吡拉西坦片溶出度的测定方法研究

聂延君，张乃斌，吴 敏，陈 真，徐玉文*

（1. 山东省食品药品检验研究院 仿制药研究与评价重点实验室 山东省仿制药一致性评价工程技术研究中心，山东 济南 250101；2. 山东省公共卫生临床中心，山东 济南 250000）

吡拉西坦属于γ-氨基丁酸（GABA）的环形衍生物，为脑代谢改善药，可用于多种原因所致的记忆减退及轻、中度脑功能障碍，也用于儿童智能发育迟缓[1-5]。吡拉西坦片收载于《中国药典》2020年版二部，国外药典未收载该品种，日本橙皮书和FDA溶出曲线数据库也均未收载吡拉西坦溶出度测定相关信息和方法。《中国药典》现行标准中未收载溶出度检查，无法准确反映药物体外溶出情况。吡拉西坦原料药在水中易溶，溶解度约为519.4 mg/ml（37 ℃），在不同pH溶液中的溶解度相差不大。本研究通过考察不同溶出方法、溶出介质、转速和取样时间点等条件，建立了吡拉西坦片的溶出度测定方法，并对6家企业样品的溶出度及溶出曲线等进行了比较。本文建立的方法具有较好的区分力，为吡拉西坦片质量控制和标准提高提供了重要依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

岛津LC-20AT高效液相色谱仪（日本岛津公司）；自动溶出仪（瑞士SOTAX公司）；CP225D电子天平（德国Sartorius公司）；真空脱气仪（天津市天大天发科技有限公司）。

1.2 试药

吡拉西坦片分别由A～F 6家企业提供；吡拉西坦原料药（江西跃华药业有限公司，批号：20180951）；吡拉西坦对照品（中国食品药品检验研究院，批号：100386-201703，含量：100.0 %）；乙腈为色谱纯，盐酸、冰醋酸、醋酸钠、磷酸氢二钾、氢氧化钠等均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 溶液制备

2.1.1 对照品溶液制备 精密称取吡拉西坦对照品适量，加水溶解并制成0.12 mg/ml的溶液，作为对照品溶液。

2.1.2 供试品溶液制备 取溶出液，滤过，精密量取续滤液适量，加水稀释，制成每1 ml中约含吡拉西坦0.12 mg的溶液，作为供试品溶液

2.2 溶出量测定[6]

采用高效液相色谱法（HPLC），色谱柱为C18，流动相为0.1 %磷酸氢二钾溶液（用磷酸调节pH至6.0±0.05）-乙腈（95:5）；检测波长为205 nm，流速为1.0 ml/min。精密量取供试品和对照品溶液各20 μl注入色谱仪，记录峰面积，以外标法计算吡拉西坦溶出量，即得。

2.3 方法学验证

2.3.1 线性关系 精密称取吡拉西坦对照品50.15 mg，置50 ml量瓶中，加乙腈-水（5:95）溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液（1 mg/ml）。分别精密量取适量，用乙腈-水（5:95）稀释制成每1 ml含吡拉西坦0.02，0.06，0.09，0.12，0.15，0.18 mg的溶液，作为线性溶液。分别精密量取20 μl，进样，记录色谱图。以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，进行线性拟合。结果，吡拉西坦在0.02～0.18 mg/ml范围内线性关系良好，回归方程：y=40 439x+209 742，相关系数（r）为0.9993。

2.3.2 准确度 按处方量称取空白辅料适量，加乙腈-水（5:95）溶解并过滤，取续滤液作为空白辅料溶液。分别称取吡拉西坦对照品适量，用空白辅料溶液稀释，分别制成每1 ml含吡拉西坦0.06，0.12，0.18 mg的溶液，每个浓度配制3份，精密量取20 μl，进样，记录色谱图。结果回收率平均值为100.1 %。说明此方法中吡拉西坦的回收率良好。结果见表1。

表1 回收率试验结果

2.3.3 稳定性试验 取0.12 mg/ml的吡拉西坦对照品溶液，分别于0，2，4，6，8 h进样，记录色谱图。结果，吡拉西坦在8 h内稳定性良好。结果见表2。

表2 稳定性结果

2.3.4 滤膜吸附试验 分别采用离心和滤膜过滤两种方式处理供试品溶液，结果两种方法溶液峰面积相差不大，滤膜对峰面积影响较小，因此采用滤膜过滤处理供试品溶液。结果见表3。

