PCV2 对昆明母鼠产仔及其仔鼠生长状况的影响

王 欢 ，龚乾龙，唐春华 ，吴 杰，谭思敏，邓治邦 *

(1.湖南农业大学动物医学院，湖南 长沙 410128;2.长沙市望城区高塘岭街道农业农村综合服务中心，湖南 长沙 410200;3.长沙市望城区农业综合行政执法大队，湖南 长沙 410200；4.长沙市农业综合行政执法局，湖南 长沙 410013)

猪圆环病毒（PCV2）作为世界上最小的动物病毒之一，其与PMWS（断奶仔猪多系统衰竭综合症）、PDNS（猪皮炎肾病综合征）、PNP（猪增生性坏死性肺炎）、CT（新生仔猪先天性震颤）、繁殖障碍等疾病的发生密切相关[1]，严重影响了全球生猪产业的发展。该病毒不但可以通过呼吸道、消化道以及相互接触等进行水平传播，还可以通过胎盘、精液、生殖道等进行垂直传播[2]，母猪感染多引起繁殖障碍，仔猪感染则出现圆环病毒病，对其生长造成极大的影响。本试验旨在以小鼠为模型来探讨PCV2对雌鼠产仔及仔鼠生长状况的影响，为研究PCV2相关性繁殖障碍奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

猪圆环病毒（PCV2，TCID50=106/mL），由湖南农业大学病原分子生物学与免疫学实验室赠送；SPF级的昆明小鼠(6 周龄)公鼠6只、母鼠18只，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司。

1.2 方法

动物病毒接种，将购买回来的SPF 级昆明小鼠先饲养1 周，使其适应该环境，尽量降低应激反应。取4只公鼠、12只母鼠进行腹腔接种PCV2 0.2 mL作为试验组，另取2只公鼠、6只母鼠腹腔接种无菌细胞培养液0.2 mL 作为对照组。其中公鼠和母鼠均分笼饲养，且试验组和对照组分别饲养在环境条件相似的不同房间内，由不同的人员进行饲养。待接种病毒10天后(10dpi)，尾静脉采血做PCR 检测，试验组和对照组均按照1:3 的公、母鼠配比进行合笼饲养，并记下合笼时间。

待母鼠即将生产或者生产之后将每只母鼠及其所产仔鼠与其他母鼠分开，并单独饲养，记录窝产仔数、死胎数、弱仔数（个体小、毛色差、吮乳需人工辅助）、断奶数，并分别测定试验组和对照组仔鼠的初生重、7日龄重、14日龄重以及21日龄重（即断奶重），统计成活率及平均日增重。在称完21日龄重之后，每窝随机处死仔鼠3只，取脾、肺、淋巴结做PCR 检测，确定PCV2 的存在。

母鼠所产仔数及仔鼠平均日增重，应用统计学方法分析试验组与对照组的显著性差异。

2 结果

2.1 PCV2 检测结果

16只繁殖小鼠（公 4只、母 12只）在接种病毒后10天，尾静脉血PCR 检测结果均为PCV2 阳性，而对照组繁殖鼠为阴性。

2.2 产仔数及健康状况

在每只母鼠产仔的当天统计其产仔情况，试验组11只母鼠、对照组6只，其产仔数、死胎数和弱仔数统计，详见表1。

表1 产仔数及健康状况

由上表可以得出，试验组共产仔106只，死胎11只，弱仔42只，死胎率为10.38%，弱仔率为39.62%；对照组共产仔 64只，死胎 1只，弱仔4只，死胎率为1.56%，弱仔率为6.25%。根据非配对设计两样本平均数的差异显著性检验[3]，产仔数的t1=0.743＜t0.05（df=15）=2.131，即P＞0.05，表明两样本平均数（即平均产仔数）无显著差异；试验天数的t2=0.969＜t0.05（df=15）=2.131，即P＞0.05，表明两样本平均数（即试验组和对照组的试验天数）无显著差异。根据两个样本百分数差异显著性检验[3]得出，死胎率的 1.96＜u1=2.17＜2.58，即 0.01＜p＜0.05，表明两样本百分数（即死胎率）差异显著；而弱仔率的u2=4.75＞2.58，即 P＜0.01，表明两样本百分数（即弱仔率）存在极显著差异。

2.3 PCV2 对新生仔鼠生长的影响

2.3.1 对10 窝试验组和6 窝对照组仔鼠的断奶前成活数进行统计，详见表2。

表2 新生小鼠成活数

由上表可以得出，试验组产活仔数95只，断奶数79只，成活率为83.2%，对照组产活仔数63只，断奶数62只，成活率为98.4%。根据两个样本百分数差异显著性检验[3]，成活率的 u=2.94＞2.58，即 P＜0.01，表明试验组和对照组的成活率存在极显著差异。

