多囊卵巢综合征患者血清RBP-4、SF水平与IVF-ET妊娠结局的相关性研究

李学荣，黄雪昆，梅珺琰，翁治委，周少虎，彭新良

广州中医药大学第一附属医院生殖医学科，广东广州 510405

多囊卵巢综合征(PCOS)是一种发病率较高的妇科疾病，PCOS患者多伴有胰岛素抵抗(IR)，可引起女性不孕[1]。临床多利用体外受精-胚胎移植(IVF-ET)帮助PCOS患者怀孕，内分泌异常、IR、氧化应激、血糖异常升高对IVF-ET助孕结局会产生一定影响[2]。既往研究表明，视黄醇结合蛋白-4(RBP-4)是一种单一肽链蛋白质，与IR有关[3]，且其在PCOS患者血清中水平上调，RBP-4可能影响PCOS病理发展[3-4]。另外，血清铁蛋白(SF)是一种反映机体铁负荷的重要指标，其在PCOS患者中水平显著升高，具有辅助诊断PCOS的潜在价值[5]。但血清RBP-4、SF水平与PCOS患者IVF-ET妊娠结局是否有关尚不明确。因此，本文检测了PCOS患者的RBP-4、SF水平，旨在分析RBP-4、SF与IVF-ET妊娠结局的相关性。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2017年11月至2020年1月于本院行IVF-ET的PCOS不孕患者127例作为PCOS组，年龄23～39岁、平均(31.69±6.84)岁。选取同期因输卵管因素于本院行IVF-ET治疗的127例继发不孕患者作为对照组，年龄22～40岁、平均(31.16±6.65)岁，排除合并其他内分泌疾病者。对照组和PCOS组年龄比较，差异无统计学意义(P>0.05)。纳入标准：(1)PCOS患者均符合2003年欧洲人类生殖与胚胎学/美国生殖医学学会拟定的PCOS诊断标准[6]；(2)患者均为首次行IVF-ET助孕治疗；(3)患者检查资料均完整。排除标准：(1)无完整卵巢、子宫或合并子宫、卵巢器质性病变者；(2)合并高泌乳素血症、内分泌疾病者；(3)患有先天性肾上腺皮质增生、库欣综合征者；(4)合并传染性疾病、肿瘤者；(5)合并生殖系统急性感染者；(6)心血管疾病者。受试者及其家属均知情同意，本研究获得本院伦理委员会批准。

1.2方法

1.2.1临床资料的收集 收集纳入研究患者的空腹胰岛素(FINS)水平、不孕年限、空腹血糖(FBG)水平、体质量指数(BMI)、稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR，HOMA-IR=FINS×FBG/22.5)等资料。

1.2.2标本采集 月经规律受试者在卵泡早期(月经第2日)，月经稀发/闭经者在经阴道B型超声诊断仪检查显示最大卵泡直径均值小于10 mm时抽取外周静脉血于离心管中，4 800 r/min，离心7 min取上清，储存于-80 ℃冰箱。

1.2.3酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清RBP-4、SF水平 按人RBP-4 ELISA检测试剂盒(上海恒斐生物科技有限公司)、SF ELISA检测试剂盒(艾美捷科技有限公司)说明书配制RBP-4、SF的标准品溶液，使用酶标仪(Q3000型，北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司)测定RBP-4、SF标准品溶液、血清标本在450 nm处的吸光度，绘制RBP-4、SF的标准曲线，结合回归方程，计算血清RBP-4、SF水平。

1.2.4观察指标 观察受试者年龄、体质量指数(BMI)、不孕年限、FINS、FBG、HOMA- IR、RBP-4、SF、获卵数、成熟卵率、正常受精率、优质胚胎率及临床妊娠率等。