表3 供试品溶液经离心和过滤处理后峰面积

2.4 溶出度测定方法的建立

2.4.1 pH值-溶解度曲线 取9支具塞试管，分别精密加入pH 1.0盐酸溶液，pH 2.0盐酸溶液，pH 4.0醋酸盐缓冲溶液，pH 5.5醋酸盐缓冲溶液，pH 6.0磷酸盐缓冲液，pH 6.8磷酸盐缓冲液，pH 7.4磷酸盐缓冲液，pH 8.0磷酸盐缓冲液各5 ml，分别加入过量吡拉西坦原料药，制成饱和溶液，置37 ℃水浴中振荡过夜[7]，按2.2项下色谱条件测定溶解度并绘制吡拉西坦pH值-溶解度曲线。取纯化水作为溶出介质同法操作，计算吡拉西坦在水中的溶解度。结果表明，吡拉西坦原料在水中的溶解度为519.4 mg/ml，在pH 1.0～8.0溶出介质中，溶解度分布在503.4～568.7 mg/ml之间，受pH影响较小，略成S形分布，整体相差不大。吡拉西坦片规格有0.4 g和0.2 g两种，以900 ml作为溶出介质体积，均能满足漏槽条件。结果见表4。

表4 吡拉西坦在不同pH条件下的溶解度（37 ℃）

2.4.2 溶出度测定方法选择 取A、B、C企业样品各一批，以水900 ml为溶出介质，分别采用篮法和桨法，转速为50 r/min。结果本品在两种溶出装置中测得的结果基本一致。篮法和桨法作为口服固体制剂最常用的两种方法[8]，各国药典均有收载，其中片剂溶出度的首选方法为桨法，本着通用性强、耐用性好、广泛普及的原则[5]，本品选用采用桨法作为溶出方法。结果见表5。

表5 溶出度测定方法比较

2.4.3 转速选择[9]取A～C 3家企业样品，考察在50 r/min和75 r/min两种转速条件下的溶出曲线差异。结果在75 r/min转速条件下，3家样品溶出速率较快，30 min时达到平台期。转速调整为50 r/min时，溶出速率减缓，各企业样品30 min的溶出度有较大区别，B企业样品溶出明显减缓，呈现出较大区分力，因此转速拟定为50 r/min。结果见表6。

表6 两种转速下的溶出量比较

2.4.4 溶出介质的选择 分别选取0.1 mol/L HCl、pH 4.0 醋酸盐缓冲液、pH 6.8 磷酸盐缓冲液和水4种溶出介质，比较同一企业样品在4种不同介质中的溶出行为差异。结果表明样品在4种溶出介质中15 min的溶出量均可达85 %以上，20 min后达平台期，4条溶出曲线基本一致。虽然水在不同地区的pH可能略有不同[6]，但根据吡拉西坦pH值-溶解度曲线，pH对吡拉西坦的溶解度影响较小，本着环保经济、易操作的原则，选取水作溶出介质。另外比较多家企业溶出曲线发现，以水为溶出介质，仍具有很好的区分力，能满足质量控制的要求[10]。见表7。

表7 4种溶出介质的溶出结果比较

综上，吡拉西坦片溶出度测定方法为：以水900 ml为溶出介质，转速为50 r/min，依法[6]操作，经30 min时取溶出液，按2.1.2项下方法制备供试品溶液，按2.1.1项下方法制备对照品溶液，按2.2项下方法进样测定。

2.5 溶出曲线的测定

取A～F 6家企业样品，依法操作，取样时间点调整为5，10，15，20，30，45 min，分别取溶液10 ml，滤过，同时补液；分别精密量取供试品溶液和对照品溶液各20 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算溶出量。以时间为横坐标，累积溶出量为纵坐标，绘制溶出曲线。结果见表8。结果显示，15 min时A、E企业样品的溶出量大于85 %，30 min时仅D企业样品溶出量不足85 %，该企业样品在45 min时溶出量仍低于85 %。根据溶出曲线结果，将吡拉西坦片溶出度限度设定为30 min时溶出量不低于标示量的85 %。

表8 6家企业样品溶出曲线

2.6 6家企业样品考察

按已确定方法测定A～F 6家企业样品的溶出度，结果，B和D两家企业样品溶出度不合格，其中D企业样品溶出缓慢，且溶出量较低，说明该企业制备工艺或处方存在一定问题，见表9。

表9 溶出度测定结果

3 讨论

吡拉西坦片现行标准中未设定溶出度检查，无法客观反映样品的体外溶出情况。对于固体制剂，体外溶出试验应尽可能反映其在体内的释放和吸收情况，因此应选择合适的、具有较强区分能力的溶出介质[11-12]。本文考察不同溶出方法、转速、溶出介质和取样时间点等，确定了吡拉西坦片溶出度测定方法。该方法具有较好的区分力，6家企业样品中有2家样品溶出度低于拟定限度（85 %），其中一家企业的平均溶出度仅为55 %，整体溶出度较差，反映出该企业在制剂处方或制备过程中存在一定问题，因此，增订溶出度检查项十分必要，同时也可为企业筛选处方，改进工艺提供依据。