2.3.2 每只仔鼠以上午喂食前称重统计体重，并计算每窝仔鼠的平均重量和各组的总平均重，统计数据详见表3。

表3 试验组与对照组仔鼠的窝均重

经计算，试验组的平均初生重为1.24g±0.21、平均 7日龄重为 3.45g±0.42、平均 14日龄重为5.90g±0.86、平均断奶重为9.71g±1.28，而对照组的分 别 为 1.46g ±0.20、4.61g ±0.37、7.28g ±0.24、12.61g±0.63。根据非配对设计两样本平均数差异显著性检验[3]，得出初生重的t1=3.75＞t0.0（1df=∞）=2.576，即P＜0.01，表明试验组和对照组的初生重存在极显著差异；7日龄重的 t2=13.571＞t0.01（df=∞）=2.576，即 P＜0.01，表明试验组和对照组的7日龄重差异极显著；14日龄重的t3=8.881＞t0.0（1df=∞）=2.576，即P＜0.01，表明试验组和对照组的14日龄重存在极显著差异；21日龄重的t4=12.174＞t0.0（1df=∞）=2.576，即P＜0.01，表明试验组和对照组的21日龄重存在极显著差异。

3 讨论

PCV2 引起的猪圆环病毒相关性繁殖障碍病是引起母猪发生繁殖障碍疾病的一种，这已被国内外的学者所认可。加拿大的Keith H.West 等人[4]用PCR和IHC 从一个发生妊娠后期发生流产和产木乃伊胎的猪场内发生流产的母猪和仔猪中检测出PCV2；美国爱荷华州立大学的Charles S.Johnson 等人[5]，分别给怀孕86天、92天、93天的三头母猪子宫肌内接种PCV2 发现，其所产的37 头仔猪中的24 头是正常的，其他的表现为木乃伊胎、死胎和弱仔；Kyoung-Jin Yoon 等人[6]通过用超声波诊断术作指导，对怀孕中期和晚期的各7 头母猪进行子宫内接种PCV2，试验结果发现，除了几头母猪由于感染链球菌而在接种病毒后不久就发生流产外，其他的母猪均在预产期产下死胎，且在妊娠中期接种病毒的母猪所产死胎数明显高于在妊娠晚期接种病毒的母猪所产的死胎数。以上数据均表明，PCV2 可以导致母猪发生繁殖功能障碍。

本试验通过给SPF 母鼠接种PCV2 10天后，与SPF 公鼠进行合笼饲养，待母鼠生产后统计每窝产仔率、死胎率和弱仔率发现，虽然接种了PCV2 的母鼠平均产仔数与对照组无显著差异，但是其死胎率和弱仔率都明显高于对照组，数据表明PCV2 可以引起母鼠发生繁殖障碍。该结果与加拿大的Keith H.West[4]、美国爱荷华州立大学的Charles S.Johnson[5]和Kyoung-Jin Yoon[6]等人的研究结果基本一致。

Steven R.Bolin 等人[7]给23 头经剖腹产且没有喂初乳的仔猪肌肉接种低剂量的PCV2，发现在接种2周后这些仔猪的平均日增重明显低于对照组。由此可见，PCV2 对新生仔猪的影响十分明显，不仅使其断奶成活率降低，还使其日增重降低，浪费饲料。

本试验通过对10 窝试验组仔鼠和6 窝对照组仔鼠的奶前成活数进行统计，发现试验组仔鼠的成活率低于对照组仔鼠的成活率。通过对初生、7日龄、14日龄、21日龄仔鼠称重计算平均日增重，发现试验组平均日增重明显低于对照组。由此可见，PCV2 对新生小鼠的生长影响明显，不仅使其断奶成活率降低，且影响其生长速度。该结果与Steven R.Bolin 等人[7]的研究结论一致。

4 结论

本试验旨在以小鼠为模型来探讨PCV2 对雌鼠产仔及仔鼠生长状况的影响，试验结果显示接种并感染PCV2 的雌鼠产仔死胎率和弱仔率都明显高于PCV2 阴性的雌鼠，仔鼠成活率和平均日增重都明显低于PCV2 阴性雌鼠所产的仔鼠，该研究结果说明，PCV2 可引起母鼠发生繁殖障碍，并且对新生小鼠的生长影响明显，不仅使其断奶成活率降低，且影响其生长速度。本试验可为动物感染PCV2后引起不同程度繁殖功能障碍的研究提供有力参考。