蒙药枸杞子-7防治子宫内膜异位症复发作用的实验研究

白梅荣 陈玉兰 乌日汉 萨出日拉 根玉

摘要：目的 评价蒙药枸杞子-7防治子宫内膜异位症复发的药理作用。方法 以手术法制备子宫内膜异位症复发大鼠模型，以蒙药枸杞子-7灌胃治疗14 d，分别在给药第1、7、14 d测量异位包块大小，末次给药后麻醉处死大鼠，测定血清E2和P含量，观察子宫组织病理组织学变化。结果 与空白组相比，模型组血清E2和P含量升高（P<0.05）;与模型组相比，蒙药枸杞子-7组血清E2和P含量下降（P<0.05），病理学变化好转。结论 蒙药枸杞子-7在14 d内可有效防治子宫内膜异位症复发。该研究为枸杞子进一步开发研究提供了坚实的工作基础。

关键词：蒙药;枸杞子-7;防治;子宫内膜异位症复发;实验研究

中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：1007-2349（2022）04-0049-06

Experimental Study on the Effect of Lycium Barbarum-7 in the Prevention and Treatment of the Recurrence of Endometriosis

BAI Mei-rong1， CHEN Yu-lan1， WU Ri-han1， Sachu Rila2， GEN Yu2

（1. Key Laboratory of Mongolian Medicine Research and Development Engineering of Ministryof Education， Inner Mongolia University for Nationalities， Tongliao 028000， China;2. The Affiliated Hospital of Inner Mongolia University for Nationalities， Tongliao 028000， China）

【Abstract】Objective： To evaluate the pharmacological effects of Lycium barbarum-7 in the prevention and treatment of the recurrence of endometriosis. Methods： A rat model of recurrent endometriosis was prepared by surgery， and the rats were intragastrically treated with Lycium barbarum-7 for 14 days. The size of the ectopic mass was measured on the 1st， 7th， and 14th day of administration， and the rats were sacrificed after anesthesia when the last administration was performed. Their serum E2 and P levels were determined and their histopathological changes in uterine tissue were observed. Results： Compared with the blank group， the serum E2 and P contents of the model group increased （P<0.05）; compared with the model group， the serum E2 and P contents of the Lycium barbarum-7 group decreased （P<0.05）， and the pathological changes improved. Conclusion： Lycium barbarum-7 can effectively prevent and treat the recurrence of endometriosis within 14 days. The study provides a solid working foundation for further development of wolfberry fruit.

【Key words】Mongolian Medicine; Lycium Barbarum-7; Prevention And Treatment; Recurrence Of Endometriosis; Experimental Study

子宮内膜异位症（简称内异症）是指具有生长能力的子宫内膜组织出现在子宫腔被覆黏膜以外的身体其他部位异常生长，虽然是一种良性激素依赖性疾病，但其表现的浸润、转移、复发和种植生长都是一种恶性生物心行为表现，成为难治之症，被称为“良性癌症”。它主要引起不孕、痛经、慢性盆腔疼痛、盆腔包块等，困扰着许多女性的身心健康，临床上越来越予以重视，发病率有逐渐升高的趋势，但在治疗方面还没有突破性进展，目前治疗以药物及手术治疗为主，但术后复发率高[1-2]。

蒙药枸杞子-7是临床常用于妇血症的蒙成药之一。出自《观者之喜》，由枸杞子、沙棘、硼砂、朴硝等具有清血、化瘀、破痞功效的七味药组成。本方性温，具有清血、化瘀、解凝等功效，对血痞、血症及闭经等病均有良效。在蒙药古籍《认药白晶鉴》、《蒙药正典》、《识药学》、《方海》中均有枸杞子-7治疗血痞、痛经治疗显效的记载;同时，大量临床资料显示，枸杞子-7对巧克力囊肿、继发性痛经疗效最佳而复发率低等优点而深受广大医患的欢迎。课题组前期以动物实验研究佐证了枸杞子-7可降低子宫内膜异位症大鼠异位包块、并显著降低血清IL-8、E2、P含量及血液粘度[3-7]。但未涉及枸杞子-7防治子宫内膜异位症复发（简称内异症复发）的相关研究。该研究以异位复发模型大鼠为研究对象，以枸杞子-7为示例药物，以异位包块、E2、P含量及病理组织学变化为重点观察指标，评价枸杞子-7防治异位复发的药理作用，为该药的进一步深入研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1 实验仪器 cobas c311全自动生化分析仪（Roche）。

