高效液相色谱法测定头孢噻肟钠舒巴坦钠成品输液的含量

洪丽帆 黄红静 刘永和 刘丽燕 郑晓阳

头孢噻肟钠是临床上广泛应用的广谱半合成第三代头孢菌素，对革兰阳性和阴性菌有较强的抑制作用。舒巴坦钠作为不可逆的β-内酰胺酶抑制剂，可显著增强β-内酰胺类抗生素对细菌的抗菌活性，并可有效地防止耐药性的产生，常与头孢菌素类合用。我们选取的注射用头孢噻肟钠舒巴坦钠由2种药物组成，已由湘北威尔曼制药有限公司成功研发[1]，该药品在本院临床使用量大、药品说明书又没有标注稳定性，采用高效液相色谱法（HPLC）测定头孢噻肟钠舒巴坦钠成品输液的含量[2]。本院于2018年10月成立静脉用药集中调配中心（PIVAS），保证了高质量静脉输液的提供[3]。成品输液是PIVAS的最后一个环节，放置的时间和贮存条件会直接影响成品输液的质量。尤其是抗菌药物配置后的成品输液，更应注重其的稳定性[4]，以保证临床用药的安全性、有效性。通过PIVAS配置的头孢噻肟钠舒巴坦钠成品输液含量测定试验，探讨成品输液稳定性研究方法和质量控制标准。现将结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器 色谱仪型号：戴安U-3000高效液相色谱仪；天平：AB204-N型电子天平，XPR10微量分析天平。

1.1.2 试药 头孢噻肟对照品（批号130483-200303，纯度89.3%）和舒巴坦对照品（批号130430-200305，纯度89.2%）购于中国食品药品检定研究院；头孢噻肟钠舒巴坦钠样品（湘北威尔曼制药有限公司，批号200506，含头孢噻肟为500 mg，舒巴坦为250 mg）；0.9%氯化钠注射液（NS）（四川科伦药业股份有限公司，批号W220122201，100 ml/瓶）；5%葡萄糖注射液（GS）（四川科伦药业股份有限公司，批号C21010512，100ml/瓶）；10% GS（四川科伦药业股份有限公司，批号S20032703，100 ml/瓶）；5%葡萄糖氯化钠注射液（GNS）（四川科伦药业股份有限公司，批号H20021202，100 ml/瓶）。

1.2 方法

1.2.1 系统适应性条件 （Agilent Eclipse plus）C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；柱温：30 ℃；流动相：乙腈－2.5 mmol/L四丁基氢氧化铵（20∶80）；检测时长30 min；波长230 nm；流速1 ml/min；进样量10 μl。

1.2.2 溶液的配制

1.2.2.1 对照品溶液 精密称取头孢噻肟对照品5.434 mg及舒巴坦5.156 mg置10 ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

1.2.2.2 供试品溶液 取供试品注射用头孢噻肟钠舒巴坦钠0.75 g分别溶于5%GNS、0.9%NS、5%GS、10%GS，并定容至100 ml容量瓶，精密量取1 ml置10 ml容量瓶，分别加各溶剂稀释至刻度，作为供试品溶液。

1.2.3 阴性样品的测试 取5%GNS、0.9%NS、5%GS、10%GS溶剂用HPLC进行阴性样品测定。

1.2.4 方法学验证

1.2.4.1 线性关系的考察 分别精密吸取同一对照品溶液（见对照品溶液的配置）0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 ml置10 ml的容量瓶，加流动相稀释至刻度。摇匀滤过，取10 μl注入液相色谱仪中，测定峰面积。以对照品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为Y头孢噻肟钠=0.201 1X，R=0.999 1（n=5），Y舒巴坦钠=0.018 2X，R=0.999 1（n=5），结果表明线性关系良好。

1.2.4.2 精密度试验 取同一对照品溶液（见对照品溶液的配置），重复进样6次，10 μl/次，测定头孢噻肟及舒巴坦峰面积，其中头孢噻肟峰面积的RSD为0.2%，舒巴坦峰面积的RSD为0.5%，RSD均小于2.0%，表明本方法精密度良好。

1.2.4.3 重复性试验 取用0.9%NS溶解的供试品，按供试品溶液制备方法制备6份供试液。测定每份样品含量，测得头孢噻肟含量RSD为0.3%，舒巴坦含量RSD为0.3%，RSD均小于2.0%，表明重复性良好。

