子痫前期并发幽门螺旋杆菌感染患者血清miR-31-5p表达与不良妊娠结局的相关性研究

于 艳，白青山，才蔚涛（.唐山市妇幼保健院，河北唐山 063000；.中国人民解放军联勤保障部队第98 医院，河北唐山 063000）

子痫前期（preeclampsia，PE）是妊娠期常见的特发性疾病之一，患者常伴有血压升高、蛋白尿等临床特征，严重影响着母婴健康[1-2]。幽门螺旋杆菌（Helicobacter pylori，Hp）是一种常见的消化道致病菌，其可通过炎症反应、脂代谢紊乱等引发的血管内皮功能障碍促进PE 发病和进展[3-4]。对于PE并发Hp 感染患者，应重点关注，以防其发生不良妊娠事件。早期预判PE 患者妊娠结局，并及时给予治疗，可有效降低不良妊娠事件的发生率。微小核糖核酸-31-5p（microRNA-31-5p，miR-31-5p）已被证实可下调内皮一氧化氮合酶诱发血管内皮功能障碍，促使PE 发病和进展[5]，或可用于预判PE 患者妊娠结局。目前，鲜有研究分析其与PE 不良妊娠结局的关系，因此，本研究主要分析miR-31-5p 与PE 并发Hp 感染患者不良妊娠结局的关系，以期为PE 并发Hp 感染患者不良妊娠结局的预防和治疗提供帮助。

1 材料与方法

1.1 研究对象选取2019年1月～2020年5月在唐山市妇幼保健院就诊的204 例PE 并发Hp 感染患者作为研究对象，患者年龄24～40（31.87±3.68）岁；孕前体质量指数（body mass index，BMI）为25.69±2.42kg/m2；辅助生殖27 例；发病孕周21～27（24.50±1.47）周；确诊时的收缩压（systolic blood pressure，SBP）为154.06±11.80mmHg，舒张压（diastolic blood pressure，DBP）为99.90±7.50mmHg；24 h 尿蛋白为2.44±0.54g/24 h；分娩孕周为32～40（36.07±2.30）周；剖宫产187 例。根据13C-尿素呼气试验检查结果确定是否存在Hp 感染，PE 诊断参照《妇产科学（第9 版）》[6]中相关标准。纳入标准：①符合PE 诊断标准；②首次妊娠，单胎；③发病于妊娠28 周前，并接受降压治疗。排除标准：①伴血液系统疾病、冠心病或恶性肿瘤等；②严重肝肾功能异常；③有高血压或子痫前期家族病史；④不配合完成研究所需检查；⑤不签署知情同意书。本研究符合《世界医学协会赫尔辛基宣言》，所有受试者知情同意并签署了知情同意书，经唐山市妇幼保健院医学伦理委员会批准（批号：2019-015-001）。

1.2 仪器与试剂 TDL5M 型低温离心机（杭州川一实验仪器有限公司），752 型紫外分光光度计（上海光学仪器五厂有限公司），9700 型PCR 仪（美国ABI 公司），miR-31-5p 和内参U6 引物（上海吉玛制药技术有限公司），RNA 提取试剂盒和反转录试剂盒（日本TAKARA 公司）。

1.3 方法

1.3.1 miR-31-5p表达量检测：抽取PE 并发Hp 感染患者确诊时（T0）、妊娠28 周第1 天（T1）和妊娠30 周第1 天（T2）的外周静脉血10 ml，4℃下离心，提取血清，将其冻存在-80℃冰箱中。用实时荧光定量PCR 法[7]检测血清中miR-31-5p表达量。步骤如下：①解冻血清，用RNA 提取试剂盒提取血清中总RNA；②用紫外分光光度计检测RNA 纯度，本实验中RNA 的吸光度值比（A260nm/A280nm）在1.9～2.0 之间；③用反转录试剂盒将RNA反转录为cDNA；④用PCR 仪扩增cDNA，扩增条件为95 ℃ 10 min，95 ℃ 15 s，60 ℃ 30 s，72 ℃30 s，40 个循环。miR-31-5p 上游序列：5’-ACACT CCAGCTGGGAGGCAAGATGCTGGC-3’，下游序列：5’-TGTGGTCGTGGAGTCG-3’；内参U6 上游序列：5’-CTCGCTTCGGCAGCACA-3’，下游序列：5’-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3’。用2-△△Ct计算miR-31-5p 的相对表达量。

