小花清风藤中2个新的化学成分

周 强，杜伟东，李志峰, 3*，王 琦，李 艳，冯育林，杨世林

小花清风藤中2个新的化学成分

周 强1，杜伟东1，李志峰1, 3*，王 琦2，李 艳1，冯育林2，杨世林2

1. 江西中医药大学，江西 南昌 330006 2. 创新药物与高效节能降耗制药设备国家重点实验室，江西 南昌 330006 3. 南昌市中药与天然药物活性成分研究重点实验室，江西 南昌 330006

研究小花清风藤的化学成分。利用硅胶柱色谱、中低压液相色谱、凝胶色谱、HP20树脂以及半制备型高效液相色谱等多种色谱技术进行分离，运用现代光谱技术鉴定化合物结构。从小花清风藤中分离得到2个化合物，分别为生物碱类化合物1-[1-羟基-2-(二甲基氨基)乙基]-3,4-菲二醇-4--β葡萄糖苷（1），酚酸苷类化合物3,5-二甲氧基-4-羟基苯甲酸-4--α芹糖基-(1→2)--α--鼠李糖苷（2）。化合物1、2均为未见报道的新化合物，分别命名为清风藤碱苷和清风藤酸苷。

清风藤属；小花清风藤；生物碱；酚酸类；清风藤碱苷；清风藤酸苷

小花清风藤为清风藤科（Sabiaceae）清风藤属Colelbr.植物小花清风藤Wall. ex Roxb.的干燥茎和叶，主要分布于广西、贵州、云南等地，是布依族、苗族药物，俗称“小黄药、雅希强（布依族语）、黄肿药、黄眼药”等[1-3]。其味苦，性微寒，具有清热利湿、止血之功效。用于湿热黄疸、外伤出血[4-7]。本课题组前期对小花清风藤醇提取物经HP-20树脂的70%乙醇洗脱部位进行化学成分研究，发现其主要含有酚酸类、木脂素类以及生物碱类化合物[8-11]。在此基础上，为进一步研究其化学成分，本实验继续对小花清风藤醇提取物经HP-20树脂的30%乙醇洗脱部位进行研究，采用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、中低压液相色谱以及高效液相色谱技术进行分离，采用波谱学方法与理化性质相结合分离鉴定出2个未见报道的新化合物，分别为生物碱类化合物1-[1-羟基-2-(二甲基氨基)乙基]-3,4-菲二醇-4--β葡萄糖苷（1-[1-hydroxy- 2-(dimethylamino)ethyl]-3,4-phenanthrenediol-4--βglucoside，1），酚酸苷类化合物3,5-二甲氧基-4-羟基苯甲酸-4--α芹糖基-(1→2)--α--鼠李糖苷[3,5-dimethoxy-4-hydroxybenzoicacid-4--αapinosyl- (1→2)--α--rhamnoside，2]，分别命名为清风藤碱苷和清风藤酸苷。

1 仪器与材料

Bruker avance 600型核磁共振仪（德国布鲁克公司）；Triple TOF 5600高分辨质谱仪（美国ABSciex公司）；EYALA旋转蒸发器（日本Eyala公司）；DHG-9036A型电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；EL204电子天平 [梅特勒托利多仪器（上海）有限公司]；LC-XR20UPLC/HPLC（日本岛津公司）；Agilent 1100 Series制备液相色谱（美国Agilent公司）；Waters 2487制备液相色谱（美国Waters公司）；DAION HP20树脂（日本三菱公司）；半制备液相和制备液相所用试剂为色谱纯，其他均为分析纯。

小花清风藤药材于2014年6月采自贵州省安顺市紫云县猫营镇，由江西中医药大学钟国跃教授鉴定为清风藤属植物小花清风藤Wall. ex Roxb.的干燥茎和叶，标本（WSZ201412）保存在江西中医药大学。

