PD-L1在肺腺癌中的表达及临床意义

李龙萍，邓 飞，陈 芳

（1. 贵阳市公共卫生救治中心病理科，贵州 贵阳 550004 ；2. 遵义市第一人民医院病理科，贵州 遵义563000 ；3. 遵义医科大学附属医院肿瘤研究室，贵州 遵义 563000）

肺癌在临床上较为常见。据统计，肺癌是近50 年来全球范围内发病率和致死率增长最快的恶性肿瘤。肺癌可分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌。其中非小细胞肺癌主要包括肺腺癌、大细胞肺癌和肺鳞状细胞癌（鳞癌）等。肺腺癌患者占原发性肺癌患者总数的40% 以上。肺腺癌主要起源于支气管黏膜上皮，少数起源大支气管的黏液腺，具有高度浸润和破坏性生长的特点。肺腺癌患者的临床表现无典型性及特异性，因此多数患者的病情在得到确诊时已发展至中晚期，导致其预后不佳。近年来的研究发现，肺腺癌细胞可对机体产生免疫抑制作用，抑制机体的抗肿瘤免疫机制，进而可促进肺腺癌细胞的浸润和转移[1]。程序性死亡配体-1（programmed death-ligand 1，PD-L1）是新近发现的一种重要免疫抑制分子。PD-L1 可传导抑制性信号，抑制T 淋巴细胞的功能，在肿瘤的发生、发展过程中起到重要的作用[2]。研究证实，PD-L1 在非小细胞肺癌中的表达水平可显著增高[3]。本文主要是探讨PD-L1 在肺腺癌中的表达及临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019 年6 月至2020 年6 月期间贵阳市肺科医院收治的100 例肺腺癌患者作为研究对象。其纳入标准是：病情经病理学检查得到确诊；病历资料完整；自愿参与本研究。在这些患者中，有男性63 例，女性37 例；其年龄为43 ～77 岁，平均年龄为（60.2±3.5）岁。

1.2 方法

采用免疫组织化学法检测本研究中100 例患者肺腺癌标本中PD-L1 的表达情况，具体的检测步骤是：用4%的中性福尔马林对标本进行固定，并用石蜡进行包埋，将其制成切片。将切片放入烤箱中烘烤（温度为72℃）60 min，使石蜡切片脱蜡至水。将经上述处理的标本放入湿盒内，用0.01 mol/L的磷酸盐缓冲液（PBS）进行冲洗。用酸碱度（pH）为6 的柠檬酸盐缓冲液对标本进行抗原修复，并将其在电磁炉上加热（温度为2000℃）2 min，冷却后用PBS 冲洗1 次。用3%的过氧化氢（H2O2）溶液在室温下对标本进行孵育（时间为10 min），除去其中的内源性过氧化物酶。用PBS 冲洗玻片3 次，每次冲洗5 min。在标本中滴加一抗，放入冰箱内孵育2 h，复温1 h 或在室温下放置60 min 后用PBS 连续冲洗3 次，每次冲洗5 min。在标本中滴加二抗，在15 min 内用PBS 冲洗3 次，每次冲洗5 min。用二氨基联苯胺（DAB）对标本进行显色处理，显色的时间为3 ～5 min，用蒸馏水终止显色。用苏木精对标本进行复染，将其置于苏木精溶液中浸泡21 s，用盐酸乙醇分化后进行流水返蓝处理1 ～3 min。对标本进行梯度乙醇脱水处理，采用二甲苯对标本进行透明处理后，用中性树胶封片。本研究中所用的试剂均购于福州迈新生物技术开发有限公司。结果判读标准：肿瘤细胞的细胞膜中若出现棕黄色颗粒，则表示PD-L1 呈阳性；肿瘤细胞中若有超过25%的细胞染色，则出现任何强度的染色（棕褐色、棕黄色、浅黄色）均表示PD-L1 呈阳性。

1.3 观察指标

统计本研究中100 例肺腺癌患者PD-L1 的阳性表达率。对100 例肺腺癌患者中PD-L1 呈阳性表达患者的性别、年龄、吸烟情况及肿瘤的组织学分型进行分析，总结PD-L1 的表达情况与肺腺癌组织学分型及临床病理特征之间的关系。

