和田羊（多胎型）胚胎移植报告

文│陈童 董红 田月珍（新疆畜牧科学院畜牧研究所）

玛哈巴·肉孜 霍飞（新疆维吾尔自治区畜牧总站）

阿布力克木·阿地力 张万超（新疆维吾尔自治区和田地区畜牧技术推广站）

和田羊是新疆维吾尔自治区和田地区畜牧养殖的主要畜种，为短脂尾异质半粗毛羊。以能适应荒漠生态环境、肉质鲜美、生产优质地毯毛而著称，是新疆的一个优良地方品种，具有耐热、耐干旱、耐粗饲等优点。和田羊饲养业的发展速度关系到和田地区畜牧业经济效益的高低，直接关联着产业链的形成，更是农牧民增收的重要途径，在和田地区经济发展中发挥着重要作用。2006年，和田羊被列入国家级畜禽遗传资源保护名录；2008年，国家将和田地区列入国家级和田羊保护区。和田羊肉特别是羔羊肉具有极好的适口性，凡品尝过和田羊肉的区内外人士一致认为和田羊肉鲜嫩可口、膻味极小，不管以何种方式烹调，口味都极为鲜美，是其他品种绵羊肉无法比拟的。而用和田羊毛织制的“和田地毯”更是以优美的图案、精细的工艺和经久耐用的质地誉满国内外。近年来，和田羊通过产羔情况进行表型筛选和分子检测，逐步组建了和田羊（多胎型）群，为快速扩大该群体数量，使用胚胎移植技术增加其数量，冷冻胚胎作为遗传资源保存，现就此次胚胎移植情况总结如下。

一、材料与方法

1.实验动物。供体羊为和田羊（多胎型），年龄2～4岁（均有产羔史），平均体重50千克，受体羊为经产湖羊和和田羊，无疫病、膘情中上等。种公羊选择个体发育健壮、性欲旺盛，年龄2～4岁。供体母羊、公羊提前一个月进行补饲，于2021年11月24日～12月16日开展超数排卵、冲胚、移植工作。

2.激素及药品。处理过程中所使用的促卵泡素（FSH）、促黄体素（LH）和前列腺素（PG）、促排卵素3号（A3）、黄体酮均由宁波三生生物科技股份有限公司生产；并准备冲胚液、胚胎保存液、胚胎冷冻液、酒精、碘酒、新洁尔灭、静松灵、抗生素、生理盐水等。

3.仪器。沈阳沈大内窥镜有限公司生产的内窥镜系统，体视显微镜，程序降温仪CryoLogic CL8800。

4.超排与同期发情方法。供体羊处理方法：供体羊全部注射前列腺素，9天后再次注射前列腺素，按照发情羊情况进行分组。第11～13天（发情计为第0天）开始分3天6次进行FSH剂量递减超排，药物总剂量为450国际单位/只，第5次注射FSH时注射PG0.1毫克/只，24小时后全部发情。受体羊处理方法：受体羊全部注射前列腺素，9天后再次注射前列腺素，同组受体羊与供体羊发情时间尽量保持一致，不要相差超过12小时。

5.发情鉴定与配种。每日用试情公羊早、晚试情两次，每次试情时间1小时左右。配种前对公羊精液品质进行严格检验，供体羊发情后12小时第一次自然交配并注射促排卵素3号，之后每间隔8～12小时配种1次，累计自然交配2～3次，如果使用人工授精的方法，应保证3次。