1.3.2 随访：本研究中所有受试者均随访至生产，记录妊娠结局。参照文献[8]，本研究将随访过程中出现羊水污染大于Ⅲ度（羊水呈棕黄色，稠厚）、胎儿宫内窘迫、胎儿死亡、子痫、HELLP 综合征、肺水肿或心衰定义为妊娠结局不良。

1.4 统计学分析 用R（3.6.3 版）软件（https://cran.r-project.org/）进行统计分析。正态分布的计量资料用均数±标准差（±s）表示，两组间比较用独立样本t检验；重复测量数据用重复测量方差分析。计数资料用n（%）表示，组间比较用χ2检验。用受试者工作特征（ROC）曲线评价miR-31-5p 预判PE并发Hp 感染患者妊娠结局的效能。用Logistic 回归分析miR-31-5p 与PE 并发Hp 感染患者不良妊娠结局的关系。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不良妊娠组和正常妊娠组临床基线资料比较 见表1。204 例PE 并发Hp 感染患者中有121 例妊娠结局不良，其中羊水污染大于Ⅲ度58 例，胎儿宫内窘迫34 例，胎儿死亡4 例，子痫9 例，HELLP综合征6 例，肺水肿4 例，心衰6 例。根据妊娠结局将204 例PE 并发Hp 感染患者分为不良妊娠组（n=121）和正常妊娠组（n=83）。不良妊娠组和正常妊娠组的年龄、BMI，辅助生殖占比和发病孕周差异均无统计学意义（均P＞0.05）。不良妊娠组的SBP，DBP，24 h 尿蛋白和剖宫产率均高于正常妊娠组，分娩孕周低于正常妊娠组，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。

表1 两组临床基线资料比较[±s，n（%）]

表1 两组临床基线资料比较[±s，n（%）]

项目不良妊娠组（n=121）正常妊娠组（n=83）t/χ2P年龄（岁）32.00±3.5831.69±3.840.5960.552 BMI（kg/m2）25.58±2.2625.84±2.640.7310.465辅助生殖18（14.88）9（10.84）0.6790.404发病孕周（周）24.55±1.3624.42±1.630.6070.545 SBP（mmHg）155.64±11.89151.75±11.342.3440.020 DBP（mmHg）101.25±6.1697.93±8.792.9770.003 24 h 尿蛋白（g/24 h）2.69±0.522.06±0.2911.1530.000分娩孕周（周）34.79±2.0637.94±0.9714.6310.000剖宫产104（85.95）54（65.06）12.3020.000

2.2 不良妊娠组和正常妊娠组的血清miR-31-5p表达量比较 见表2。不良妊娠组和正常妊娠组的血清miR-31-5p 相对表达量差异有统计学意义（F=199.571，P=0.000），不良妊娠组的血清T0-miR-31-5p，T1-miR-31-5p 和T2-miR-31-5p 相对表达量均高于正常妊娠组，差异有统计学意义（均P＜0.05）；T0-miR-31-5p，T1-miR-31-5p 和T2-miR-31-5p 相对表达量差异有统计学意义（F=66.074，P=0.000），两组的血清miR-31-5p 相对表达量随时间进展均降低，差异有统计学意义（P＜0.05）；妊娠结局和时间无交互效应（F=2.372，P=0.095）。

表2 两组的血清miR-31-5p 相对表达量比较（±s）

表2 两组的血清miR-31-5p 相对表达量比较（±s）

类 别不良妊娠组（n=121）正常妊娠组（n=83）tP T02.42±0.392.11±0.326.0250.000 T12.20±0.421.76±0.338.0800.000 T22.10±0.251.69±0.2012.657 0.000

2.3 血清miR-31-5p 预判PE 并发Hp 感染患者妊娠结局的价值 见表3 和图1。T2-miR-31-5p 预判PE 并发Hp 感染患者妊娠结局的ROC 曲线下面积高于T0-miR-31-5p 和T1-miR-31-5p，差异均有统计学意义（Z=4.957，P=0.000；Z=3.009，P=0.003）。T0-miR-31-5p 预判PE 并发Hp 感染患者妊娠结局的ROC 曲线下面积与T1-miR-31-5p 相当，差异无统计学意义（Z=1.549，P=0.212）。