1.2.4.4 加样回收率试验 取已知头孢噻肟含量为500 mg，舒巴坦为250 mg的用0.9%NS配制的注射用头孢噻肟钠舒巴坦钠，共6份分别配置成头孢噻5 mg/ml、舒巴坦2.5 mg/ml，精密量取1 ml再分别精密加入混合对照品溶液（溶剂为流动相溶液，头孢噻肟浓度为0.527 6 mg/ml，舒巴坦浓度为0.543 2 mg/ml）2 ml置10 ml的容量瓶，用0.9%NS稀释至刻度，然后按供试品溶液制备项下的方法操作测定，记录色谱图，考察本方法的加样回收率，得到的加样回收率均较高，其中头孢噻肟平均回收率为103.5%，RSD为0.8%；舒巴坦平均回收率为98.6%，RSD为1.3%，RSD不超过2.0%。

1.3 不同温度下时间的变化对含量的影响

通过以上的方法学验证，采用HPLC测定头孢噻肟钠舒巴坦钠成品输液的含量。取供试品注射用头孢噻肟钠舒巴坦钠分别溶于5%GNS、0.9%NS、5%GS、10%GS，并定容至100 ml容量瓶，精密量取1 ml置10 ml容量瓶，分别加各溶剂稀释至刻度，作为供试品溶液，分别考察常温和3 ℃条件下放置0、2、4、8、24 h含量的变化，测定峰面积，计算相对含量。其中大于10%的有效成分被分解[5]，则认为该药品与输液不宜配伍。

2 结果

2.1 常温下时间的变化对含量的影响结果

常温下头孢噻肟与舒巴坦在各溶媒中溶解峰面积均随时间的推移而变小。见表1。

表1 头孢噻肟与舒巴坦在常温下不同时间的峰面积(%)

常温下头孢噻肟与舒巴坦在各溶媒中溶解含量均随时间的推移而变少，且除了用5%GS配制的成品输液放置24 h含量下降小于10%，5%GNS、0.9%NS、10%GS配制的放置24 h含量下降大于10%。见表2。

表2 头孢噻肟与舒巴坦在常温下不同时间的含量(%)

2.2 3 ℃下时间的变化对含量的影响结果

3 ℃下头孢噻肟与舒巴坦在各溶媒中溶解峰面积均随时间的推移而变小。见表3。

表3 头孢噻肟与舒巴坦在3 ℃下不同时间的峰面积(%)

3 ℃下头孢噻肟与舒巴坦在各溶媒中溶解含量均随时间的推移而变少，且放置24 h含量下降均小于10%。见表4。

表4 头孢噻肟与舒巴坦在3 ℃下不同时间的含量(%)

3 讨论

在阴性样品的测试中，在头孢噻肟和舒巴坦相应位置无峰出现，说明阴性样品的其他成分无干扰。故通过线性关系，精密度试验，重复性试验与加样回收率试验的验证，表明用HPLC测定头孢噻肟钠舒巴坦钠的含量，方法良好，适合测量。

根据上述试验结果可知，头孢噻肟钠舒巴坦钠成品输液采用HPLC测定，在3 ℃下时间的变化对含量的影响较小，其中5%GS的稳定性相对高；在常温下时间的变化对含量的影响较大，除了用5%GS配制的成品输液放置24 h含量下降小于10%，5%GNS、0.9%NS、10%GS配制的放置24 h含量下降均大于10%。故在常温和2～8 ℃条件下放置不同时间，在4种注射液中，5%GS与头孢噻肟钠舒巴坦钠在PIVAS环境下配置更稳定。

采用的HPLC可同时测定头孢噻肟钠舒巴坦钠两种主要成分的含量，该方法专属性强、精密度高、准确性好。根据《药品注射剂使用指南》2005版有关规定，在静脉注射液中大于10%的有效成分被分解，则认为该药品与输液不宜配伍。头孢噻肟钠舒巴坦钠在3 ℃下时间的变化对含量的影响较小，可放置至少24 h，其中5%GS的稳定性相对高[6]；在常温下时间的变化对含量的影响较大，只有5%GS可放置24 h，故配置后的成品输液适宜保存于2～8 ℃下[7]。

本实验的成品输液是在PIVAS环境下配置的，相比于普通环境下更洁净、更安全，更具准确性。HPLC检测两种主要成分含量的方法操作简便、专属性强、精密度高、准确性好，可作为头孢噻肟钠舒巴坦钠的成品输液的含量测定及有关物质测定的方法，方法准确可靠。