HPLC法测定天麻素片中天麻素的含量及含量均匀度

王磊，刘群，肖云娜，赵凯丽，王佳茜，李建朋，李颖颖，杨蕊

(1.烟台市食品药品检验检测中心，山东 烟台 264000；2.山东第一医科大学第一附属医院，山东 济南 250014)

天麻素(gastrodin)分子式为C13H18O7，又名天麻苷，即4-羟甲基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷，结构式见图1，于1979年首次从天麻中提取分离，因其植物提取法消耗工作量大，成本较高，现在各大药企主要用化学合成法制备天麻素原料。

图1 天麻素结构式

天麻素在国家药品标准收录为中枢神经系统药物[1]，有抗惊厥、抗癫痫[2]、镇静催眠[3]、镇痛抗炎[4]、心血管保护[5]等作用。天麻素片临床用于神经衰弱、头痛、偏头痛等症。根据原国家食品药品监督管理局数据库检索结果，目前国内批准上市的天麻素片剂有25 mg、50 mg、0.1 g(以天麻素计)、0.2 g(以天麻素计)4种规格，主要采用铝塑泡罩包装。不同企业的制备工艺不同，具体工艺参数也存在差异。

目前，我国天麻素片主要执行《国家药品标准》，标准编号为WS1-XG-021-2001，《美国药典》《英国药典》《日本药局方》《欧洲药典》均未收载天麻素与相关制剂标准，后三者仅收载了天麻。天麻素片现行标准[1]采用紫外分光光度法测定天麻素含量，无法区分待测成分与其他杂质在测定波长处的共同响应，方法专属性不强。本文建立了一种高效液相色谱法，方法专属性好，简便准确，仪器精密度高，适用于天麻素片中天麻素的含量测定和含量均匀度检查。

我国现有天麻素片批准文号40个，现行标准[1]中无25 mg规格的含量均匀度项目，无法监测该药品质量的均一性。根据相关规定[7]，本文对收集到的25 mg的天麻素片进行了含量均匀度考察，为天麻素片的质量控制提供依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 XPR205DR电子天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司)；2040C高效液相色谱仪(日本Shimadzu公司)；Mill-Q纯水机(法国默克公司)。

1.2 药品与试剂 3批天麻素片(规格25 mg，批号：20200101、20190506、20200304)均来自云南某生产企业；天麻素对照品(NIFDC，96.7%，批号：110807-201809)；液相色谱级乙腈，其他试剂均为分析纯级。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Thermo BDS C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)色谱柱；乙腈-0.1%H3PO4溶液(3∶97)为流动相；流速：1.0 mL·min-1； 检测波长为220 nm；柱温：25 ℃；进样10 μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 供试品溶液 取天麻素片20片，精密称定，精密称取本品细粉(约0.028 g，相当于含天麻素约5 mg)，置100 mL量瓶中，加水约70 mL，超声使溶解，并稀释至刻度，摇匀，用中速滤纸过滤，将续滤液用0.45 μm有机系微孔滤膜滤过，即得。

2.2.2 对照品溶液 将10.27 mg天麻素对照品置200 mL量瓶中，加入约130 mL水，超声使溶解，并稀释至刻度，摇匀，用中速滤纸过滤，将续滤液用0.45 μm有机系微孔滤膜滤过，即得。

2.2.3 阴性对照溶液 按该企业天麻素片工艺处方，取除天麻素以外的其他辅料，按 “2.2.1”项下方法，从“精密称取本品细粉……”开始，依法制得本溶液。

2.3 专属性试验 取上述3种溶液，照“2.1”项下方法测定，结果见图1。在天麻素峰处未见其他杂质干扰，说明测定方法专属性较好。

图2 HPLC色谱图

2.4 线性关系试验 精密量取对照品溶液1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0 mL，分别置100 mL量瓶中，加水稀释至刻度，制得系列线性溶液，分别按 “2.1”项下方法重复测定2次。以天麻素浓度(X,μg·mL-1)为横坐标、峰面积(Y)为纵坐标，得线性回归方程:Y=36 128.68X-3 208.74，r=1.000 0。结果显示，此方法中天麻素在0.497～24.83 μg·mL-1浓度范围内线性良好。

2.5 精密度试验 取“2.2.2”项下对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件，连续进样 6 次，计算得6针天麻素峰面积的RSD=0.06%，仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验 按“2.1”项下色谱条件，在 0、2、4、6、8、12、24 h时分别对同一供试品溶液进样分析，7针的峰面积RSD=0.8%。表明供试品溶液在24 h内稳定，能够满足测定需要。

2.7 重复性试验 取同一批号天麻素片，照“2.2.1”项下方法制备6份供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件分析，测得该批次天麻素片含天麻素17.8%，RSD=0.05%，该方法重复性良好。

2.8 回收率试验 取9份“2.7”项下所用天麻素片细粉0.014 g，分别置于 100 mL容量瓶中，每3份分别加入天麻素对照品溶液(4.815 mg·mL-1)0.400、0.500、0.600 mL，照“2.2.1”项下方法，自“加入约70 mL水……”开始，制备溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，结果见表1。

表1 回收率试验结果

2.9 方法耐用性 本试验考察了Daiso Capcell PAD C18、Waters Xbridge C18、Thermo BDS Hypersil C18、Sepax GP C184种不同色谱柱对系统适应性的影响，结果显示，采用4种不同厂家、不同填料、不同柱长的C18色谱柱，虽然保留时间、峰面积响应有所不同，但峰形良好、分离度均大于2.0，均能满足待测物的分析要求。表明该方法耐用性良好。

2.10 样品含量测定 取样品(批号：20180904、20190506、20200304)，照 “2.2”项下方法制备溶液，按 “2.1”项下方法测定标示含量，测得结果分别为94.9%、 96.4%、96.3%。

2.11 样品含量均匀度测定 本文中收集到的3批天麻素片均为25 mg规格，为保证该药品质量的均一性，根据相关规定[6]，对3批样品进行了含量均匀度考察。取3个批号的样品各10片，分别置于50 mL量瓶中，照“2.2”项下方法制备溶液，测定结果见表2。结果均符合规定。

表2 样品含量均匀度测定结果

3 讨论

3.1 检测波长的选择 经HPLC-PDA全波长扫描，天麻素的λmax= 220 nm ，选定220 nm 作为检测波长。

3.2 结果与意义 天麻素杂质Ⅰ为天麻素氧化降解的标志性杂质，天麻素片中通常含有天麻素杂质Ⅰ等化合物，在现行标准中所采用的220 nm的测定波长处亦有相当强度的紫外吸收，使得现行测定方法专属性不强，建议改用高效液相色谱法进行分析。

近年已有文献[7-8]显示，高效液相色谱法测定天麻素含量多采用乙腈-水组合，其中添加少量酸，经试验比较，本方法采用的流动相条件下天麻素出峰快，色谱行为好。

本文对采集到的3批样品进行了含量均匀度测定，结果均符合规定，但数值较大，接近15.0的规定限度，提示存在关注本品质量均一性的需要。因此，本文建议增设25 mg规格的天麻素片含量均匀度项目，以对天麻素片产品质量进行更好的控制。