1.2 实验动物 Wistar雄性大鼠，50只，体重（200±10）g，实验动物按每笼5只分笼喂养。所有大鼠在SPF级别条件下饲养。根据《实验动物管理条例》实施对实验动物的操作。

1.3 实验药物 枸杞子-7，由内蒙古民族大学附属医院提供。雌二醇检测试剂盒（E2）、孕酮检测试剂盒（P）均购自由北京北方生物技术研究所。戊酸雌二醇片（国药准字J20170009，拜耳医药保健有限公司广州分公司）;硫酸庆大霉素注射液（国药准字 H41020318，国药集体容生制药有限公司）。

1.4 实验方法

1.4.1 复制大鼠内异症复发模型 大鼠复发模型的制备分两步进行。第一步：以手术法制备内异症模型;第二步：在内异症模型的基础上进一步制备复发模型。

第一步：取SD雌性大鼠50只，按体重分为空白对照组和模型组，空白对照组10只，模型组40只。手术前连续一周灌胃0.1 mg/kg·d戊酸雌二醇片，统一使大鼠处于动情期。在动情期模型组大鼠以1%戊巴比妥钠0.6 mL腹腔麻醉，常规消毒，腹部脱毛，开腹剪切左侧子宫长约2～3 cm，置于盛有生理盐水的培養皿中，左侧子宫两端一细丝线结扎。将切下的子宫沿长轴剖开，分离子宫内膜及肌层（内膜较薄者不易剥离或剥离后组织较少，则可将子宫内膜片段连同肌层一道移植，其成活不受影响），将剥离的内膜组织切成3 mm×3 mm大小的内膜块，共2块，使内膜表面朝向腹腔，分别将2块组织缝在左右两侧壁层腹膜上，然后缝合腹部切口，手术后将动物分笼单放，让其自然苏醒。正常对照组的大鼠切除长2 cm的一段子宫体，弃之不用，断端结扎后关腹。术后每只大鼠腹腔注射庆大霉素0.1 mL，共7 d。术后模型组大鼠隔两天灌服乙烯雌酚片0.1 mg/kg，促进其子宫内膜生长。造模4周根据经触及包块大小、血清雌二醇（E2）和孕酮（P）和病理组织学观察证实异位内膜已成活。32只大鼠复制内异症模型成功，成功率80%。腹部异位内膜包块大小变化见表1，异位内膜的组织学检查结果见图1，图2。

第二步：取内异症模型大鼠40只，在实验的第一天灌胃0.1 mg/kg戊酸雌二醇片，保证其大鼠动情期，第二天常规消毒异位小包块处并脱毛，剪切包块处腹部皮肤，暴露其异位包块，以针头刺破其异位包块，包块中液体被流到腹腔内，不做其他处理。每只大鼠腹腔注射庆大霉素0.1 mL，共7 d。术后模型组大鼠隔两天灌服戊酸雌二醇片0.1 mg/kg，共3次，促进其子宫内膜生长。造模第2周根据经触及包块大小和病理组织学观察证实异位内膜已成活，异位复发成功率100%。包块大小变化见表3，异位内膜组织学检查结果见图4。

1.4.2 枸杞子-7防治异位复发作用实验研究 取异位复发模型大鼠32只和健康大鼠8只，分为正常对照组、异位复发组、异位复发加枸杞子-7大、中、小三个剂量组等5组，每组8只。除了正常对照组和异位复发模型组外，各给药组灌胃不同剂量药物溶液（2 mL/100 g），每天1次，连续给药14 d，记录包块大小变化。末次给药后，麻醉处死各组大鼠，取血，以3500 r/min离心分离血清15 min，待测E2、P水平，取部分子宫组织以10%甲醛溶液固定，观察病理组织学变化。

