外周血T淋巴细胞水平与结直肠癌腹腔镜根治术后复发的相关性分析▲

陈志冰 陈英云 王祥谷

(1 江西省九江市第一人民医院，江西省九江市 332000；2 江西省九江市卫生学校，江西省九江市 332000)

结直肠癌是一种恶性肿瘤，全世界每年因结直肠癌死亡的人数约50万，且该病的5年生存率不到50%，由此可见结直肠癌对人类有巨大的威胁性[1-2]。手术是治疗结直肠癌比较有效的方法，腹腔镜技术是新型的手术治疗方式，具有对机体免疫功能影响小等优点[3-4]。目前腹腔镜技术已被广泛应用于结直肠癌的治疗。有文献表明，结直肠癌术后肿瘤的增殖、迁移与T淋巴细胞有一定相关性[5]，但国内外相关的报道较少。因此本研究主要探讨外周血T淋巴细胞水平与结直肠癌腹腔镜根治术后复发的相关性。现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取本院2016年5月至2018年5月行腹腔镜根治术治疗的结直肠癌患者60例，其中男35例、女25例，患者年龄25～54岁。纳入标准：(1)首次发病，且无其他病史；(2)无其他外伤；(3)无严重的认知障碍；(4)无其他严重的并发症；(5)术后可以参加随访；(6)了解本次研究并签署同意书。排除标准：(1)有心肝肾功能障碍者；(2)有传染性疾病者；(3)临时退出研究者；(4)有精神障碍者。本研究经我院医学伦理委员会批准，患者及家属均知情同意。

1.2 方法

1.2.1 资料收集 收集患者一般资料，包括性别、年龄、BMI及肿瘤最大直径等。

1.2.2 样本采集 采集患者术前及术后清晨空腹外周静脉血样品5 mL。再把样品离心20 min，取其上清液保存在-80 ℃冰箱或者液氮中。用ELISA试剂盒检测血清中T淋巴细胞(CD3+、CD4+、CD8+)水平，将采集好的血清用碳酸盐缓冲溶液稀释，加入酶标板中，12 h后再进行封闭，然后用洗涤液洗涤5次，加入酶标二抗后于恒温箱温育，再次洗涤后进行显色，采用酶标仪测定吸光度值。上述步骤均严格按照试剂盒说明书进行操作。试剂盒购自美国Sigma公司(批号：W01563)。

1.2.3 手术方法 脐下缘20 mm处做10 mm切口为观察孔，建立CO2气腹,压力维持在12～15 mmHg，置入腹腔镜，于腹部左、右两侧采用4孔法建立操作孔，穿刺12 mm、5 mm trocar。依据《中国结直肠癌诊疗规范(2017年版)》制订切除方案，直肠癌遵循全直肠系膜切除原则分离肠系膜并切除，结肠癌遵循全结肠系膜切除原则分离肠系膜并切除，确认切除干净后常规进行止血、留置引流管、缝合、预防感染等处理。

1.2.4 随访及分组 所有患者均采用门诊复诊及电话随访的方法，随访时间至少3年。复发判定标准：(1)腹部CT检查。清楚看见局部有肿瘤病灶的复发，以及在结肠癌常见的转移器官中发现病灶。(2)肿瘤标志物：结肠肿瘤的标志物是癌胚抗原，癌胚抗原是一个相对有特异性的指标，在肿瘤复发的时候，癌胚抗原水平会逐渐升高，因此监测肿瘤标志物的水平和趋势，有助于发现任何早期复发的迹象。(3)肠镜。可以直观观察肠腔有复发的病变。将术后随访3年结直肠癌复发的患者纳入复发组，未复发的患者纳入未复发组。

1.3 统计学方法 采用 SPSS 22.0统计学软件分析数据，选取Spearman相关性分析方法分析T淋巴细胞水平与结直肠癌腹腔镜根治术后复发的相关性，采用受试者工作特征(receiver operating characteristic, ROC)曲线评估T淋巴细胞水平对结直肠癌腹腔镜根治术后复发的预测价值。计量资料采用均数±标准差(x±s)表示，组间比较行两独立样本t检验，组内比较采用配对t检验；计数资料采用例数(n)表示，组间比较行χ2检验。以P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 一般资料比较 将术后随访3年结直肠癌复发的患者15例纳入复发组；另将结直肠癌未复发的患者45例纳入未复发组。两组患者的性别、年龄、BMI及肿瘤最大直径比较，差异无统计学意义(均P>0.05)。见表1。

表1 两组患者的一般资料比较

2.2 血清 CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+水平比较 术前，两组患者血清CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+水平比较差异无统计学意义(均P>0.05)；术后，两组患者CD3+、CD4+水平及未复发组CD4+/CD8+水平较术前升高，且未复发组CD3+、CD4+和CD4+/CD8+水平高于复发组(均P<0.05)；术后，未复发组患者CD8+水平较术前降低，且明显低于复发组(均P<0.05)。见表2。

表2 两组患者血清CD3+、CD4+和CD4+/CD8水平比较 (x±s)