1.4 统计学方法

用SPSS 22.0 软件处理本研究中的数据，计数资料用% 表示，用χ² 或确切概率法检验，P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 100 例肺腺癌患者PD-L1 的阳性表达率

在100 例肺腺癌患者中，PD-L1 呈阳性表达的患者有22 例，其PD-L1 的阳性表达率为22.0%（22/100）。

2.2 PD-L1 的表达情况与肺腺癌组织学分型及临床病理特征之间的关系

在22 例PD-L1 呈阳性表达的患者中，男性患者PD-L1 的阳性表达率高于女性患者，差异有统计学意义（P＜0.05）；吸烟患者PD-L1 的阳性表达率高于不吸烟患者，差异有统计学意义（P＜0.05）；年龄≥60 岁的患者PD-L1 的阳性表达率高于年龄＜60 岁的患者，差异有统计学意义（P＜0.05）；贴壁型肺腺癌患者与腺泡型肺腺癌患者PD-L1 的阳性表达率均高于实性肺腺癌患者和黏液性肺腺癌患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。详见表1。

表1 PD-L1 的表达情况与肺腺癌组织学分型及临床病理特征之间的关系[ 例（%）]

3 讨论

肺癌是一种发病率较高的呼吸系统恶性肿瘤。在所有男性罹患的恶性肿瘤中，肺癌的发病率和致死率均居第一位；在所有女性罹患的恶性肿瘤中，肺癌的发病率和致死率均居第二位。肺腺癌是肺癌常见的一种病理类型。与肺鳞癌好发于男性及吸烟群体不同，肺腺癌在女性和不吸烟群体中具有较高的发病率。多数肺腺癌均起源于较小的支气管，为周围型肺癌。PD-L1 由CD274 基因编码，是免疫球蛋白超家族中的Ⅰ型跨膜蛋白。正常情况下，人体的免疫系统会对外来的抗原产生免疫反应，激活抗原特异性细胞毒性T 淋巴细胞，使T 淋巴细胞分化出多种T 细胞（包括抑制性T 细胞、杀伤性T 细胞、调节性T 细胞等），从而起到杀伤靶细胞的作用。免疫监视、免疫相持和免疫逃逸是恶性肿瘤发生、发展必经的三个阶段。其中免疫逃逸是三者中的重中之重。研究发现，在免疫逃逸阶段，若T 淋巴细胞的功能受限或失调，会导致机体抵抗肿瘤细胞的能力减弱，使肿瘤细胞大量生成[4]。PD-L1 在多种细胞中均有表达，包括胎盘干细胞、胰岛细胞、B 淋巴细胞、T淋巴细胞、树突状细胞、巨噬细胞、肥大细胞等。研究表明，恶性肿瘤组织中PD-L1 的表达水平明显高于正常组织，PD-L1 的表达水平与恶性肿瘤的分期、转移、侵袭程度及患者的预后密切相关。相关的前瞻性研究显示，PD-L1 的表达水平与恶性肿瘤患者的预后密切相关，因此可将PD-L1作为评估恶性肿瘤患者疗效及预后的重要参考指标[5-6]。现阶段，临床上对肺腺癌患者主要是进行手术治疗、化疗或放疗，但疗效均不理想。近年来，PD-L1 免疫疗法在肺腺癌的治疗中逐渐得到应用，并取得了较好的效果。采用该疗法治疗肺腺癌的机制是：程序性细胞死亡蛋白-1（PD-1）/PD-L1 抑制剂可通过与PD-1、PD-L1 结合阻止PD1 与PD-L1 之间的识别，激活蛋白酪氨酸磷酸酶1（SHP-1）和蛋白酪氨酸磷酸酶2（SHP-2），促进下游通路中磷脂酰肌醇3 激酶/ 蛋白激酶B（PI3K/Akt）的磷酸化及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的活化，促使CD4+Foxp3 阴性T 淋巴细胞向阳性调节性T 细胞转化，恢复或增强T 淋巴细胞的功能，进而发挥抗肿瘤的作用[7]。

本研究的结果证实，PD-L1 在肺腺癌中存在阳性表达的情况。肺腺癌患者PD-L1 的阳性表达与其性别、年龄、吸烟与否及肺腺癌的组织学分型有关，男性、吸烟、年龄≥60 岁及组织学分型为贴壁型、腺泡型的肺腺癌患者PD-L1 的阳性表达率较高。