1.2.5促排卵方案 两组受试者均利用黄体中期短效长方案进行降调节。受试者月经第21天时给予促性腺激素释放激素激动剂(醋酸曲普瑞林，辉凌制药有限公司)降调节，以0.1 mg/d，连续皮下注射15 d，第16天给予75～225 IU/d注射用重组人促卵泡激素(瑞士默克雪兰诺公司)启动超排卵，当受试者有2～3个主导卵泡平均直径为17～20 mm 时，给予肌肉注射重组人绒毛膜促性腺激素250 μg，35～36 h后在B型超声诊断仪引导下穿刺取卵、授精。72 h后在B型超声诊断仪(JH-3202型，江苏佳华电子设备有限公司)引导下进行胚胎移植，移植后每日以肌肉注射方式给予黄体酮(国药准字H31021401，上海通用药业股份有限公司)支持黄体功能。

1.2.6妊娠结局判定标准 胚胎移植后第14天检测血人绒毛膜促性腺激素(HCG)，以HCG≥15 IU/L为生化妊娠，移植后第35天行阴道B型超声诊断仪检查，以见到妊娠囊为临床妊娠。

2 结 果

2.1两组一般资料比较 与对照组比较，PCOS组FINS水平、HOMA-IR显著升高(P<0.05)，年龄、BMI、不孕年限、FBG水平差异无统学意义(P>0.05)，见表1。

表1 两组一般资料比较

2.2两组血清RBP-4、SF水平比较 与对照组比较，PCOS组患者血清RBP-4、SF水平升高(P<0.05)，见表2。

表2 两组血清RBP-4、SF水平比较

2.3两组IVF-ET妊娠结局评价指标比较 与对照组比较，PCOS组患者临床妊娠率明显降低(P<0.05)，获卵数、成熟卵率、正常受精率、优质胚胎率差异无统计学意义(P>0.05)，见表3。

表3 两组IVF-ET妊娠结局评价指标比较

2.4IVF-ET助孕PCOS患者血清RBP-4、SF水平与FINS、HOMA-IR的相关性 Pearson相关分析显示，IVF-ET助孕PCOS患者血清RBP-4水平与FINS水平、HOMA-IR呈正相关(r=0.557、0.432，P<0.05)，见图1、2；SF水平与FINS、HOMA-IR也呈正相关(r=0.425、0.387，P<0.05)，见图3、4。

图1 IVF-ET助孕PCOS患者血清RBP-4与FINS的相关性

图2 IVF-ET助孕PCOS患者血清RBP-4与HOMA-IR的相关性

图3 IVF-ET助孕PCOS患者SF与FINS的相关性

图4 IVF-ET助孕PCOS患者SF与HOMA-IR的相关性

2.5IVF-ET助孕PCOS患者血清RBP-4、SF水平与IVF-ET结局的相关性 Spearman相关分析显示：IVF-ET助孕PCOS患者血清RBP-4、SF水平与临床妊娠率呈负相关(r=-0.463、-0.538，P<0.05)。

2.6Logistic回归分析PCOS患者IVF-ET妊娠结局的影响因素 以PCOS患者IVF-ET妊娠结局为因变量(临床妊娠=0，生化妊娠=1)，以FINS、HOMA-IR、RBP-4、SF等连续变量的实测值为自变量，利用逐步向前-LR法进行Logistic回归分析，结果显示，HOMA-IR、RBP-4、SF为PCOS患者影响IVF-ET妊娠结局的危险因素(P<0.05)。见表4。

表4 Logistic回归分析影响PCOS患者IVF-ET妊娠结局的危险因素

3 讨 论

PCOS以IR、稀发排卵或无排卵等为临床特征，严重损害育龄期女性身心健康[7-8]。PCOS患者的卵巢内的卵泡缺少成熟颗粒细胞，雌激素产生受阻，导致排卵障碍，对女性受孕产生不良影响，而IVF-ET是常用的辅助生殖技术，IVF-ET虽可在一定程度上解决PCOS患者排卵障碍问题，但IVF-ET对PCOS不孕患者的助孕效果有限[9]。因此，寻找影响PCOS不孕患者IVF-ET助孕结局的因素，及时干预，对改善患者妊娠结局有一定积极意义。