组别nCD8+(%)术前术后CD4+/CD8+术前术后复发组1530.15±2.5828.69±2.151.12±0.521.34±0.47未复发组4530.68±2.6424.58±3.14*1.14±0.491.69±0.38*t值0.6744.6990.1232.918P值0.503<0.0010.9020.005

2.3 T淋巴细胞水平与结直肠癌腹腔镜根治术后复发的相关性分析 Spearman相关性分析结果显示，血清CD3+、CD4+和CD4+/CD8+水平与结直肠癌腹腔镜根治术后复发呈负相关，相关系数R依次为-0.359、-0.526、-0.358(P<0.001，P<0.001,P<0.005)；血清CD8+水平与复发呈正相关，相关系数R为0.525(P<0.001)。

2.4 T淋巴细胞水平对结直肠癌腹腔镜根治术后复发的预测价值分析 ROC曲线分析结果显示，CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+水平预测结直肠癌腹腔镜根治术后复发的曲线下面积(area under curve，AUC)分别为0.738、0.633、0.864、0.787(均P<0.05)，最佳截断值分别为67.33%、34.63%、25.41%、1.48，灵敏度分别为86.70%、46.70%、100.00%、86.70%，特异度分别为62.20%、95.60%、64.40%、73.30%。见表3、图1。

表3 T淋巴细胞水平对结直肠癌腹腔镜根治术后复发的预测价值分析

图1 T淋巴细胞水平预测结直肠癌腹腔镜根治术后复发的ROC曲线

3 讨 论

腹腔镜手术治疗结直肠癌比传统手术有操作简单、预后优良等优势，目前临床上多采用腹腔镜手术治疗结直肠癌[6-8]。但结直肠癌患者术后复发率为30%～50%，术后复发甚至可导致患者死亡[9-10]。临床已将细胞免疫应用于癌细胞发生发展、预后评估等方面[11]。有研究提示，结直肠癌患者术后会出现不同程度的免疫功能异常[12]。

T淋巴细胞介导细胞免疫，所以极大地影响机体的免疫情况[12-13]。CD3+水平升高体现了机体免疫状况良好，反之则说明其免疫状况差；CD4+可以增强机体的免疫耐受性[14]。本研究结果显示,复发组与未复发组结直肠癌患者术后CD3+、CD4+水平均高于术前，且未复发组的CD3+、CD4+水平高于复发组(均P<0.05)。这说明腹腔镜根治术使患者CD3+和CD4+的水平升高，患者的抵抗力较高。上述情况的原因可能为：随着疾病的不断发展，患者的免疫功能受到抑制，复发组识别和杀伤肿瘤细胞的能力低于未复发组，从而导致病情恶化。CD8+淋巴细胞的主要作用是抑制机体免疫功能，其水平过高会导致机体免疫功能降低。本研究还发现未复发组结直肠癌患者术后CD8+水平低于术前，且明显低于复发组(均P<0.05)。提示腹腔镜根治术可以降低患者CD8+的水平，增加患者机体的免疫应答。有研究指出，CD4+/CD8+不宜过高或过低，过高会出现自身免疫病，反之则容易被其他病毒感染[15-16]。而在本研究中，复发组患者手术前后CD4+/CD8+皆小于1.4，提示CD4+/CD8+随着癌症的发生发展降低，加之手术的原因，患者机体免疫能力下降。由此认为结直肠癌诱导的人体免疫应答主要依赖于淋巴细胞，而炎症显著抑制细胞免疫，导致CD4+淋巴细胞显著减少，CD8+淋巴细胞显著增加。复发组T淋巴细胞水平与未复发组有较大差异，这提示T淋巴细胞水平与患者预后有较大关系。

本研究通过Spearman相关性分析方法分析T淋巴细胞水平与结直肠癌腹腔镜根治术后复发的相关性，发现血清CD3+、CD4+和CD4+/CD8+水平与结直肠癌术后复发呈负相关，血清CD8+水平与结直肠癌复发呈正相关。可能是由于术后肿瘤免疫调节功能受抑制，患者的肿瘤免疫耐受状态加重，产生或分泌的可溶性免疫抑制因子作用增强，阻止了CD3+、CD4+细胞的形成和成熟，促进CD8+淋巴细胞增加，使机体免疫系统处于抑制状态，加速了癌症的进展。同时ROC曲线分析结果显示，CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+水平预测结直肠癌复发的AUC分别为0.738、0.633、0.864、0.787(均P<0.05)，最佳截断值分别为67.33%、34.63%、25.41%、1.48，灵敏度分别为86.70%、46.70%、100.00%、86.70%，特异度分别为62.20%、95.60%、64.40%、73.30%。提示T淋巴细胞水平对结直肠癌腹腔镜根治术后复发具有一定的预测价值。但由于本研究纳入样本量较小，研究方法较为简单，后续还需扩大样本量、进一步进行验证和探究。

综上所述，血清CD3+、CD4+和CD4+/CD8+水平与结直肠癌腹腔镜根治术后复发呈负相关，血清CD8+水平与结直肠癌复发呈正相关，其作为预测术后复发的指标，具有一定的临床价值。