28%三环唑·嘧菌酯悬浮剂的高效液相色谱分析

2022-04-02孙钰洁

世界农药 2022年3期

孙钰洁，颜明

(江苏省农产品质量检验测试中心，江苏南京 210036)

三环唑是美国陶氏益农公司开发生产的一种三唑类杀菌剂，有高效、低毒、内吸性强等特点，广泛应用于水稻稻瘟病的防治。它的作用机制是抑制病原菌菌丝和附着胞黑色素的生物合成，阻止病原菌侵入和减少孢子的产生。嘧菌酯是甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂，具有高效、广谱、杀菌活性高等特点，几乎对所有真菌病害有效[1]。它能够有效地防治白粉病、霜霉病、稻瘟病等，被广泛用于谷物、果蔬等作物的病害防治与储藏保鲜[2]。三环唑和嘧菌酯复配产品常用于水稻稻瘟病的防控，且效果显著[3]。

目前三环唑和嘧菌酯的检测方法有液相色谱法[4-7]、气相色谱法[8,9]，同时检测这 2个组份的方法国内文献未见报道。本文开发了一种高效液相色谱法同时检测三环唑和嘧菌酯混剂产品中有效成分含量的方法，以期为该类产品生产和质量控制提供技术保障。

1 试验部分

1.1 试剂和溶液

甲醇，色谱纯(德国默克公司)；超纯水(Millipore超纯水制备系统自制)；三环唑标准品和嘧菌酯标准品(质量百分数含量都为 98.9%，上海市农药研究所)；28%三环唑·嘧菌酯悬浮剂(江苏省扬州市苏灵农药化工有限公司)。

1.2 仪器

1100型高效液相色谱仪配G1315B二极管阵列检测器和色谱工作站(美国安捷伦科技公司)；Zorbax SB-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm，5μm)；Millipore超纯水制备系统(Millipore公司)；KQ-50B超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司) 。

1.3 色谱操作条件

流动相：甲醇和水；流速：1.0 mL/min，梯度洗脱过程：0 ～10.0 min，甲醇体积比从40%增加到85%，10.1 ～15.0 min，甲醇体积比从85%降到40%。

柱温：30 ℃；检测波长：250 nm；进样体积：5 μL；保留时间：三环唑约5.671 min，嘧菌酯约9.478 min(图1)。

图1 28%三环唑·嘧菌酯悬浮剂的高效液相色谱图

1.4 样品溶液的配制

标样溶液：准确称取三环唑标准品0.05 g (精确至0.000 1 g)和嘧菌酯标准品0.02 g (精确至0.000 1 g)，置于同一50 mL容量瓶，加入20 mL甲醇，置于超声波清洗器中超声溶解，冷却至室温后用甲醇稀释至刻度，摇匀备用。

试样溶液：称取28%三环唑·嘧菌酯悬浮剂试样0.25 g (精确至0.000 1 g)到50 mL容量瓶，加入20 mL甲醇，置于超声波清洗器中超声溶解，冷却至室温后用甲醇稀释至刻度，摇匀，以0.45 μm滤膜过滤备用。

进样测定：在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻2针的峰面积变化小于1.5%后，再按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进样分析。

1.5 计算

将测得的2针试样溶液及试样前后2针标样溶液的峰面积分别进行平均，按下式计算三环唑和嘧菌酯的质量分数(X)。

式中：A1为标样溶液中三环唑(或嘧菌酯)峰面积平均值；A2为试样溶液中三环唑(或嘧菌酯)峰面积平均值；m1为三环唑(或嘧菌酯)标样的质量，g；m2为试样的质量，g；P为标样中三环唑(或嘧菌酯)质量分数，%。

2 结果分析

2.1 色谱条件的选择

2.1.1 检测波长的选择

通过Agilent 1100高效液相色谱仪的二极管阵列检测器进行紫外光谱扫描，得到三环唑和嘧菌酯的紫外吸收光谱图(图2和图3)。由图2和图3可见，嘧菌酯在250 nm左右有一个较平稳段吸收峰，三环唑在220 nm和280 nm左右有吸收峰，再根据化合物对紫外波长反应灵敏度的大小比较，本方法选择250 nm为检测波长。

图2 三环唑紫外吸收光谱图

图3 嘧菌酯紫外吸收光谱图

2.1.2 流动相的选择

比较了甲醇、乙腈和水为流动相分离三环唑和嘧菌酯的效果，结果发现以甲醇和乙腈为流动相，其分离效果无明显差异，但考虑到乙腈相对价格高和实际生产中成本控制需要，选择更经济的甲醇和水做流动相。三环唑和嘧菌酯极性相差较大，用一定比例的甲醇和水作流动相，2组分出峰时间相差很大。因此采用梯度洗脱方法，10 min内流动相甲醇比例从40%升高到85%，三环唑在5.6 min左右出峰，嘧菌酯在9.5 min左右出峰，2组分能很好地分离，节约了分析时间，获得满意结果。从10 min到15 min流动相甲醇比例从85%降到40%平衡柱子，以便下一针分析。

图4 三环唑标准溶液高效液相色谱图

图5 嘧菌酯标准溶液高效液相色谱图

图6 三环唑、嘧菌酯混合标准溶液高效液相色谱图

2.2 方法线性关系的测定

称取三环唑标样0.02、0.04、0.06、0.08、0.10 g和嘧菌酯标样 0.01、0.02、0.04、0.06、0.08 g (精确至0.000 1 g)分别置于50 mL容量瓶，用甲醇溶剂定容到刻度，摇匀。按上述操作条件进行测定。三环唑为0.000 40～0.002 00 g/mL、嘧菌酯为0.000 22～0.001 60 g/mL时有良好线性关系，以三环唑或嘧菌酯的浓度为横坐标，相应的峰面积为纵坐标作图，得到三环唑线性方程为y=3 626 064.690 2x-17.415 8，R2为0.999 5；嘧菌酯线性方程为y=6 142 686.771 2x-103.599 6，R2为0.999 6 (图7)。可见，在该方法条件下，三环唑或嘧菌酯浓度与其响应值之间表现出良好的线性关系。

图7 三环唑、嘧菌酯标准溶液浓度与其响应值线性关系图

2.3 方法精密度测定

称取同一批次28%三环唑·嘧菌酯悬浮剂6个样品，用1.4节方法处理样品，在1.3节色谱操作条件下进行分析，结果见表1。可见，三环唑和嘧菌酯的标准偏差分别为0.065 9和0.056 2，变异系数分别为0.33%和0.69%，说明该方法精密度高，重现性很好。

表1 方法的精密度试验

2.4 方法准确度测定

称取同一批次已知含量的 28%三环唑·嘧菌酯悬浮剂(三环唑含量 20.13%，嘧菌酯含量 8.11%)样品5份，并在样品中添加一定数量标准品。在上述操作条件下进行测定，结果见表2。可见，三环唑的加标回收率为98.29%～101.16%，平均加标回收率为 100.29%；嘧菌酯的加标回收率为 98.37%～101.23%，平均加标回收率为 99.77%，说明该方法回收率好，准确度高。