2 提取与分离

取17 kg小花清风藤药材，10倍量70%乙醇回流提取3次，时间分别为3.0、1.5、1.5 h，合并提取液，滤过，减压浓缩至无醇味。用95%乙醇将浓缩液中乙醇体积分数稀释至约20%，之后经HP-20大孔树脂分离，采用30%、50%、70%、95%乙醇洗脱得30%乙醇洗脱部位258 g、50%乙醇洗脱部位94 g、70%乙醇洗脱部位38 g和95%乙醇洗脱部位79 g。取小花清风藤30%乙醇洗脱部分（258 g），向其中分次少量加入60 mL甲醇充分溶解，滤过后，利用中压反相ODS硅胶柱分离。甲醇-水（20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%）洗脱得到7个流分A～G。A经制备型高效液相分离纯化，以甲醇-水（12∶88）等度洗脱，得到化合物1（10 mL/min，R＝36 min，2.0 mg）。F经中低压ODS柱色谱，甲醇-水（20%、40%、60%、80%、100%）分别洗脱，40%甲醇洗脱液，以甲醇-水（36∶64）等度洗脱，得到化合物2（20 mL/min，R＝30 min，4.1 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：白色粉末，易溶于水不易溶于甲醇，通过Q-TOF-MS得到分子离子峰为/459.189 3（[M－H]−，计算值458.184 9），推断分子式为C24H29NO8。从氢谱中（表1）可以观察到7个芳香环上的质子信号，其中1个五取代的芳香质子信号H7.47 (1H, s, H-2)，4个邻二取代芳香质子信号H9.85 (1H, d,= 8.6 Hz, H-5), 7.52 (1H, dt,= 8.4, 1.8 Hz, H-6), 7.56 (1H, dt,= 7.8, 1.2 Hz, H-7), 7.86 (1H, dd,= 7.8, 1.2 Hz, H-8)，四取代的2个邻位芳香质子信号H7.65 (1H, d,= 9.3 Hz, H-9), 7.88 (1H, d,= 9.2 Hz, H-10)，其中质子信号(H9.85) 是菲环上5位碳上的质子移向低场区的特征峰。再结合碳谱中14个芳香环上的碳原子，推测结构中含有菲环且3, 4位具有邻二氧取代。H4.92 (1H, d,= 7.9 Hz)为葡萄糖端基上质子信号，再由偶合常数7.9 Hz推断葡萄糖为β构型，同样碳谱中亦可见葡萄糖上的6个碳信号C105.9, 74.8, 76.6, 70.1, 77.7, 61.3，其中C105.9为端基碳信号。H2.31 (6H, s) 为氮上取代的2个甲基质子信号，相对应的碳信号C46.1，结合分子式，通过HSQC谱发现剩余1个次甲基信号C67.6,H5.45 (1H, m, H-11)，1个亚甲基碳信号C67.5,H2.39 (2H, m, H-12)，HMBC谱中H2.31 (6H, s) 与C-12 (C67.5)，H7.47 (1H, s) 与C-11 (C67.6) 存在远程相关，再结合化学位移数据67.5可能为连氧碳信号，以及质谱推测可能含有氮元素，参考文献中Fenfangjine F[12]数据推测可能含有结构片段-CH(OH)-CH2-N-(CH3)2。另外，HMBC谱（图1）中观察到H4.92 (1H, d,= 7.9 Hz, H-1′) 与C-4 (C140.7) 的相关峰，确定了糖苷键的连接位点在C-4位。以上数据再通过与文献中Fenfangjine F数据对比，发现连糖的α位以及邻位碳信号有所差异，进一步验证上述鉴定结果。最终将化合物1鉴定为1-[1-羟基-2-(二甲基氨基)乙基]-3,4-菲二醇-4-- β葡萄糖苷。

表1 化合物1的核磁共振波谱数据 (600/150 MHz, DMSO-d6)

Table 1 NMR data of compound 1 (600/150 MHz, DMSO-d6)

碳位δHδC 1 138.6 27.47 (s)116.4 3 148.5 4 140.7 4a 125.4 59.85 (d, J = 8.6 Hz)130.0 5a 129.5 67.52 (dt, J = 8.4, 1.8 Hz)127.9 77.56 (dt, J = 7.8, 1.2 Hz)126.8 87.86 (dd, J = 7.8, 1.2 Hz)125.6 8a 132.6 97.65 (d, J = 9.3 Hz)123.5 107.88 (d, J = 9.2 Hz) 122.0 10a 124.9 115.45 (m)67.6 122.39 (m)67.5 1′4.92 (d, J = 7.9 Hz) 105.9 2′3.61 (m)74.8 3′3.26 (m)76.6 4′3.19 (m)70.1 5′3.04 (m)77.7 6¢3.27 (m), 3.37 (m)61.3 N-CH32.31 (s)46.1

