毕节市HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈病变中的临床分流应用

毛艳丰

[摘要]目的分析畢节市人乳头瘤病毒（HPV）E6/E7 mRNA检测在宫颈病变中的临床应用效果，为宫颈病变患者临床分流及诊断提供参考依据。方法选取毕节市中医院2016年1月至2021年6月收治的200例宫颈病变患者作为研究对象，所有患者均接受HPV E6/E7 mRNA检测和薄层液基细胞学检测（TCT），以组织病理检测结果作为金标准，比较不同宫颈病变患者HPV E6/E7 mRNA表达阳性率及相对表达量，并比较HPV E6/E7 mRNA、TCT在宫颈病变中的诊断效能。结果宫颈癌、CIN III级患者HPV E6/E7 mRNA表达阳性率及相对表达量均明显高于CIN II级和CIN I级，CIN II级明显高于CIN I级，宫颈癌HPV E6/E7 mRNA相对表达量明显高于CIN III级（P<0.05）。HPV E6/E7 mRNA检查共检出阳性113例，其中误诊34例，漏诊15例。TCT检查共检出阳性66例，其中误诊20例，漏诊48例。HPV E6/E7 mRNA检查的敏感度明显高于TCT检查，而特异度明显低于TCT检查（P<0.05）。结论HPV E6/E7 mRNA检测对毕节市宫颈病变患者筛查分流、辅助诊断具有重要临床指导价值。

[关键词]人乳头瘤病毒E6/E7 mRNA;液基薄层细胞检测;宫颈病变;宫颈上皮内瘤变;宫颈癌

[中图分类号]R737.33    [文献标识码]A    [文章编号]2095-0616（2022）02-0159-04

The application of HPV E6/E7 mRNA test in clinical triage of cervical lesions in Bijie

MAO Yanfeng

Department of Pathology，Bijie Hospital of Traditional Chinese Medicine in Guizhou Province，Guizhou，Bijie 551700，China

[Abstract]Objective To analyze the clinical application effect of human papillomavirus （HPV）E6/E7 mRNA test in cervical lesions in Bijie，so as to provide a reference basis for clinical triage and diagnosis of patients with cervical lesions. Methods A total of 200 patients with cervical lesions admitted to Bijie Hospital of Traditional Chinese Medicine from January 2016 to June 2021 were selected as study subjects，and all patients underwent HPV E6/E7 mRNA test and thin-prep cytology test （TCT）.Taking the histopathological test results as the gold standard，the HPV E6/E7 mRNA positivity rate and relative expression in patients with different cervical lesions were compared，and the diagnostic efficacy of HPV E6/E7 mRNA and TCT in cervical lesions was compared. Results The positivity rate and relative expression of HPV E6/E7 mRNA expression in patients with cervical cancer and cervical intraepithelial neoplasia （CIN）grade III were significantly higher than those in patients with CIN grade II and CIN grade I，CIN II was significantly higher than that in CIN I. The relative expression of HPV E6/E7 mRNA in patients with cervical cancer was significantly higher than that in patients with CIN grade III（P<0.05）. 113 positive cases were detected by HPV E6/E7 mRNA test，in which 34 cases were misdiagnosed and 15 cases were miss-diagnosed.66 positive cases were detected by TCT test，in which 20 cases were misdiagnosed and 48 cases were miss-diagnosed. The sensitivity of HPV E6/E7 mRNA test was significantly higher than that of TCT test，while the specificity was significantly lower than that of TCT test （P<0.05）. Conclusion HPV E6/E7 mRNA test is of great significance in clinically guiding the screening and triage and auxiliary diagnosis of patients with cervical lesions in Bijie.

