仔猪水肿病病原分离鉴定及免疫防治研究

张叶茹

摘要：仔猪水肿病（ED）在全球流行广泛，严重影响着畜牧业的发展和人类的饮食健康。本文通过对仔猪水肿病研究发现， 引起猪断奶后腹泻（PWD）和水肿病（ED）的大肠杆菌菌株仅限于若干血清群，其中滴定检测法和微阵列检测法是较为常见的两种检测方法。这两种方法可以有效对地方养猪场猪粪样品进行检测和验证，还可以对患有水肿病的仔猪进行大肠杆菌筛查。

关键词：仔猪；水肿病；腹泻；检测法

仔猪水肿病是造成断奶仔猪产生巨大损失的一种严重疾病。大肠埃希菌，也被称为大肠杆菌（VTEC），被认为是猪只患水肿病的主要病因。这些菌株克隆了断奶仔猪的肠道，并在肠道中产生对细胞致命的毒素，因此被称为大肠杆菌。大肠杆菌中的毒素也被称为志贺样毒素（SLT），因为它们与痢疾志贺菌产生的志贺毒素关系密切。目前，根据与志贺氏菌毒素的关系命名为志贺氏菌毒素（Stxl，Stx2，Stx2c，Stx2e），产生毒素的大肠杆菌菌株命名为志贺氏菌产毒大肠杆菌（STEC）。在猪身上，水肿病可能发展为异能血症，这是断奶仔猪易患的一种疾病，通常在断奶后一周内发生，是由于在断奶后立即给仔猪喂食含药物的饲料混合物造成感染，老年动物大多不会出现这种情况。在发生水肿病的猪群中，一窝中的一只仔猪受影响会传染所有的仔猪，但是也有个别仔猪根本不受这种病的影响。因此可以使用抗毒血清防治水肿病，血清是用从Stx2e类毒素和脂类调节剂制备的。

志贺毒素检测的滴定试验在VERO细胞上进行。将加热至56℃灭活30分钟的血清连续稀释，并添加抗生素。向所有稀释液中加入等量的含有志贺毒素的大肠杆菌上清液（浓度为10%），细胞毒性剂量会对50%的vero细胞系产生细胞病變效应，将混合物放在室温下静置。第二天，将60微升不同稀释度的混合物加入平板孔中，并加入90微升浓度为3×10/毫升的Vero细胞悬浮液。在37℃条件下孵育后，通过扫描电子显微镜微镜下对结果进行评估。72小时后对样品进行最后一次血清稀释，抑制Vero细胞变性50%，提高中和抗体滴度，得到检测结果。

当微阵列检测法直接应用于猪粪便样本时，可以用于猪场监测或特定地区的流行病学调查，是一种有效的初步筛选方法。第一步是使用微阵列直接用猪粪便样本检测是否存在潜在的致病性O血清群。一旦发现致病血清群，可进行进一步平板接种以分离目标血清群菌落。然后可以通过相同的微阵列检查分离的菌株，以确定毒力基因模式。虽然微阵列可直接用猪粪便样本同时检测致病血清群和毒力基因，但血清群特异性和毒力基因可能来自不同的宿主菌株。PWD和ED疾病通常发生在断奶后14天内的仔猪身上。携带具有相关毒力基因的PWD和ED相关血清群菌株的成年猪本身可能不会表现出任何症状，但却可以成为仔猪的感染源。由于病原体的快速传播，导致大型猪场爆发PWD和ED，因此在开始繁殖或购买仔猪时，使用这种微阵列对PWD和ED相关大肠杆菌菌株进行初步筛选非常重要。这是检测PWD和ED的首个可全面检测大肠杆菌血清型和致病型的DNA微阵列，并有望作为一种新的诊断工具，用于调查散发性感染和暴发以及监测这些菌株在不同地理位置的血清群/病理型分布。

对已经发病仔猪在饲料中加入盐类泻剂连用2天。病初可采用亚硒酸钠和维生素E，对症治疗。可用卡那霉素、硫酸新霉素或硫酸链霉素，每天2次，连续注射2～3天。利用分离的病原菌制备高免血清，给仔猪口服或注射，可用于预防或紧急治疗。治疗要今早，提倡采用综合防治方法。一旦发现仔猪患水肿病，要整窝、全群用药，特别对感染但未表现临床症状的猪只，以争取更多的治疗时间。增加饲料中多种维生素、硒等的含量，以提高抗应激水平。进行药敏试验，有针对性地使用抗菌药物，同时要用地塞米松、高渗葡萄糖等加强抗炎与解毒治疗。静注、腹腔注射效果要好于肌注效果。降低日粮蛋白，有利于控制疾病。