6.胚胎的收集和移植。供体羊在确定发情后的第七天开始冲胚，手术间温度控制在20℃以上。手术法将子宫从创口牵引出暴露在表面后，记录排卵黄体数，用带有软化胶管的肠钳夹在子宫角分叉位置，注射器抽取冲卵液20～30毫升，冲卵注射针头在子宫角尖端位置缓慢插入，当确认针头在管腔内进退通畅时，将输液针连接在注射器上，缓慢推注冲卵液。当子宫角膨胀时，避开血管把回收针头从肠钳基部扎入，调整针头保持冲卵液流畅的进入集卵皿内，最后用手指夹住子宫将子宫捋一遍。另一侧子宫角使用相同的方法冲胚。注意推注冲卵液时力量和注射速度不宜过快。胚胎移植能否成功的关键因素取决于胚胎质量的好坏。通过在体式显微镜上对回收液中的胚胎进行形态学鉴定，选择形态结构完整、紧凑、轮廓清楚、卵裂球大小均匀、呈球形、透明度适中且无附着的细胞和液泡的一级（A级）、或二级（B级）胚胎进行移植。确定胚胎所处时期，在对胚胎质量鉴定时要同时考虑胚胎日龄，结合其发育情况判断好坏，然后确定胚胎用于移植或保存。冷冻胚胎一般选择一级（A级）进行冷冻。受体羊采用内窥镜微创手术，检查卵巢排卵情况，牵引出子宫角并将胚胎移植于子宫体内后注射黄体酮。

二、结果

1.超排与冲胚结果。由表1可知，19只和田羊（多胎型）供体共清点黄体（白体）数量237个，回收胚胎197枚，胚胎回收率为83.1%，只均胚胎回收数达10.4枚，B级以上可用胚胎153枚，胚胎可用率77.7%，只均胚胎可用数达8.1枚。

表1 冲胚结果

2.胚胎移植结果。由表2可知，由于此次胚胎移植超排效果显著，受体数量不足，共移植61只受体，其中25只受体移植双胚（A级+B级），36只受体单胚（A级）移植，使用鲜胚86枚；剩余67枚胚胎进行冷冻。移植后36天（2022年1月16号）进行B超孕检，共怀孕35只，受胎率达到57.4%。

表2 受体移植结果

三、讨论与小结

1.本次胚胎移植超排时FSH总剂量为450国际单位/只，从获得胚胎数量上看，结果比较理想。但个别供体羊出现黄体退化（白体）情况，可能与个别供体在超排中FSH剂量过高引起黄体过早发生退化有关。

2.科学的饲养管理在胚胎移植前期和后期非常重要。供体羊、受体羊需要均衡的营养，保持良好的体况，防止饲喂劣质饲草料。在胚胎移植进入准备阶段后（从开始药物处理到胚胎移植手术开始前），禁止使用药物或发生外界刺激，防止药物或应激对胚胎产生和发育带来不良影响。舍饲环境下应满足阶段性营养需要，防止挤压碰撞。放牧条件下应对受体羊适度补饲，防止远牧。因此，科学的饲养管理是受体羊获得理想受胎率的重要措施。

3.母羊生殖器官的内分泌环境、生化水平和组织学特性对处于不同发育阶段的胚胎有不同的影响。因此，供体提供的胚胎应移植给和供体处于相应生理阶段的受体才能继续发育。受体羊和供体羊的发情同步差控制在12小时以内。

4.在胚胎移植过程中，捡胚操作时室温应保持在22～25℃，手术室和捡胚操作室的温度应尽可能保持一致，避免温度差异过大影响胚胎质量，从而影响受胎率。

5.在鲜胚移植时，为降低外部环境的不良影响，提高移植受胎率，体外保存胚胎的时间要尽可能缩短。如果胚胎需要在外界保存较长时间，建议间隔2小时更换一次胚胎保存液，且温度保持在20～25℃，保存温度不宜过高。

6.胚胎移植成功与否在实际操作过程中受技术和熟练程度约束，每个环节都直接决定胚胎移植的效果。特别是手术过程要求操作人稳重、熟练、轻巧、速度适中；在子宫腔注入胚胎时不能用力过猛，避免把胚胎送入到输卵管而发生异位妊娠；但速度太慢，输卵管、子宫等裸露在外部时间太久，会增加被污染的概率，同时也增加了胚胎受损风险；术者手、臂、手术器械等对子宫会有强烈刺激，对输卵管进行拉扯也会带来一定的不良影响。

7.为保证供体能重复使用，要求从事胚胎移植的技术人员要有较为熟练的外科手术经验，细致的操作和各环节相互配合，为提高供体利用率，最好是冲胚结束后自然繁殖1次。