番石榴叶提取物化学成分的研究

李敏茹，孔 意，张 曦，赵梦诗，孙敬勇*

（1. 山东第一医科大学（山东省医学科学院） 药物研究所，山东 济南 250024；2. 济南明鑫制药股份有限公司，山东 济南 250216）

番石榴叶是桃金娘科（Myrtaceae Juss.）番石榴属（Psidium L.）植物番石榴（Psidium guajava Linn.）的叶，原产于美洲热带地区，约17世纪末传入中国[1]。番石榴叶和果均可入药，在《岭南草药志》、《福建药物志》和《台湾药用植物志》中均有记载，民间常用于清热解毒、生津止渴、燥湿健脾、涩肠止泻。现代药理研究表明其具有明显的降血糖、降血压、止泻、抗氧化、抗菌、抗病毒及抗肿瘤等活性[2-5]。

为进一步研究药物有效成分，对番石榴叶进行了提取和分离纯化，得到9个化合物，根据化合物的波谱数据，鉴定这9个化合物分别为熊果酸（1）、山楂酸（2）、科罗索酸（3）、槲皮素（4）、金丝桃苷（5）、槲皮素-3-O-α-D-阿拉伯呋喃糖苷（6）、globulol（7）、α-cadinol（8）和δ-cadinol（9）。其中化合物6为首次从番石榴属植物中分离得到。

1 仪器与试药

1.1 仪器

AV-400型核磁共振仪，AV-600型核磁共振仪（瑞士Bruker公司）；Apex Ⅱ型高分辨质谱仪（美国Bruker公司）；Ulti Mate 3000型高效液相色谱分析仪（赛默飞世尔科技有限公司）；Trap VL型质谱仪（美国Agilent公司）；Shimadzu LC-20AD型制备型高效液相色谱仪（日本岛津公司）；YMC-Pack ODS-A型液相色谱柱（日本YMC公司）；LH-20凝胶（瑞典Pharmacia LKB公司）。

1.2 试药

柱色谱硅胶（青岛海洋化工有限公司）；薄层色谱硅胶（青岛海洋化工有限公司）；色谱甲醇，色谱乙腈（美国Tedia公司）；二氯甲烷，甲醇，乙酸乙酯，正丁醇，无水乙醇，石油醚，乙腈（天津市富宇精细化工有限公司）。

2 提取分离

取干燥番石榴叶（5 kg），室温下用75 %乙醇（150 L）浸泡提取3次，3次提取液分别浓缩后合并。依次用石油醚（6 L）、二氯甲烷（6 L）、乙酸乙酯（6 L）、正丁醇（6 L）分别萃取3次，分别得到石油醚部位（62.1 g），二氯甲烷部位（71.4 g），乙酸乙酯部位（60 g），正丁醇部位（33.3 g）。取石油醚部位和二氯甲烷部位，经反复硅胶柱色谱（二氯甲烷-甲醇系统洗脱）、凝胶柱色谱（二氯甲烷-甲醇系统洗脱）、ODS柱色谱（甲醇-水系统洗脱）、制备HPLC（甲醇-水系统洗脱）进行分离纯化，得到化合物1～9。

3 结构鉴定

图1 番石榴叶提取化合物结构

化合物1：白色无定型粉末，ESI-MS（m/z）：479.2[M+Na]+；1H NMR（600 MHz，C5D5N）δH：0.91（3H，s，H-25），0.93（3H，s，H-24），0.97（3H，d，J=5.52，H-30），1.03（3H，s，H-26），1.07（3H，d，J=6.00，H-29），1.26（3H，s，H-23），1.27（3H，s，H-27），2.15（1H，d，J=8.28，H-18），3.47（1H，d，J=4.92，H-3），5.51（1H，m，H-12）；13C NMR（150 MHz，C5D5N）δC：39.4（C-1），28.8（C-2），78.2（C-3），39.5（C-4），55.9（C-5），18.8（C-6），33.7（C-7），39.2（C-8），48.1（C-9），37.4（C-10），23.7（C-11），125.7（C-12），139.3（C-13），42.6（C-14），28.2（C-15），25.0（C-16），48.1（C-17），53.6（C-18），39.5（C-19），40.0（C-20），31.1（C-21），37.5（C-22），28.8（C-23），17.5（C-24），15.7（C-25），16.6（C-26），23.9（C-27），179.8（C-28），17.5（C-29），21.4（C-30）。化合物1的核磁数据与文献[6]报道一致，鉴定为熊果酸。