2 实验结果

2.1 复制大鼠内异症复发模型实验结果

2.1.1 异位包块肉眼观察 建模后4周移植物外观看：40只大鼠在移植的腹部皮下可见移植物结节，剔除大鼠腹部被毛可见突出结节，结节突起呈大小不等的球形，打开皮肤可见突起内部充满液体，呈淡黄色或暗黄色囊状结构，质地较软，表面有血管走形，个别移植物外观呈现浑浊黄白色结节，后病理证实为脓肿。建模成功与否以病理检查证实移植物中均有子宫内膜上皮细胞、腺体和间质生长为最终标准。病理组织切片证实本实验成功建模32只，本实验异症建模成功率为80%。

2.1.2 观察内异症模型组大鼠包块 实验结果表明，32只模型组大鼠子宫内膜异位成功，在异位处形成肉眼可见的包块、出现液体积聚，并有血管形成。模型大鼠子宫组织异位包块大小较均匀，具有较好的离散度。可见，该模型制备方法较成熟和稳定。结果见表1。

2.1.3 内异症模型大鼠血清雌二醇和孕酮含量变化 与正常对照组相比较，模型组血清雌二醇和孕酮含量明显高于正常对照组（P<0.05）。结果见表2

2.1.4 异位子宫组织病理学检查结果 正常对照组子宫组织病理学检查结果：在位子宫内膜上皮为高柱状或柱状;腺体数量多，腺上皮细胞多为柱状，个别为立方状，可见核下空泡和顶浆分泌。结果见图1。

内异症模型大鼠病理组织学检查结果：可见移植的内膜存活，表面上皮增生呈柱状，腺体稀疏，腺腔形态欠规则，并有分泌活动。可见腺上皮及间质细胞，腺上皮呈柱状、立方状或扁平状，部分可见核下空泡，间质较密，间质细胞小而稀疏。结果见图2。

2.2 复制内异症复发模型实验结果

2.2.1 内异症复发移植物肉眼观察 建复发模型后2周移植物外观看：两种制备方法未见明显差异。2组大鼠几乎所有大鼠腹部皮下也可见移植物结节，外形和质地同内异症异位包块。证明复发模型已成功，造模成功率达100%。

2.2.2 内异症复发模型组大鼠包块 实验结果表明，32只模型组大鼠子宫内膜异位复发成功，在异位处形成肉眼可见的包块、出现液体积聚，并有血管形成。虽然与内异症模型相比，包块已变小，但在建模后21 d内模型较稳定。该数据为实验研究的顺利实施提供了坚实的模型基础。结果见表3。

2.2.3 内异症复发模型大鼠血清雌二醇和孕酮含量变化 与正常对照组相比较，复发模型1组和复发模型2组血清雌二醇和孕酮含量明显高于正常对照组（P<0.05）。结果见表4。

2.2.4 内异症复发模型病理组织学变化 正常对照组子宫组织病理学检查结果：在位子宫内膜上皮为高柱状或柱状;腺体数量多，腺上皮细胞多为柱状，个别为立方状，可见核下空泡和顶浆分泌。结果见图3。

内异症复发模型大鼠病理组织学检查结果：被处理过的子宫内膜存活，可见腺上皮及间质细胞。子宫内膜上皮细胞，内膜上皮绒毛整齐，分泌颗粒丰富，线粒体、内质网形态正常。结果见图4。

2.3 枸杞子-7防治内异症复发作用

2.3.1 治疗前后移植物肉眼观察 于枸杞子-7干预EM复发模型后14 d内移植物外观看：模型组几乎所有大鼠腹部或皮下可见移植物结节，剔除大鼠腹部被毛可见突出结节，结节突起呈大小不等的球形，打开皮肤可见突起内部充满液体，呈淡黄色或暗黄色囊状结构，质地较软，表面有血管走形，个别移植物外观呈现浑浊黄白色结节，后病理证实为脓肿。枸杞子-7大剂量组8只大鼠中2只大鼠异位包块体积变小，6只已测量不到基本消失;枸杞子-7中剂量组3大鼠异位包块体积变小，4只已测量不到基本消失，1只无变化;枸杞子-7小剂量组3只大鼠包块变小，5只基本无明显变化。