RBP-4是由脂肪组织、肝脏分泌的细胞因子，可协助维生素A的吸收、代谢、贮存，结合、转运维生素A视黄醇类代谢物，影响上皮组织分化、胚胎发育等过程，与动脉粥样硬化、妊娠糖尿病、IR等疾病进展关系密切[10-11]。研究发现，血清RBP-4水平在产后妊娠糖尿病患者中显著升高，与HOMA-IR呈正相关，其可通过影响磷脂酰肌醇3激酶活性等方式，进而参与IR发病环节，RBP-4可作为妊娠期糖尿病患者产后糖代谢异常的标志物[12-13]。另外，PCOS及PCOS合并糖尿病患者血清RBP-4水平均明显高于健康对照组，RBP-4可能在PCOS疾病进展中发挥重要作用[14]。本研究中，PCOS组患者血清RBP-4水平明显高于对照组，提示RBP-4可能在PCOS发病过程中具有重要作用。另外，PCOS患者FINS、HOMA-IR水平较高，与奚迪等[15]研究相符，且PCOS患者临床妊娠率较低，提示PCOS患者存在IR，且PCOS可能对IVF-ET助孕结局产生不利影响。进一步研究显示，IVF-ET助孕PCOS患者血清RBP-4水平与FINS、HOMA-IR呈正相关，与临床妊娠率呈负相关，提示RBP-4可能与FINS、HOMA-IR相互影响，从而共同影响PCOS患者IVF-ET助孕结局，推测PCOS患者血清RBP-4水平升高，RBP-4可能通过影响相关酶活性加重IR，使患者发生排卵障碍性不孕，或是RBP-4通过影响卵子成熟、胚胎发育，从而影响PCOS患者IVF-ET助孕结局，但具体作用机制还需要深入探究。

铁是人体必需的微量元素之一，以多种形态保持动态平衡，但机体铁过多可促进自由基对器官、组织的损伤，引发多种病变。既往研究认为，铁过量可影响机体胰岛素敏感性，增加IR，且SF是肝内合成的储铁蛋白，可有效评估体内储铁情况[16-17]。SF在妊娠期糖尿病患者中水平上调，与HOMA-IR具有良好相关性，其可能在患者IR发生过程中起促进作用[18]。本研究中，PCOS组患者血清SF水平明显高于对照组，与TIONGCO等[5]研究一致，提示SF可能与PCOS发生、发展有关。分析其原因：机体铁超负荷可引起氧化应激反应，产生大量活性氧，促进脂质氧化，降低机体对葡萄糖的利用，促进肝脏糖异生，引发肝脏介导的IR；铁在肌肉组织及肝脏处沉积，降低肌肉组织和肝脏对胰岛素的摄取，以及肝脏对胰岛素的灭活、清除，引起高胰岛素血症；胰岛素促进细胞内铁沉积，加强氧化应激反应，导致细胞氧化损伤，降低胰岛素活性，形成恶性循环，加重IR[19-20]，从而加速PCOS发生发展。进一步研究显示，IVF-ET助孕PCOS患者SF水平与FINS、HOMA-IR呈正相关，与临床妊娠率呈负相关，提示SF可能与PCOS患者IVF-ET助孕结局密切相关，其有望成为预测PCOS患者IVF-ET助孕结局的标志物。此外，Logistic回归分析显示，血清RBP-4、SF水平升高，HOMA-IR升高均是影响PCOS患者IVF-ET妊娠结局的独立危险因素，提示监控血清RBP-4、SF水平有利于临床改善PCOS患者IVF-ET的助孕结局。

综上所述，本研究发现，RBP-4、SF在PCOS不孕患者血清中水平较高，两者均可能影响PCOS患者IVF-ET助孕结局，及时监控血清RBP-4、SF水平有助于临床预防行IVF-ET助孕PCOS患者发生不良妊娠结局。但RBP-4、SF只是影响PCOS患者IVF-ET妊娠结局的部分因素，且本研究未深入探究两者在PCOS中作用机制，后期需增加样本量，并加入更多相关因素进行研究。