[Key words]Human papillomavirus E6/E7 mRNA;Thin-prep cytology test;Cervical lesions;Cervical intraepithelial neoplasia;Cervical cancer

宫颈癌是妇科常见恶性肿瘤，研究指出，宫颈癌发生前存在一个长期癌前病变期，一般由宫颈上皮内瘤变（CIN I级）发展至宫颈癌需要至少10年甚至更长时间[1-2]。因此，对于宫颈癌患者而言，及早发现癌前病变并及时给予规范干预，可降低宫颈癌发生风险。研究证实，人乳头瘤病毒（HPV）感染与宫颈癌的发生密切相关，HPV感染细胞之后，E6、E7等病毒致癌基因将产生E6、E7癌蛋白，E6、E7癌蛋白可与机体的抑癌蛋白等细胞周期调节蛋白相结合，造成细胞周期控制出现异常，进而引起癌变[3-4]。基于此，本研究重点探讨HPV E6/E7与宫颈病变的关系，以此完善毕节市（本市）临床宫颈病变资料，为明确本市宫颈病变诊断临床治疗及预防提供重要科学依据。现报道如下。

1    资料与方法

1.1    一般资料

选取毕节市中医院2016年1月至2021年6月收治的200例宫颈病变患者作为研究对象，纳入标准：①年龄18岁以上;②人组前1周内未进行阴道用药;③临床资料齐全;④既往均无宫颈上皮内瘤变史或宫颈癌史;⑤语言沟通能力、理解能力以及认知功能均正常。排除标准：①处于妊娠期;②人组前已经明确诊断;③正在参与临床其他研究;④存在其他部位恶性肿瘤。200例患者，年龄24～67岁，平均（47.21±4.93）岁;病程1～4个月，平均（2.38±0.29）个月;病情分布：CIN I级106例，CIN II级35例，CIN III级31例，宫颈癌28例。

1.2    方法

1.2.1    薄层液基细胞学检测（TCT）    采集患者宫颈分泌物，通过膜式液基超薄细胞学以及离心沉淀技术，对收集的脱落细胞进行固定及染色，参照国际癌症协会推荐的分类标准[5]，由3位细胞学医师独立进行判读，结果分为鳞癌、高度鳞状上皮病变、低度鳞状上皮内病变、不能排除高级别非典型鳞状细胞上皮内病变、无明确诊断意义非典型鳞状细胞以及未见上皮内病变，其中鳞癌、高度鳞状上皮病变、低度鳞状上皮内病变、不能排除高级别非典型鳞状细胞上皮内病变、不典型鳞状上皮细胞为阳性，余为阴性。

1.2.2    宫颈组织病理学检测    根据阴道镜的检查结果，选取患者宫颈病变的較重部位取活检，参照《病理学》中的标准[6]，由3名主治医师及以上职称的病理医师进行双盲法会诊分级，包括正常及炎症、CIN I级、CIN II级、CIN III级、宫颈癌，其中CIN I级、CIN II级、CIN III级、宫颈癌为阳性，正常及炎症为阴性。

1.2.3    HPV E6/E7 mRNA检测    标本来自TCT后剩余宫颈脱落细胞，通过b-DNA技术检测HPV E6/E7 mRNA的表达水平，试剂盒购自郑州科蒂亚生物技术有限公司（批号：2107A2），严格按照试剂盒说明书进行操作;通过Quanti-Virus Tm冷光仪[河南科蒂亚（新乡）生物技术有限公司]读取数值，通过软件转换为基因拷贝数，HPV E6/E7 mRNA相对发光强度比≥1为阳性。

1.3    观察指标

①观察不同病情患者HPV E6/E7 mRNA表达阳性率及相对表达量;②观察HPV E6/E7 mRNA检查的敏感度、特异度以及准确度;③观察TCT检查的敏感度、特异度以及准确度;④比较HPV E6/E7 mRNA检查和TCT检查的敏感度、特异度以及准确度，按四格表法进行计算，敏感度=真阳性例数/（真阳性例数+假阴性例数）×100%，特异度=真阴性例数/（真阴性例数+ 假阳性例数）×100%，准确度=（真阳性例数+ 真阴性例数）/总例数×100%。

1.4    统计学处理

2    结果

2.1    不同病情患者HPV E6/E7 mRNA表达阳性率及相对表达量观察

宫颈癌、CIN III级患者HPV E6/E7 mRNA表达阳性率及相对表达量均明显高于CIN II级和CIN I级，CIN II级明显高于CIN I级，宫颈癌HPV E6/E7 mRNA相对表达量明显高于CIN III级，差异有统计学意义（P<0.05）;宫颈癌与CIN III级HPV E6/E7 mRNA表达阳性率比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。

