血培养报阳时间联合PCT检测在血流感染中的应用价值

谭积善，唐 璐，蒲晓凤，王 琴，李艳梅，汪 璐，袁春兰，刘 媛

西部战区总医院检验科，四川成都 610083

血流感染属于临床上最危重的全身性感染，是病原菌进入血液释放毒素导致[1]，可能会造成感染性休克及多器官功能障碍，其病死率高达50%[2]，而诊断延误是导致高病死率的重要因素，因此，早期诊断并积极采取治疗措施至关重要[3]。诊断血流感染的重要方法是血培养，但是就现阶段技术水平来看，血培养常存在无法避免的标本污染情况，这也造成了临床上误诊和漏诊的发生，所以准确辨别感染菌及污染菌是十分必要的。降钙素原(PCT)常被临床用于细菌引起的相关疾病的诊断及疗效监测，对比其他判断细菌感染的相关指标，PCT对严重的细菌感染，特别是脓毒症这类疾病诊断快速、特异度高，其诊断结果有一定的参考价值[4]。本研究对血培养阳性标本的菌群分布、报阳时间以及PCT水平进行了分析，旨在判断血培养联合PCT在血流感染中的应用价值，现将结果报道如下。

1 材料与方法

1.1标本来源 选取2016年8月1日至2018年7月31本院临床科室送检的血培养结果为阳性，同时还进行了PCT检测的标本，共426份为研究对象。

1.2仪器与试剂 VIDAS全自动免疫检测系统，BacT/ALERT 3D全自动血培养仪，VITEK2-Compact全自动细菌鉴定及药敏分析仪及其配套试剂，所有仪器均购买自法国生物梅里埃公司。细菌鉴定及药敏试验质控菌株包括大肠埃希菌ATCC 25922(美国模式培养物集存库)，金黄色葡萄球菌ATCC 29213、阴沟肠杆菌ATCC 700323、腐生葡萄球菌ATCC BAA750(中国工业微生物菌种保藏管理中心)。

1.3方法 血清PCT水平检测采用的方法为酶联荧光分析法。按照血培养操作规范进行标本的采集与培养，在患者出现发热时，立即抽取5～10 mL静脉血并注入配套的无菌血培养瓶内(1套血培养包含需氧瓶1个及厌氧瓶1个)，然后将培养瓶放入BacT/ALERT 3D全自动血培养仪进行孵育、混匀，同时进行连续不断的检测。如果在该检测过程中有阳性标本出现，则利用血琼脂平板及麦康凯平板对细菌进行分离纯化，必要时还可以加种巧克力平板和沙保弱琼脂平板，随后通过VITEK2-Compact全自动细菌鉴定及药敏分析仪进行菌株鉴定和药敏试验，具体的操作步骤根据厂家说明书进行。记录血培养报阳时间、细菌种类及药敏试验结果。

1.4判断标准 血培养阳性标准是培养出菌株并鉴定出菌株的种类；PCT>0.5 ng/mL为全身细菌感染，PCT在0.05～0.5 ng/mL为不明确，PCT<0.05 ng/mL为污染。

1.5统计学处理 采用SPSS21.0、WHONET5.5软件进行数据处理。不符合正态分布的计量资料用M(P25,P75)表示；计数资料以例数或率表示。

2 结 果

2.1病原菌血培养报阳时间及构成比分布 检出的病原菌中占比最高的是肠杆菌目细菌，有190株(44.6%)，主要为大肠埃希菌(124株)及肺炎克雷伯菌(43株)；其次是凝固酶阴性葡萄球菌51株(11.97%)。病原菌血培养报阳时间最短的是金黄色葡萄球菌，为15.50(15.00,39.12)h，其次为肠杆菌目细菌，为18.26(14.62,24.04)h，肺炎链球菌/无乳链球菌为19.21(14.42,35.74)h，铜绿假单胞菌为19.25(17.30,23.00)h，鲍曼不动杆菌为19.95(12.78,20.75)h。见表1。

表1 病原菌血培养报阳时间及构成比

2.2病原菌血培养不同报阳时间标本的PCT检测结果 报阳时间<72 h的177株肠杆菌目细菌中，PCT>0.5 ng/mL有148株(83.62%)；报阳时间<72 h的33株铜绿假单胞菌中，PCT>0.5 ng/mL有25株(75.76%)；报阳时间<72 h的11株鲍曼不动杆菌中，PCT>0.5 ng/mL有11株(100.00%)，见表2。