表3 血清miR-31-5p 预判PE 并发Hp 感染患者妊娠结局的价值

图1 血清miR-31-5p 预判PE 并发Hp 感染患者妊娠结局的ROC 曲线

2.4 PE并发Hp感染患者妊娠结局的风险因素分析 将PE 并发Hp 感染患者妊娠结局作为因变量，将SBP，DBP，24 h 尿蛋白、剖宫产、分娩孕周和T2-miR-31-5p 作为自变量（纳入标准为单因素分析的P＜0.10），变量赋值见表4。纳入多因素Logistic回归分析，结果显示24 h 尿蛋白高、剖宫产和T2-miR-31-5p 高是PE 并发Hp 感染患者妊娠结局不良的独立危险因素（P＜0.05），分娩孕周长是PE 并发Hp 感染患者妊娠结局不良的独立保护因素（P＜0.05），见表5。

表4 变量赋值

表5 PE 并发Hp 感染患者妊娠结局的风险因素分析

3 讨论

PE 可引发患者子痫、HELLP 综合征、肺水肿或心衰等，并可导致胎儿宫内窘迫、胎儿死亡等。目前，尚无有效药物治疗PE，唯一治愈PE 的方法是终止妊娠。终止妊娠过早会增加妊娠结局不良发生率，过度延长妊娠时间不仅会导致各种并发症，还可能影响妊娠结局[8]。早期预判PE 并发Hp 感染患者妊娠结局对于治疗方案的制定有着重要意义。miR-31-5p 已被证实与PE 发病和进展有关[5,9-11]，本研究主要分析血清miR-31-5p 与PE 并发Hp 感染患者妊娠结局的关系，以期为其后续管理提供帮助。

本研究结果显示不良妊娠组和正常妊娠组的血清miR-31-5p 相对表达量随时间进展均降低，且不良妊娠组的血清T0-miR-31-5p，T1-miR-31-5p 和T2-miR-31-5p 相对表达量均高于正常妊娠组，上述结果提示miR-31-5p 与PE 并发Hp 感染患者妊娠结局有关，是其潜在的生物标志物。本研究构建了miR-31-5p 判断PE 并发Hp 感染患者妊娠结局的ROC 曲线，结果显示T2-miR-31-5p 预判PE 并发Hp 感染患者妊娠结局的ROC 曲线下面积为0.907，高于T0-miR-31-5p 和T1-miR-31-5p，该结果提示其对PE 并发Hp 感染患者妊娠结局有一定预判价值，可辅助临床决策。

本研究分析了PE 并发Hp 感染患者妊娠结局的风险因素，结果显示T2-miR-31-5p 高是PE 并发Hp 感染患者妊娠结局不良的独立危险因素，推测其原因是miR-31-5p 可下调内皮一氧化氮合酶加重血管内皮炎症损伤，进而诱发血管内皮功能障碍[5]，此外，其还可调节滋养细胞浸润[5,9-11]，上述病理生理过程均参与了PE 的发病和进展过程，因此，miR-31-5p表达量可反映PE 并发Hp 感染患者不良妊娠结局。此外，本研究结果还显示24 h 尿蛋白高和剖宫产是PE 并发Hp 感染患者妊娠结局不良的独立危险因素，分娩孕周长是PE 并发Hp 感染患者妊娠结局不良的独立保护因素，与既往研究[12-14]报道结果一致。

综上所述，血清T2-miR-31-5p表达量高与PE并发Hp 感染患者不良妊娠结局有关，其可辅助临床医师制定PE 治疗方案。本研究尚存在一定不足，一是仅选取了孕周28 周前PE 并发Hp 感染患者作为研究对象，对于miR-31-5p 是否可用于预判孕周28 周后PE 发病的患者或未感染Hp 的PE 患者的妊娠结局尚未可知；二是本研究仅分析了PE 确诊、妊娠28 周和妊娠30 周时的miR-31-5p 与妊娠结局的关系，对于其他时点的miR-31-5p 与妊娠结局的关系还未可知；三是本研究未探究Hp 感染与PE患者血清miR-31-5p表达的关系，今后将开展研究进行分析，以弥补本研究不足；四是纳入样本量有限，分析结果可能存在一定偶然性，后续还需开展大样本、多中心研究进行验证。