化合物2：白色无定型粉末，ESI-MS（m/z）：495.5 [M+Na]+；1H NMR（600 MHz，C5D5N）δH：0.96（3H，s，H-29），1.00（3H，s，H-25），1.01（3H，s，H-30），1.03（3H，s，H-26），1.08（3H，s，H-24），1.22（3H，s，H-23），1.28（3H，s，H-27），3.31（1H，d，J=13.38，H-18），3.40（1H，d，J=9.24，H-3），4.09（1H，ddd，H-2），5.48（1H，m，H-12）；13C NMR（150 MHz，C5D5N）δC：47.8（C-1），68.6（C-2），83.9（C-3），39.8（C-4），56.0（C-5），18.9（C-6），33.2（C-7），39.9（C-8），48.2（C-9），38.6（C-10），24.0（C-11），122.5（C-12），144.9（C-13），42.0（C-14），28.3（C-15），23.8（C-16），46.7（C-17），42.3（C-18），46.5（C-19），31.0（C-20），34.3（C-21），33.2（C-22），29.3（C-23），16.9（C-24），17.5（C-25），17.6（C-26），26.2（C-27），180.1（C-28），33.2（C-29），23.7（C-30）。化合物2的核磁数据与文献[7]报道一致，鉴定为山楂酸。

化合物3：白色无定型粉末，ESI-MS（m/z）：495.5 [M+Na]+；1H NMR（600 MHz，C5D5N）δH：0.96（3H，s，H-25），0.99（3H，d，J=2.7，H-30），1.02（3H，d，J=2.82，H-29），1.05（3H，s，H-26），1.08（3H，s，H-24），1.22（3H，s，H-27），1.28（3H，s，H-23），2.62（1H，d，J=9.6，H-18），3.39（1H，d，J=4.02，H-3），4.09（1H，ddd，H-2），5.47（1H，m，H-12）；13C NMR（150 MHz，C5D5N）δC：48.0（C-1），68.6（C-2），83.9（C-3），39.8（C-4），56.0（C-5），18.9（C-6），33.6（C-7），40.1（C-8），48.1（C-9），38.5（C-10），23.8（C-11），125.6（C-12），139.3（C-13），42.6（C-14），28.7（C-15），24.9（C-16），48.1（C-17），53.6（C-18），39.5（C-19），39.4（C-20），31.1（C-21），37.4（C-22），29.4（C-23），17.7（C-24），17.0（C-25），17.5（C-26），23.9（C-27），179.8（C-28），17.5（C-29），21.4（C-30）。化合物3的核磁数据与文献[8]报道一致，鉴定为科罗索酸。

化合物4：黄色粉末，ESI-MS（m/z）：303.2[M+H]+；1H NMR（600 MHz，DMSO-d6）δH：12.48（1H，s，5-OH），7.67（1H，d，J=2.22，H-2’），7.53（1H，dd，J=2.16，2.22，H-6’），6.88（1H，d，J=8.46，H-5’），6.41（1H，d，J=1.98，H-8），6.19（1H，d，J=1.98，H-6）；13C NMR（150 MHz，DMSO-d6）δC：148.19（C-2），136.18（C-3），176.32（C-4），161.21（C-5），98.66（C-6），164.38（C-7），93.82（C-8），156.64（C-9），103.50（C-10），122.46（C-1’），115.59（C-2’），147.32（C-3’），145.54（C-4’），116.09（C-5’），120.46（C-6’）。化合物4的核磁数据与文献[9-10]报道一致，鉴定为槲皮素。

