耳针治疗对慢性心力衰竭大鼠血清BNP、ET-1和IL-6的影响
2022-04-26吴咚咚谭曾德周亚滨李岩
吴咚咚,谭曾德,周亚滨,李岩
(黑龙江中医药大学,黑龙江 哈尔滨 150040)
心力衰竭是指由多种原因致心肌收缩力减弱,不能将心室内的血液充分排出,从而出现动脉系统供血不足和静脉系统淤血,由于各脏器因静脉淤血所引起的临床症状最为明显,故称充血性心力衰竭[1]。中医学将慢性心力衰竭归为“惊悸”“怔忡”“喘证”“痰饮”“水肿”范畴。病机为心、肺、肾阳气虚衰,血行无力,水湿不化,痰湿泛溢,外邪内侵。病位在心,涉及肺、脾、肾等脏器[2]。耳针取“心”“定喘”“肺”“肾”“神门”“交感”“内分泌”,可用针刺、按压及埋针等方法治疗慢性心力衰竭,临床疗效较好,但其作用机制未明确[3],故本实验将研究耳针治疗对慢性心力衰竭(CHF)模型大鼠血清BNP、ET-1 和IL-6 的影响,初步阐明耳针治疗慢性心力衰竭的作用机制。
1 材料与方法
1.1 实验动物
清洁级健康雄性SD大鼠40只,体质量(200±20)g,8 周龄,由青龙山动物繁殖中心提供,饲养于黑龙江中医药大学附属第一医院动物实验中心。环境温度(23±1.5)℃,相对湿度(50±3.5)%,全部大鼠分笼饲养,自由饮食。本研究符合实验动物伦理学标准。
1.2 仪器与试剂
水合氯醛(天津市大茂化学试剂厂,规格:500 g/瓶,批号:20190507);注射用盐酸阿霉素(上海阿拉丁生化科技股份有限公司,规格:100 mg/瓶,批号:D107159);BNP、ET-1和IL-6试剂盒(上海信裕生物科技有限公司)。
彩色多普勒超声显像仪(美国西门子);中研太和牌一次性使用无菌耳穴揿针(北京中研太和医疗器械有限公司,规格:100 支/盒);彩色超声诊断系统(Philips Ultrasound 公司,型号:iE33);多功能酶标仪(美国伯腾仪器有限公司)。
1.3 动物分组与模型建立
选取40只健康雄性SD大鼠,依据随机数字表随机分为对照组、模型组、假耳针治疗组和耳针治疗组,各10只。大鼠均适应性喂养1周后,除对照组外,其余3组采用腹腔注射阿霉素的方法制备CHF模型(每次称取注射用盐酸阿霉素14 mg 溶于7 mL 生理盐水中,稀释成2.0 mg/mL 的溶液,每次给药剂量为1.25 mg/kg,即0.625 mL/kg,每周2次,连续6周)。对照组10只,腹腔注射溶剂。
1.4 实验方法
对照组和模型组不予任何治疗;耳针治疗组和假耳针治疗组分别予以耳针和假耳针治疗2个月。
1.4.1 耳针治疗组
耳穴选穴:取大鼠耳穴“心”“肺”“肾”“神门”,穴位定位参照文献[4]。
操作方法:耳穴周围皮肤用75%乙醇棉球消毒,运用血管钳夹住一次性无菌揿针[规格为0.2 mm ×1.5 mm,SEIRIN 株式会社,进口注册号:国食药监械(进)字2012 第2272550 号(更)],并固定大鼠耳廓,绷紧施术部位皮肤,将揿针固定留置于所选大鼠耳穴上12 h,每日1 次,两耳交替治疗,30 d 为1 个疗程,共治疗2个疗程,两个疗程之间休息1 d。由具有10年以上针灸治疗临床经验的针灸师进行操作。
1.4.2 假耳针治疗组
耳穴选穴:取大鼠耳穴“心”“肺”“肾”“神门”,穴位定位参照文献[4]。
操作方法:将一次性无菌揿针剪去针头使用,耳针的规格和具体操作同耳针组。
