升气血口服液质量标准提升研究

摘要：目的：对升气血口服液现行标准进行提升，对黄芪含量测定方法进行改进。方法：建立高效液相色谱法测定黄芪中黄芪甲苷含量测定方法。结果：黄芪含量测定方法系统适用性好，阴性无干扰，重复性RSD为2.5%，线性相关系数r≥0.995，平均回收率为92%。结论：新建立的黄芪含量测定方法专属性强，方法准确，重复性好，能够有效控制升气血口服液的质量。

关键词：中成药;黄芪甲苷;质量控制;升气血口服液;高效液相色谱法

【中图分类号】R27             【文献标识码】A             【文章编号】2107-2306（2022）1--02

升气血口服液是由党参、黄芪、当归、山茱萸、白术等13味药组成的成方制剂，收录于《国家食品药品监督管理总局国家药品标准》（WS-5653（B-0653）-2014Z），具有补气养血功效。用于气血两虚所致的体倦乏力，神疲懒言，食欲不振，面色萎黄等症。现行质量标准中黄芪含量检测方法采用薄层扫描法，此方法受展开条件、薄层斑点状态、实验温湿度条件等多种因素影响，实验数据重现性差，不能对黄芪含量进行有效控制。为了提高检验数据的准确性，更好的控制产品质量，故对黄芪含量测定方法进行研究，将检测方法改为液相色谱法。

1  实验准备

1.1试剂与试药

1.2对照品

1.3供试品

1.4分析仪器

2  提取方法的选择

2.1 精密量取本品10ml，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次25ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次30ml，弃去氨液，再用正丁醇饱和的水20ml洗涤，取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

2.2 精密量取本品10mL，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次25ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次30ml，弃去氨液，再用正丁醇饱和的水20ml洗涤，取正丁醇液，蒸干，残渣加水10ml使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱（内径为1.5cm，柱高为12cm），以水50ml洗脱，弃去水液，再用40%乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

2.3 精密量取本品10ml，用水饱和的正丁醇振摇提取4 次，每次25ml，合并正丁醇液，用2%氢氧化钠溶液充分洗涤2次，每次30ml，弃去碱液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

3  流动相的选择

3.1 乙腈-水（32：68）

3.2 乙腈-水（35：65）

3.3 甲醇-水（82：18）

4  确定方法

黄芪： 照高效液相色谱法（通则0512）测定。

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-水（32：68）为流动相;蒸发光散射检测器检测。理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4000。

对照品溶液的制备取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含60ug的溶液，即得。

供试品溶液的制备  精密量取本品10ml，用水饱和的正丁醇振摇提取4 次，每次25ml，合并正丁醇液，用2%氢氧化钠溶液充分洗涤2次，每次30ml，弃去碱液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液10μl、30μl与供试品溶液5-10μl，注入液相色谱仪，用外标两点法对数方程计算，即得。

本品每1ml含黄芪以黄芪甲苷（C41H68O14）计，不得少于30µg。

5  方法验证内容

5.1 验证范围和可接受限度

5.2  验证内容

5.2.1 系统适用性及专属性

照黄芪测定项下色谱条件，精密量取流动相、空白溶剂、阴性样品、对照品溶液各10μl、供试品溶液，注入液相色谱仪，对照品溶液连续进5针，其它溶液各进1针，记录色谱图。空白溶剂及阴性样应无干扰，供试品溶液在与对照品溶液对应保留时间上有相同色谱峰。对照品溶液连续进6针应满足系统适用性的要求。

空白溶剂及阴性样无干扰，供试品溶液在与对照品溶液对应保留时间上有相同色谱峰。对照品溶液连续进5针应满足系统适用性的要求。

5.2.2 重复性

照黄芪测定项下色谱条件，取同一供试品，分别制成6份供试品溶液，各取10µl注入液相色谱仪，测定并计算含量。其含量值的RSD≤4.0%。

5.2.3 溶液的稳定性

照黄芪测定项下色谱条件，取对照品溶液、供试品溶液各一份，分别于0h、4h、8h、12h进针10µl，计算回收率（回收率=各时间点峰面积/0h峰面积×100%）。对照品溶液、供试品溶液的回收率均应在90%-110%之间。

5.2.4 线性

精密称取黄芪甲苷对照品10mg置10ml容量瓶中，甲醇溶解并稀释至刻度作为对照品储备液;分别精密量取上述溶液1.25ml、2.5ml、5ml、7.5ml置10ml量瓶中（最大浓度值0.25mg/ml为对照品原液），加甲醇制成每1ml含黄芪甲苷 0.025mg、0.05mg、0.10mg、0.15mg、0.20mg的系列标液;照黄芪测定项下色谱条件，吸取上述系列标液各10μl注入液相色谱仪，以测得的峰面积对数为纵坐标，标液浓度对数为横坐标绘制标准曲线，观察是否成线性，相关系数r≥0.995。

5.2.5 准确度

采用加样回收法。取已知含量的供试品，分别添加对照品，按黄芪项下色谱条件测定，计算其回收率应为85%-110%，平均回收率应为90%～108%，相对标准偏差应≤4.0%。

5.2.6 耐用性

按黄芪项下色谱条件测定，选择两款不同品牌C18柱，分别按照以下条件试验，对照品溶液、样品溶液各制备1份，对照品溶液分别进10µl、30µl;样品进10µl。计算不同实验条件下的含量，RSD≦4.0%。

6  总结

本研究对升气血口服液质量标准黄芪含量进行了提升，建立的高效液相色谱法含量量测定方法专属性强，准确度高，能有效对升气血口服液的质量进行控制。

参考文献：

[1]《国家食品药品监督管理总局国家药品标准》（WS-5653（B-0653）-2014Z）升气血口服液。2014国药标字ZB-0614号。

[2]国家药典会，中华人民共和国药典：2020年版四部。北京：中国医药科技出版社，2020.5

[3]國家药典会，中华人民共和国药典：2020年版一部。北京：中国医药科技出版社，2020.5

​作者简介：王艳萍，女，1973年3月，籍贯：吉林省通化市，本科，职称：高级工程师，研究方向：药品质量控制。