化合物5：黄色粉末，ESI-MS（m/z）：465.3[M+H]+；1H NMR（600 MHz，DMSO-d6）δH：12.64（1H，s，5-OH），7.68（1H，dd，J=1.98，8.4，H-6’），7.54（1H，d，J=1.92，H-2’），6.82（1H，d，J=8.52，H-5’），6.41（1H，d，J=1.92，H-6），6.21（1H，d，J=1.86，H-8），5.38（1H，d，J=7.68，H-1’’）；13C NMR（150 MHz，DMSO-d6）δC：156.77（C-2），134.04（C-3），177.99（C-4），161.73（C-5），99.15（C-6），164.60（C-7），93.98（C-8），156.8（C-9），104.44（C-10），121.63（C-1’），115.68（C-2’），145.30（C-3’），148.94（C-4’），116.50（C-5’），112.46（C-6’），102.41（C-1’’）,71.73（C-2’’），73.73（C-3’’），68.43（C-4’’），76.33（C-5’’），60.64（C-6’’）。化合物5的核磁数据与文献[11]报道一致，鉴定为金丝桃苷。

化合物6：黄色粉末，ESI-MS（m/z）：435.3[M+H]+；1H NMR（600 MHz，DMSO-d6）δH：7.56（1H，dd，J=2.16，8.46，H-6’），7.48（1H，d，J=2.16，H-2’），6.85（1H，d，J=8.4，H-5’），6.39（1H，d，J=1.32，H-8），6.18（1H，d，J=1.5，H-6），5.59（1H，d，J=1.08，H-1’’）；13C NMR（150 MHz，DMSO-d6）δC：156.34（C-2），133.19（C-3），177.46（C-4），161.09（C-5），98.82（C-6），165.17（C-7），93.57（C-8），156.58（C-9），103.50（C-10），120.78（C-1’），115.46（C-2’），145.07（C-3’），148.56（C-4’），115.37（C-5’），121.49（C-6’），107.77（C-1’’），81.98（C-2’’），76.95（C-3’’），85.88（C-4’’），60.67（C-5’’）。化合物6的核磁数据与文献[12]报道一致，鉴定为槲皮素-3-O-α-D-呋喃阿拉伯糖苷。

化合物7：白色粉末，ESI-MS（m/z）：223.1 [M+H]+；1H NMR（600 MHz，CDCl3）δH：0.92（3H，m，H-12），0.98（3H，d，J=2.64，H-15），1.01（3H，d，J=2.64，H-14），1.10（3H，d，J=2.76，H-13），1.90（1H，m，H-8），2.01（1H，m，H-11）；13C NMR（150 MHz，CDCl3）δC：39.69（C-1），28.46（C-2），19.36（C-3），26.84（C-4），20.24（C-5），44.67（C-6），75.23（C-7），57.12（C-8），26.22（C-8），26.22（C-9），34.66（C-10），36.39（C-11），16.06（C-12），16.06（C-13），28.69（C-14），15.81（C-15）。化合物7的核磁数据与文献[13]报道一致，鉴定为globulol。

化合物8：白色粉末，ESI-MS（m/z）：223.1[M+H]+；1H NMR（600 MHz，CDCl3）δH：0.76（3H，d，J=6.96，H-12），0.92（3H，d，J=6.96，H-13），1.10（3H，s，H-14），1.67（3H，s，H-15），5.50（1H，s，H-6）；13C NMR（150 MHz，CDCl3）δC：72.55（C-1），42.26（C-2），22.02（C-3），46.78（C-4），39.92（C-5），122.38（C-6），134.96（C-7），31.18（C-8），22.71（C-9），50.08（C-10），26.03（C-11），15.16（C-12），21.68（C-13），23.83（C-14），20.79（C-15）。化合物8的核磁数据与文献[14]报道一致，鉴定为α-cadinol。

化合物9：白色粉末，ESI-MS（m/z）：223.1[M+H]+；1H NMR（600 MHz，CDCl3）δH：0.81（3H，d，J=6.96，H-12），0.88（3H，d，J=6.96，H-13），1.29（3H，s，H-14）,1.66（3H，s，H-15），5.52（1H，s，H-6）；13C NMR（150 MHz，CDCl3）δC：72.45（C-1），35.39（C-2），21.53（C-3），44.17（C-4），36.85（C-5），124.66（C-6），134.37（C-7），30.98（C-8），18.57（C-9），45.62（C-10），26.48（C-11），15.37（C-12），21.62（C-13），23.60（C-14），28.00（C-15）。化合物9的核磁数据与文献[15]报道一致，鉴定为δ-cadinol。