2.2    HPV E6/E7 mRNA检查结果与病理结果对照

HPV E6/E7 mRNA检查共检出阳性113例，其中误诊34例，漏诊15例。见表2。

2.3    TCT检查结果与病理结果对照

TCT检查共检出阳性66例，其中误诊20例，漏诊48例。见表3。

2.4    HPV E6/E7 mRNA检查与TCT检查的敏感度、特异度以及准确度比较

HPV E6/E7 mRNA检查的敏感度明显高于TCT检查，而特异度明显低于TCT检查，差异有统计学意义（P<0.05）。HPV E6/E7 mRNA检查与TCT检查的准确度比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表4。

3    讨论

宫颈癌是女性发病率及病死率均较高的一种恶性肿瘤，近年来其发病呈年轻化趋势。宫颈癌发生和发展是渐进演变的过程，包括数个阶段，分别为增生、不典型增生、原位癌、早期浸润以及浸润癌宫颈癌病变早期并无典型症状，部分患者可出现白带增多等一般炎症性表现，因而单独通过临床表现难以确诊[7]。不过由癌前病变发展至宫颈癌，往往需要较长时间，及早发现及早干预可阻断宫颈癌发展进程。

尽管TCT广泛应用于临床妇科宫颈筛查，但由于操作和个人读片等主观因素，很容易导致假阴性或假阳性结果，尤其是在意义不明或更严重的非典型鳞状上皮细胞病例中，极易出现漏误诊[8]。研究指出，虽然TCT对宫颈疾病的诊断具有较高的特异度，但其敏感度较差[9]。因此，还需要敏感度更高的筛查方式，进一步提高恶性病变的筛查效果。CIN是一种由持续的高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）感染引起的癌前宫颈疾病，大量医学实验及理论文献证实，HPV基因E6/E7是导致女性宫颈癌的重要因素，高危亚型HPV感染宫颈上皮细胞，产生E6和E7两种癌蛋白，E6和E7蛋白最初通过其在宿主细胞中靶向p53和视网膜母细胞瘤蛋白（pRb）肿瘤抑制通路的能力而被鉴定，从而干扰细胞周期调节[10-12]o E7通过其结合和灭活细胞pRb的能力刺激细胞周期，而E6通过蛋白酶体途径与p53结合，导致p53降解，造成细胞周期控制失常。因此，HPV感染是宫颈癌发生的重要危险因素。

受地区、经济、社会发展等多种因素的综合影响，宫颈癌的发生率和病死率在不同地区存在着明显的差异。本研究基于本市女性宫颈病变地方特点，重点研究探讨HPV E6/E7与宫颈病变的关系，更好地帮助本市临床诊断治疗宫颈病变。本研究中，不同病情宫颈病变患者HPV E6/E7 mRNA表达阳性率及相对表达量存在显著差异，随着病理分级逐渐增加，患者HPV E6/E7 mRNA表达阳性率及相对表达量均明显升高，这与临床相关研究结果相近[13]，说明宫颈癌前病变与HPV E6/E7 mRNA转录水平有关，即HPV E6/E7 mRNA的转录与病变进展程度密切相关。E6和E7是所有HPV中最重要的癌基因，E6和E7蛋白可以通过降解众所周知的肿瘤抑制因子p53和pRb，延长感染细胞的寿命并诱发癌癥。

本研究中，通过对HPV E6/E7 mRNA检查与TCT检查的敏感度、特异度以及准确度分析发现，HPV E6/E7 mRNA检查的敏感度明显高于TCT检查，但是特异度明显低于TCT检查。这与临床相关研究类似，如许生花等[14]的HPV E6/E7 mRNA检查结果与病理结果相近，且诊断宫颈癌的敏感度为92.3%，明显高于TCT检查的43.6%，但特异度为70.0%，明显低于TCT检查的90.0%。提示TCT检查易出现漏诊，主要原因为TCT为细胞形态学检测模式，当发现细胞形态出现异常改变时，宫颈病变往往进展为中晚期[15-16]。HPV E6/E7 mRNA检查的敏感度较高，可减少漏诊的发生。不过也存在一定误诊的情况，因而可联合其他检查方式，降低漏、误诊率，以有助于患者进一步治疗。

综上所述，HPV E6/E7 mRNA检测对毕节市宫颈病变患者筛查分流、辅助诊断具有重要临床指导价值。

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