图1 化合物1结构及主要的HMBC (H→C)相关

化合物2：黄色结晶（甲醇），易溶于甲醇，通过Q-TOF-MS得到分子离子峰为/476.153 0（[M-H]−，计算值475.035 1），推断分子式为C20H28O13。1H-NMR中H7.26 (2H, s) 提示结构中可能含有1,3,4,5-对称四取代的芳环，H3.74 (6H, s) 为苯环上的2个甲氧基信号，H5.19 (1H, d,= 1.6 Hz) 为鼠李糖端基氢质子信号，H5.09 (1H, d,= 2.4 Hz) 为芹糖端基氢质子信号，H1.09 (3H, s) 为鼠李糖上甲基质子信号。其13C-NMR（表2）显示结构包含20个碳信号，其中有11个糖上的碳原子信号C101.6, 70.2, 18.2, 72.4, 70.7, 77.2, 110.8, 74.0, 79.5, 64.1, 76.3，2个甲氧基C56.3，1个羰基C174.7，其余为苯环上碳信号C130.1, 106.8, 152.5, 136.6，其中C106.8, 152.5分别为2个碳重叠，亦进一步证实具有1,3,4,5-对称四取代的芳环，再经与文献数据[13-14]对照可鉴定苷元部分为3,5-二甲氧基-4-羟基苯甲酸。剩余11个糖碳信号依据化学位移以及苷化位移的影响，推测可能为鼠李糖与芹糖，连接方式为鼠李糖端基与苷元部分4-羟基成苷，而芹糖通过端基与鼠李糖2位相连接，再依据文献报道[13-14]中鼠李糖和芹糖数据，结合HMBC谱（图2）中相关峰(H5.19/C136.6) 得知鼠李糖连于苷元的C-4位，根据相关峰(H5.09/C77.2) 确定芹糖连于鼠李糖的C-2′位，进一步验证推测。由H5.09 (1H, d,= 2.4 Hz) 和C110.8, 76.3, 79.5, 74.0, 64.1依据文献中芹糖[15]数据，得知芹糖为α芹糖。再由H5.19 (1H, d,= 1.6 Hz)，依据文献中鼠李糖[16]数据，得知鼠李糖为α--鼠李糖。最终将化合物2鉴定为3,5-二甲氧基-4-羟基苯甲酸-4--α芹糖基-(1→2)--α--鼠李糖苷。

表2 化合物2的核磁波谱数据 (600/150 MHz, DMSO-d6)

Table 2 NMR data of compound 2 (600/150 MHz, DMSO-d6)

碳位δH δC 1 130.1 2, 67.26 (s)106.8 3, 5 152.5 4 136.6 -COOH 174.7 1′5.19 (d, J = 1.6 Hz)101.6 2′3.96 (q, J = 1.7 Hz)77.2 3′3.71 (dd, J = 3.3, 9.5 Hz)70.7 4′3.21 (t, J = 9.5 Hz)72.4 5′4.03 (dd, J = 6.2, 9.5 Hz)70.2 6′1.09 (d, J = 6.2 Hz)18.2 1′′5.09 (d, J = 2.4 Hz)110.8 2′′3.73 (m)76.3 3′′ 79.5 4′′3.62 (d, J = 9.2 Hz), 3.82 (d, J = 9.3 Hz)74.0 5′′3.31 (d, J = 11.2 Hz), 3.38 (d, J = 11.2 Hz)64.1 -OCH33.74 (s)56.3

4 讨论

本实验利用各种色谱分离技术，从小花清风藤中分离得到2个新化合物，并结合质谱、核磁共振波谱等分析手段对其化学结构进行阐明。该实验进一步丰富了小花清风藤的化学成分，对该植物化学成分的深入挖掘及其专属性成分的发现具有重要指导意义。

利益冲突 所有作者均声明不存在利益冲突

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Two new compounds from

ZHOU Qiang1, DU Wei-dong1, LI Zhi-feng1, 3, WANG Qi2, LI Yan1, FENG Yu-lin2, YANG Shi-lin2

1. Jiangxi University of Chinese Medicine, Nanchang 330006, China 2. State Key Laboratory of Innovative Drug and Efficient Energy-Saving Pharmaceutical Equipment, Nanchang 330006, China 3. Nanchang Key Laboratory of Active Ingredients of Traditional Chinese Medicine and Natural Medicine, Nanchang 330006, China

To study the chemical constituents from.Various column chromatographic techniques were used to separate and purify the chemical constituents which structures were elucidated by spectral analysis.Two compounds were isolated from, compound 1 is an alkaloid and compound 2 was a phenolic acid. And they were identified as 1-[1-hydroxy-2-(dimethylamino)ethyl]-3,4-phenanthrenediol-4--βglucoside (1), 3,5-dimethoxy-4-hydroxy- benzoicacid-4--αapinosyl-(1→2)--α--rhamnoside (2).Compounds 1 and 2 are new compounds, named as sabia alkali glycoside and sabia acid glycoside.

Colelbr.;Wall. ex Roxb.; alkaloid; phenolic acids; sabia alkali glycoside; sabia acid glycoside

R284.1

A

0253 - 2670(2022)07 - 1939 - 04

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.07.002

2021-12-17

国家重点研发计划资助项目（2019YFC1712302）；国家重点研发计划资助项目（2019YFC1712304）；国家自然科学基金资助项目（81960701）；江西省主要学科学术与技术带头人培养计划（20194BCJ22020）；南昌市优势科技创新团队（洪科字〔2018〕274号）；南昌市“双百计划”创新人才-培养类（洪科字﹝2020﹞137号）；江西中医药大学校级创新创业训练计划项目（202110412151）

周 强（1996—），男，硕士研究生，从事中药活性成分研究。Tel: 14796858706 E-mail: 14796858706@163.com

李志峰，教授，博士生导师，从事中药活性物质基础及新药研究。E-mail: wangqilizhifeng@126.com

[责任编辑 王文倩]