泽泻对MSG大鼠IL-6、TNF-α含量和基因表达的影响

黄春丽 冯光维 余跃生 邓莹

【摘 要】 目的：研究泽泻对MSG大鼠炎症相关因子IL-6、TNF-α含量及基因表达的影响。方法：使用SD大鼠新生乳鼠皮下注射L-谷氨酸钠，同时高脂饲料喂养制备MSG大鼠模型，将成模的48只大鼠随机分为模型组、非诺贝特组、诺格列酮组和泽泻剂量组，另选8只空白大鼠作为正常对照组。给药8周后，检测血清中IL-6、TNF-α含量并用RT-PCR法检测肝脏中IL-6、TNF-α mRNA相对表达。结果：与模型组大鼠相比，泽泻高、中剂量组血清中IL-6、TNF-α含量显著下降（P<0.05，P<0.01），肝脏组织中IL-6、TNF-α mRNA相对表达显著下降（P<0.05，P<0.01）。 结论：泽泻具有一定抗炎作用，其作用机制可能与抑制炎症相关因子IL-6和TNF-α含量和基因表达有关。

【关键词】 泽泻;糖尿病;MSG大鼠;炎症因子

【中图分类号】R285.5   【文献标志码】 A    【文章编号】1007-8517（2022）03-0017-04

Effect of Alismatis Rhizoma on IL-6， TNF-α Content and Gene Expression in MSG Rats

HUANG Chunli FENG Guangwei YU Yaosheng DENG Ying

Qiannan Medical College For Nationalities， Duyun 558013， China

Abstract：Objective To study the effect of Alismatis Rhizoma on IL-6， TNF-α content and gene expression in MSG rats. Methods The rats were injected with L-glutamine sodium under the skin of SD rats and fed with high fat feed to prepare the MSG rats model. 48 rats were randomly divided into model group， fenofibrate group， noglitazone group and Alismatis Rhizoma dose group， and another 8 blank rats were selected as normal control group.Results Compared with the model group， the contents of IL-6 and TNF-α in serum and the relative expression of IL-6 and TNF-α mRNA in liver tissue of Alismatis Rhizoma high and medium dose groups were significantly decreased （P<0.05， P<0.01 ）.Conclusion Alisma Rhizoma has a certain anti-inflammatory effect， and its mechanism may be related to the inhibition of IL-6 and TNF-α content and gene expression.

Key words：Alismatis Rhizoma; Diabetes Mellitus; MSG Rats; Inflammatory Factors

泽泻为泽泻科植物泽泻Alisma orientale（Sam）Juzep 的干燥块茎，始载于《神农本草经》，列为上品，性寒，味甘，味淡，归膀胱经、肾经，具有利水渗湿泻热、化浊降脂的功效，临床常用于治疗小便不利、水肿涨满、痰饮眩晕、热淋涩痛等病癥[1]。现代研究[2-3]发现，泽泻中含有多种化学成分，主要以三萜类和倍半萜类为主，有利尿、降血脂、降血糖、抗炎、抗肿瘤等多种药理作用。目前对泽泻的研究更多集中在利尿及调血脂方向，近年来也有学者[4-5]研究了对泽泻的抗炎及免疫调节作用，但针对泽泻干预糖尿病相关炎症的研究较少，为此本实验拟通过高糖高脂饮食配合腹腔注射谷氨酸钠复制MSG 肥胖大鼠模型，给予泽泻醇提物治疗后，观察MSG肥胖大鼠血清及肝脏中炎症相关因子表达，为泽泻治疗糖尿病提供更多理论依据。

1 材料与仪器

1.1 动物 SD孕鼠，体重（300～400 g），由长沙市天勤生物技术有限公司提供，动物合格证编号：SCXK（湘 ）2014—0011。实验前 1周饲养于黔南民族医学高等专科学校实验动物中心，自由饮食，温度 18～22 ℃。

1.2 药品 泽泻（黔南州鼎鑫生物科技有限公司，批号：180431）;非诺贝特（江苏瑞年前进制药有限公司，批号：1803241）;罗格列酮（成都瑞恒有限公司，批号：190512）。