表2 病原菌血培养不同报阳时间标本的PCT检测结果

2.3病原菌耐药性分析 大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌对氨苄西林的耐药率都超过了80.00%，而对哌拉西林/他唑巴坦、厄他培南的耐药率则低于5.00%；铜绿假单胞菌对复方磺胺甲噁唑、氨苄西林/舒巴坦、头孢曲松、头孢唑林、氨苄西林、呋喃妥因、头孢西丁、阿莫西林/克拉维酸、头孢替坦、替加环素的耐药率均是100.00%，但对哌拉西林/他唑巴坦、庆大霉素、阿米卡星、妥布霉素的耐药率则低于15.00%，见表3。金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌对青霉素G和复方磺胺甲噁唑的耐药率均已超过90.00%，未检测出利奈唑烷、万古霉素、替加环素、奎奴普丁/达福普丁耐药株，见表4。

表3 主要革兰阴性菌对常见抗菌药物的耐药率(%)

表4 主要革兰阳性菌对常见抗菌药物的耐药率(%)

3 讨 论

本院采用BacT/ALERT 3D全自动血培养仪及其配套的血培养瓶对标本进行了培养，其检测原理：当培养瓶中有微生物生长时，这些微生物代谢过程中会有CO2产生，所产生的CO2会经过半透膜，与底部的NOVEL/CO2感应器发生反应，从而使感应器出现颜色变化，通过光电系统对其进行分析来判断血培养结果[5]。本研究共分离出病原菌426株，其中以肠杆菌目细菌最多，共190株，占44.60%，主要为大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌，与相关研究报道的结果基本一致[6-7]。血培养报阳时间和血液标本中的含菌量成反比关系，血液标本病原菌量越多，则报阳时间越短，如血液标本病原菌量少或受皮肤表面正常菌群的污染，则报阳时间就相对较长。不同种类的病原菌生长和繁殖过程所需要的时间并不完全相同[8]，当人体发生血流感染时，其血液中的病原菌量会相对增加，血培养报阳时间会相应缩短。本研究中，血培养报阳时间最短的是金黄色葡萄球菌，为15.50(15.00,39.12)h，其次为肠杆菌目细菌的18.26(14.62,24.04)h。

PCT是一种糖蛋白，但是其没有任何激素活性，属于降钙素的前体物质。健康人体内位于甲状腺中的C细胞能够产生微量PCT，但是当人体发生严重细菌感染，尤其是出现菌血症时，血清PCT水平会明显升高[9]。PCT>0.5 ng/mL时，患者发生全身性细菌感染的可能性极高，因此，PCT是用来评估细菌感染的指标之一，且其在鉴别由细菌感染引起的发热或非细菌感染引起的发热中有着十分重要的作用。血培养病原菌报阳时间<72 h的标本有396份，占92.96%，表明血培养3 d内如果未报阳性，患者合并血流感染的可能性较低，因此向临床初步报告血培养3 d无细菌生长有重要的意义。血培养报阳时间<72 h的肠杆菌目细菌共177株，其中PCT>0.5 ng/mL的有148株(83.62%)，说明当检测出肠杆菌目细菌时，其很可能是造成血流感染的病原菌；铜绿假单胞菌共33株，PCT>0.5 ng/mL的有25株(75.76%)，提示当检测出铜绿假单胞菌时，其很有可能是引起血流感染的病原菌；鲍曼不动杆菌11株，均PCT>0.5 ng/mL，提示当检出鲍曼不动杆菌时，其有很大的可能性是导致血流感染的病原菌；凝固酶阴性葡萄球菌47株，PCT>0.5 ng/mL有14株(29.79%)，提示在血培养过程中，凝固酶阴性葡萄球菌是最常见的污染菌，但与此同时其也是引起血流感染的病原菌之一。当进行血培养时，两个培养瓶中若有一瓶检测出凝固酶阴性葡萄球菌，而另一瓶的结果为阴性，且PCT<0.5 ng/mL,可考虑有污染菌污染了培养瓶；如果两瓶中都检出了凝固酶阴性葡萄球菌，并且所检出的凝固酶阴性葡萄球菌的生化特征以及耐药性均相同，表明其属于同一种细菌，同时还需要根据患者的一些临床表现进行辨别，如PCT>0.5 ng/mL,则此时检出的凝固酶阴性葡萄球菌为致病菌的可能性大,需要进行抗感染治疗[10]。当检测出无乳链球菌、脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌及新型隐球菌等细菌时，其为污染菌的概率非常低；而芽孢杆菌、草绿色链球菌等被检出时，其是导致血流感染的病原菌的概率也很低。临床在诊断血流感染时，可依据血培养报阳时间，结合PCT检测结果进行综合判断。

本研究所检出的主要病原菌对一些常见抗菌药物的耐药率差异较大，大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌对氨苄西林的耐药率都超过了80.00%，而对哌拉西林/他唑巴坦、厄他培南的耐药率则低于5.00%；金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌对青霉素G和复方磺胺甲噁唑的耐药率均已超过90.00%，未检测出利奈唑烷、万古霉素、替加环素、奎奴普丁/达福普丁的耐药株。提示临床在经验性用药的同时应该积极完善血培养，并根据药敏试验结果及时调整治疗方案，提高血流感染的治疗效果。