2.3.2 各组大鼠异位包块大小变化 与模型组相比较，枸杞子大剂量和中剂量组包块在给药第7 d有缩小趋势，但到给药14 d时明显变小，差异具有统计学意义（P<0.05）;枸杞子小剂量组虽然有缩小趋势，但差异无统计学意义（P>0.05）。结果见表5。

2.3.3 枸杞子-7对内异症复发模型组大鼠雌激素含量的影响 与正常对照组相比，复发模型组白介素-8、雌二醇和孕酮含量明显高于正常对照组（P<0.05）。

与模型组相比，枸杞子-7大组白介素-8、雌二醇和孕酮含量均显著降低（P<0.05）;枸杞子-7中和小组无明显差异（P>0.05）。结果见表6。

2.3.4 各组病理组织学观察结果 正常对照组子宫组织病理学检查结果：子宮内膜上皮为高柱状或柱状;腺体数量多，腺上皮细胞多为柱状，个别为立方状，可见核下空泡和顶浆分泌。结果见图5。

内异症复发模型大鼠病理组织学检查结果：可见腺上皮及间质细胞。子宫内膜上皮细胞，内膜上皮绒毛整齐，分泌颗粒丰富，线粒体、内质网形态正常。结果见图6。

枸杞子-7大剂量组大鼠病理组织学检查结果：可见少量子宫内膜上皮细胞，内膜上皮绒毛整齐，少量分泌颗粒。结果见图7。

枸杞子-7中剂量组大鼠病理组织学检查结果：可见子宫内膜上皮细胞，内膜上皮绒毛较整齐，分泌颗粒减少。结果见图8。

枸杞子-7小剂量组大鼠病理组织学检查结果：可见大量腺上皮及间质细胞。子宫内膜上皮细胞，内膜上皮绒毛整齐，分泌颗粒丰富，线粒体、内质网形态正常。结果见图9。

4 讨论

随着人们对内异症的认识不断增加，中西药及蒙药治疗内异症方法较多并治疗效果也不同，但几乎所有治疗方法均以抑制卵巢功能为主，目前暂未出现彻底治愈此病或防治复发的治疗方案[8]。因此筛选彻底治愈内异症和复发的有效药物及治疗方案是广大医患关注焦点，也是广大学术界的热议话题。课题组近10年研究中发现，蒙药枸杞子-7有效防治内症位而且复发率较低。通过本研究结果显示，蒙药枸杞子-7可显著降低复发模型异位包块大小，降低血清E2和P含量，并减少子宫内膜上皮细胞和颗粒分泌。可见，蒙药枸杞子-7在防治内异症复发方面具有研究和开发价值。该研究为蒙药枸杞子-7进一步深入探讨奠定了夯实的工作基础。

参考文献：

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疗效研究[J].中国医院用药评价与分析，2021，21（6）：687-689+693.

[2]谭苗苗.子宫内膜异位症术后复发影响因素的回顾性分析[D].乌鲁木齐：新疆医科大学，2021.

[3]白梅荣，伊丽娜，韩晓静，等.蒙药枸杞子-7与P4503A和GSH-Px活性相关性研究[J].中国民族医药杂志，2017，23（10）：56-57.

[4]乌日汉，伊丽娜，晶晶，等.内异症状态下枸杞子-7与大鼠Ⅱ相代谢酶活性研究[J].北方药学，2016，13（12）：122-123.

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[6]韩水荣，白梅荣，萨出日拉，等.蒙药枸杞子-7对子宫内膜异位症大鼠血液流变学的影响[J].内蒙古民族大学学报（自然科学版），2011，26（5）：561-563.

[7]白梅荣，乌日罕，萨楚拉，等.手术方法建立大鼠子宫内膜异位症复发模型的实验研究[J].内蒙古民族大学学报，2015，25（1）：38-43.

[8]戴毅，郎景和，朱兰，等.子宫内膜异位症诊治的现在和未来[J].中国科学生命科学，2021，9（2）：1-7.

（收稿日期：2021-09-16）