形、边缘整齐、中间凸起、表面光滑并携带有紫黑色金属光泽的菌落。在麦康凯琼脂培养基上生长出了圆形、整齐、扁平、光滑、湿润、中心呈深红色的致病菌菌落，结合上述菌落的特征，可以初步判定致病原为大肠杆菌。

3.2染色结果

小心挑取分离得到的致病菌菌落将其涂抹在载玻片上，充分固定之后，选择使用革兰氏染色液对涂片进行全面的染色处理，干燥之后放置在显微镜下观察，能够发现革兰氏阴性染色短小棒状、两端钝圆的杆菌，成对排列或单个存在。

3.3生化鉴定结果

将分离得到的病原在生化培养箱中进行生化鉴定，能够发现分离得到的大肠杆菌对乳糖、麦芽糖、蕈糖、精氨酸双水解酶、山梨醇呈阳性，对乙酰普胺、尿素、木糖醇、硝酸盐呈阴性，结合生化鉴定，可以判定病原为大肠杆菌[2]。

3.4药敏试验结果

从药敏试验结果能够看出，14种临床常用的抗生素中，高敏类的抗生素数量较少，大多呈低敏或者中敏，其中头抱他啶、米诺环素、头抱曲松、头孢唑啉对大肠杆菌敏感，呈高敏反应。详细情况见表1。

4讨论

犊牛腹泻性大肠杆菌病的治疗应结合药敏试验结果，选择头抱他啶、米诺环素、头抱曲松，头抱唑啉等几种抗生素轮换交替使用。避免长时间使用一种抗生素，否则很容易产生耐药性，使得抗生素的使用种类越来越少，给疾病的防控工作带来很大难题。在进行抗菌治疗的同时，还应加强补液和电解质治疗，对于症状相对较轻并出现轻度脱水的病牛，可以口服补液盐，症状较为严重的应该静脉注射葡萄糖和生理盐水。还应该采用强心、利尿、解毒的安钠咖、磺胺类药物、维生素类药物进行联合治疗[3]。在临床诊治中有条件的养殖场一定要进行严格的病原分离鉴定，并在此基础上筛选出敏感的抗生素，然后再进行治疗，避免盲目用药造成不必要的经济损失。

5结束语

临床上由于大肠杆菌病的血清型较多，不同血型的致病性存在很大差异性，且不存在交叉免疫保护，预防该种疾病的难度较大，应结合该地区的疾病发生情况及时血清型鉴定结果，选择符合血清型的疫苗进行针对性的免疫接种，这样能提高疫苗免疫接种的针对性和科学性。日常养殖管理中，应该将“预防为主”的理念全面融入到犊牛养殖环节，加强对新生犊牛的有效护理，常发地区应该每年进行疫苗免疫接种，提高牲畜的身体抵抗能力。一旦出现患病病例，做好彻底的隔离清理和卫生消毒，加强养殖管理，做好环境卫生调控，营造不利于大肠杆菌传播流行的环境，确保牛养殖安全。

参考文献

[1]王传春，袁东方，孙秋艳，等.禽致病性大肠杆菌的分离鉴定及致病性研究[J].山东畜牧兽医，2017，38（3）：8-9.

[2]方光远，张莉，陆宇超，等.犊牛腹泻大肠杆菌的分离鉴定和耐药性检测[J].中国畜牧兽医，2014，41（9）：273-277.

[3]陈虹豆，张伟锋，徐智亮，等.2株致犊牛腹泻大肠杆菌的分离鉴定和药敏试验[J].畜牧与饲料科学，2019，40（2）：108-112.