1.5 超声心动图检测心功能
采用彩色多普勒超声显像仪进行超声心动图检测,探头频率为12 MHz,取心律稳定时的连续10 个心动周期测量获得实验大鼠的LVIDd、LVIDs、LVFS 和LVEF等指标。
1.6 组织病理学检查
实验结束后处死大鼠,取大鼠心尖放入4%多聚甲醛溶液中固定24 h,按说明书步骤将组织进行脱水、透明、浸蜡包埋、切片,并进行HE染色。
1.7 血液标本的采集及BNP、ET-1和IL-6检测
实验结束后处死大鼠,打开腹腔后进行腹腔静脉采血,分别采集2、1.5 mL,4 500 rpm 离心10 min,取上清液,ELISA 试剂盒检测血浆中BNP、ET-1 和IL-6含量,严格按照说明书进行操作。
1.8 统计学方法
采用SPSS26.0 软件进行数据处理及分析。计量资料采用均数±标准差表示,若数据符合正态分布且方差齐性,组间比较采用单因素方差分析,并采用LDS进行两两比较,组内比较采用配对t检验;若数据不符合正态分布采用秩和检验。计数资料采用频数描述,采用卡方/Fisher's 精确检验,等级资料采用秩和检验。统计检验均采用双侧检验,检验水准α = 0.05,P<0.05代表具有统计学意义。
2 结果
2.1 各组大鼠心肌组织HE染色结果
对照组大鼠心肌组织纹理清晰,心肌走形规整,排列平行,心肌细胞明显,细胞核清晰,胞体无水肿。模型组心肌细胞可有水肿、空泡现象,炎细胞浸润明显,心肌纤维断裂明显。而假耳针和耳针治疗组心肌断裂细胞水肿均较模型组减轻。见图1。
2.2 各组大鼠治疗后超声心动图指标比较
与对照组比较,耳针治疗组、假耳针治疗组和模型组大鼠LVIDd 和LVIDs 显著提高(P<0.05),LVFS 和LVEF 显著降低(P<0.05);与模型组相比,耳针治疗组和假耳针治疗组的LVIDd、LVIDs、LVFS 和LVEF 水平相似,无统计学意义(P>0.05)。见表1。
表1 各组大鼠超声心动图指标比较(±s)
表1 各组大鼠超声心动图指标比较(±s)
注:与对照组比较,*P <0.05。
组别对照组模型组假耳针治疗组耳针治疗组n 10 10 10 10 LVIDd(mm)5.94±0.48 6.63±0.45*6.62±0.47*6.61±0.45*LVIDs(mm)3.41±0.52 4.18±0.62*4.15±0.56*4.09±0.58*LVFS(%)46.07±5.32 35.18±8.46*37.35±7.08*38.62±6.52*LVEF(%)82.56±4.69 57.28±4.76*60.21±3.47*62.86±4.25*
2.3 各组大鼠BNP、ET-1和IL-6含量比较
与对照组比较,模型组、假耳针治疗组和耳针治疗组血清BNP、ET-1 和IL-6 含量升高(P<0.05);与模型组比较,假耳针治疗组和耳针治疗组血清BNP、ET-1 和IL-6 含量降低(P<0.05);与假耳针治疗组比较,耳针治疗组血清BNP、ET-1 和IL-6 含量降低更明显(P<0.05)。见表2。
表2 各组大鼠BNP、ET-1和IL-6含量比较(±s,n=10)
表2 各组大鼠BNP、ET-1和IL-6含量比较(±s,n=10)
注:与对照组比较,*P <0.05,**P <0.01;与模型组比较,△P <0.05;与假耳针治疗组比较,#P <0.05。