1.3 试剂与仪器 白介素-6（IL-6）试剂盒（批号：L141118510），肿瘤坏死因子-α（TNF-α）试剂盒（批号：L141118514），均由Uscn Life science Inc公司提供。Trizol试剂（Servicebio公司，批号：G3013）;HyPure TMMolecular Biology Grade Water（HyClone公司，批号：SH30538.02）;ServicebioRT First Strand cDNA Synthesis Kit（Servicebio公司，批号：G3330）;2×SYBR  Green qPCR Master Mix（High ROX）（Servicebio公司，批号：G3322）;引物合成（上海生工生物工程股份有限公司合成）;D3024R台式高速冷冻型微量离心机（DragonLab公司）;PC-1000 PCR逆转录仪（PERKIN ELMER公司）;CFX96型Real-Time PCR仪（Bio-Red公司）;SW-CJ-1FD超净工作台（苏净安泰公司）;Epoch酶标检测仪（BioTeK公司）。见表1。

2 方法

2.1 泽泻醇提物的制备 先将泽泻药材粉粹成粗粉，取粗粉1 kg加80%乙醇回流提取3次，每次2 h，减压回收溶剂得泽泻醇提取物。

2.2 模型建立及分组 SD大鼠新生乳鼠从第2天开始皮下注射L-谷氨酸钠，剂量为4 g·kg-1·d-1连续注射7 d，正常对照组给予等量生理盐水。MSG组给予高脂饲料喂养，正常对照组普通饲料，8周后眼眶采血检测空腹血糖及血脂变化，以空腹血糖及血脂水平显著高于正常组为造模成功标准。将符合模型标准的48只大鼠，按随机数字表法分为6组，分别为模型组、罗格列酮5 mg/kg组、非洛贝特100 mg/kg组、泽泻4 g生药/kg组、泽泻2 g生药/kg组及泽泻1 g生药/kg组，另取8只空白大鼠作为正常对照组。各组每日灌胃相应药物，连续 8周，给药期间自由进食，饮水。

2.3 标本采集 给药8周后，末次给药前禁食12 h，给药1 h后，3.5%水合氯醛腹腔注射麻醉，腹主动脉采血，3500 r·min-1，离心15 min，分离血清，分装冻存备用;迅速摘除肝脏、脾脏与胰腺组织剥离周围脂肪组织，称重后液氮冻存。

2.4 指标检测

2.4.1 脏器系数的计算 将剖取的脾脏、胰腺组织，用生理盐水冲洗，滤纸吸干水分后，称重，计算脏器系数。脏器系数=脏器重量（mg）/大鼠体重（g）×100%

2.4.2 血清中IL-6、TNF-α含量检测 采用免疫荧光法检测血清中IL-2，TNF-α含量，具体步骤严格按照试剂盒要求进行。

2.4.3 肝脏组织IL-6 mRNA，TNF-α mRNA的检测 取肝脏研磨后，加入TRIzol按说明提取RNA，按照试剂盒说明书进行反转录，进行PR-PCR实验。

2.5 统计学方法 实验结果用 SPSS18.0统计软件进行分析，结果以均数加减标准差（x±s）表示，组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较若方差齐采用 LSD法 ，若方差不齐采用 Dunnetts T3法，P<0.05表示差异具有统计学意义。

3 结果

3.1 泽泻对MSG大鼠脾脏及胰腺系数的影响 给药8周后，与正常对照组相比，模型对照组脾脏系数显著降低（P<0.01），胰腺系数显著升高（P<0.01）;与模型对照组相比，罗格利酮组胰腺系数显著降低（P<0.01），非诺贝特组脾脏系数显著升高（P<0.01）;泽泻高、中剂量组脾脏系数显著升高（P<0.01，P<0.05），泽泻高、中剂量组胰腺系数显著降低（P<0.01，P<0.05）。泽泻低剂量组对脾脏及胰腺系数没有明显影响。见表2。