组别对照组模型组假耳针治疗组耳针治疗组BNP(ng/mL)33.81±7.85 74.25±6.94**60.19±6.36*△43.92±8.13*△#ET-1(pg/mL)35.92±8.78 94.26±10.97**57.83±11.32*△46.28±9.75*△#IL-6(pg/mL)21.96±5.63 56.72±6.38**47.15±6.24*△34.08±5.95**△#
3 讨论
心力衰竭是心脏肌肉受损或负荷过度,以至于无法输送足够的血液供给身体的需要,是大多数心脏疾病的最终阶段[5-6]。慢性心力衰竭也称慢性充血性心力衰竭,多由心瓣膜病以及高血压、冠心病等引起。左心衰竭最常见,临床表现有不同程度的呼吸困难、咳嗽、咳痰、咯血、肺部湿性啰音,乏力、疲倦、头昏、心慌,尿少和肾功能损害等。右心衰竭临床表现有消化道症状如腹胀、食欲不振、恶心、呕吐,呼吸困难,水肿,颈静脉充盈、怒张,肝肿大等。且心力衰竭患者多有心脏扩大[7]。中医学认为[8-10],由心阳亏虚引起者,表现为胸闷气短、心悸、口唇紫绀、面色苍白、汗出肢冷、倦怠乏力、舌淡胖、脉沉细或结代,治宜温补心阳;由心阴亏虚引起者,表现为胸闷、心悸不宁、五心烦热、少寐多梦、头晕目眩、口干、面颊烘热、舌红少津、脉细数或结代,治宜滋阴养心;由心血瘀阻引起者,表现为心悸怔忡、胸闷心痛、面唇紫暗、舌紫暗或有瘀斑、脉细涩或结代,治宜活血化瘀;因水气凌心引起者,表现为心悸怔忡、胸闷脘痞、咳吐痰涎、恶心呕吐、面浮足肿、不能平卧、尿少、苔白腻或白滑、脉弦滑、治宜温阳利水。
《灵枢·口问》曰:“耳者,宗脉之所聚也”“五脏六腑,十二经脉有络于耳者”,故耳与五脏六腑均有关系。本研究选取治疗慢性心力衰竭的常用耳穴“心”“肺”“肾”“神门”,以达到平衡心之阴阳,调和心之气血之功。
临床通常通过血常规检查、尿素氮、肌酸酐、电解质、血清蛋白、血糖、肝功能、尿液检查及脑钠肽(BNP)来协助诊断心力衰竭[11]。使用超声心动图检测心功能,可实时地观察心脏的构造及收缩功能,清楚地辨别是否有心室扩大、心肌肥厚、心肌收缩异常或心包膜疾病,也可计算出左心室射出分率(LVEF)来评估心脏的收缩功能[12-13]。当各种导致心室内压力升高时,该压力便牵张心肌细胞使其分泌BNP。理论上,BNP 的测定可判断患者有无心室内压力的升高[14]。内皮素-1(ET-1)可促进心肌细胞和成纤维细胞的病理性增殖,使胶原纤维分泌增加,并在心肌间质和血管周围沉积,使血管壁增厚、管腔狭窄,心肌细胞可被伸入的胶原分隔,细胞间连接的网络增粗变密,引起室壁顺应性下降,舒张、收缩功能均受损[15]。慢性心力衰竭患者心肌细胞存在严重的炎症反应,而在心衰的众多炎症递质中,IL-6 是最重要的物质之一,参与CHF 的病理、生理进程。
本研究对实验大鼠进行不同方法处理与治疗,与模型组比较,假耳针治疗组和耳针治疗组血清BNP、ET-1 和IL-6 含量降低(P<0.05);与假耳针治疗组比较,耳针治疗组血清BNP、ET-1 和IL-6 含量降低更明显(P<0.05)。结果表明,耳针治疗能够抑制BNP、ET-1 受体表达和炎症因子IL-6 等多途径抑制心肌纤维化,保护心功能。但本研究也存在一定的局限性,由于纳入本实验的相关数据偏少,未能很好地控制影响因素,希望今后多进行相关的研究予以弥补。