3.2 泽泻对MSG大鼠血清中IL-6、TNF-α含量的影响 给药8周后，与正常对照组相比，模型对照组血清IL-6和TNF-α含量显著升高（P<0.01）;与模型对照组相比，罗格利酮、非诺贝特组血清IL-6和TNF-α含量显著降低（P<0.01，P<0.05）;泽泻高、中剂量组肝脏血清IL-6和TNF-α含量显著降低（P<0.01，P<0.05）。泽泻低剂量组对血清IL-6和TNF-α含量没有明显影响。见表3。

3.3 泽泻对MSG大鼠肝脏中IL-6 mRNA，TNF-α mRNA表达的影响 给药8周后，与正常对照组相比，模型对照组肝脏IL-6 mRNA和TNF-αmRNA相对含量显著升高（P<0.01）;与模型对照组相比，罗格利酮、非诺贝特组肝脏IL-6 mRNA和TNF-αmRNA相对含量显著降低（P<0.01，P<0.05）;泽泻高、中剂量组肝脏IL-6 mRNA和TNF-αmRNA相对含量显著降低（P<0.01，P<0.05）;泽泻低剂量组肝脏IL-6 mRNA和TNF-αmRNA相对含量没有明显变化。见表4。

4 讨论

2型糖尿病是一种受环境和遗传因素影响的慢性代谢性疾病，前期患者出现高血糖、高血脂等症状，近年来大量的实验及临床研究[6]发现炎症因子紊乱也是糖尿病特征之一，因此抑制2型糖尿病患者前期体内炎症反应有重要的临床意义。IL-6是一种由脂肪分泌的具有免疫活性的细胞，不仅参与能量代谢与机体炎性反应也密切相关[7]，作为研究糖尿病最突出的炎症因子之一，研究[8]表明IL-6能使胰岛β细胞受损进而引起胰岛素抵抗，最终使血糖水平升高，故IL-6的水平可作为判断糖尿病的重要指标。TNF-α也是一种由脂肪分泌的促炎因子，TNF-α能作用于脂肪及周围组引起胰岛素抵抗，还可以刺激其他炎症因子如IL-6的分泌加重胰岛素抵抗。本实验结果显示采用MSG加高脂饲料复制的MSG肥胖大鼠血清及肝脏中IL-6和TNF-α含量及基因表达都显著升高，经过泽泻醇提物干预后各组大鼠血清中IL-6和TNF-α含量下降，肝脏中IL-6和TNF-αmRNA相对表达下降，说明泽泻具有一定抗炎作用，其作用机制与抑制炎症相关因子IL-6和TNF-α的含量及基因表达密切相关。

参考文献

[1]张慧娟，龚苏晓，许浚，等.泽泻药材的研究进展及其质量标志物的预测分析[J].中草药，2019，50（19）：4741-4751.

[2]黄锦芳，李小艳，黄小强，等. 基于均匀设计的泽泻体外抗草酸钙结晶的有效组分配伍研究[J]. 中草药，2016，47（23）：4160-4165.

[3]JIA X K，HUANG J F，HUANG X Q， et al. Alismatis Rhizoma Triterpenes Alleviate High-Fat Diet-Induced Insulin Resistance in Skeletal Muscle of Mice[J]. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine，2021（5）：1-15.

[4]謝治深，黄小虹，袁永，等. 泽泻抑制脂多糖诱导的RAW264.7炎症及作用机制[J]. 时珍国医国药，2020，31（7）：1586-1590.

[5]林娜，黄锦芳，张雪，等.泽泻总三萜的抗炎活性研究[J]. 福建中医药，2018，49（4）：68-69，71.

[6]魏伊秋，李满，余佳.慢性炎症与胰岛素抵抗机制关系的研究进展[J].临床与病理杂志，2019，39（3）：640-645.

[7]JAGANATHAN R， RAVINDRAN R， DHANASEKARAN S. Emerging role of adipocytokines in type 2 diabetes as mediators of insulin resistance and cardiovascular disease[ J]. Can J Diabetes， 2018， 42（4）： 446-456.

[8]姜晓燕，程莹，游志清，等.青蒿素及其衍生物对糖尿病小鼠血糖及炎症因子的影响[J/OL].重庆医科大学学报：1-6[2021-04-16].

（收稿日期：2021-06-12 编辑：陶希睿）