梅花鹿感染产气荚膜梭菌的诊断及中西医结合治疗

罗 柳 汤德元 曾智勇 黄 涛 张 森 杨志刚 晏仁潭 韩超逸

(贵州大学动物科学学院，贵阳，550025)

1 临床症状

2020年5月下旬，贵州省某动物园存栏的20头梅花鹿(Cervusnippon)部分出现食欲减退、精神沉郁等症状，病程2～3 d，随后腹泻、胃部胀大、食欲废绝，有6头梅花鹿接连发病死亡(图1)。经询问饲养管理人员发现，梅花鹿没有出现明显的发热，现场测量3头发病梅花鹿的体温分别为38.7、39.6、41.5 ℃，其临床症状表现为精神沉郁，不食，皮温不稳，耳、鼻、四肢末端发凉，口腔黏膜暗红，腹部有疼痛反应，有仰头蹬腿的表现，且呼吸急促，排出恶臭粪便。

图1 患病与病死梅花鹿临床症状

2 剖检结果

将发病死亡梅花鹿进行剖检(图2)，可见其腹膜充血严重并带有出血点，肠黏膜充血出血胀气，胃膜充血出血且胃内有大量未消化草料，腹膜与腹壁多处粘黏，脾脏充血，肺部充血，肾脏肿大，肝脏肿大且有多处梗死灶。

图2 病死梅花鹿剖检结果

3 实验室诊断

3.1 细菌分离培养

无菌制作肺部触片及肠道触片，进行革兰氏染色(图3A、B)。无菌采集发病梅花鹿的病料，接种在涂布10%胎牛血清的LB固体培养基上，37 ℃恒温箱中厌氧培养12 h，可见白浊环状菌落。挑取部分该菌落涂于载玻片进行革兰氏染色，在光学显微镜下可见两端钝圆的蓝紫色革兰阳性、短粗的杆菌(图3C)。

图3 病死梅花鹿镜检结果

3.2 生化特性鉴定

按照细菌微量生化鉴定管说明书进行操作，从培养基中挑选部分菌落，接种于细菌微量生化鉴定管中进行生化特性鉴定。结果表明：该细菌对葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖和果糖呈阳性，且产酸产气；对木糖、甘露醇和山梨醇呈阴性；在含铁牛乳试验中出现“汹涌发酵”现象；硫化氢试验、明胶液化试验呈阳性；靛基质试验呈阴性。结合细菌培养特性及生化特性鉴定结果，判断分离菌为产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)。

3.3 支原体PCR检测结果

将送检的梅花鹿病料无菌采取病变及周边部位，混合研磨，液氮反复冻融3次，匀浆器磨20 min后收集匀浆，12 000 r/min 离心10 min，取上清液，用TaKaRa MinBEST Viral DNARNA Extraction Kit Ver.5.0 试剂盒分别提取核酸。

进行支原体PCR扩增。反应结束后取5 μL PCR产物于1%的琼脂糖凝胶中电泳检测(90 V，35 min)，用凝胶成像系统拍照记录。结果未检测出支原体的特异性条带(图4)。

图4 病死梅花鹿病变组织核酸PCR扩增结果

4 治疗方案

西兽医治疗：青霉素钠80万IU×6支/头，用10 mL生理盐水稀释后，配合庆大霉素8万IU×6支/头，用麻醉枪肌内注射，2次/d，连用6 d。

外部清理消毒：水槽及料槽清洗消毒，在料槽中添加新的洁净草料。水槽中添加葡萄糖、维生素C，按6 g/头口服饲喂6 d。12 h后更换水槽饮用水重新投药，投药2 d后未有新发病梅花鹿，已发病梅花鹿逐渐恢复饮食，投药3 d后停止投放葡萄糖，维生素C投药6 d。

中兽医治疗：中兽医辩证该病属里证，因疫疠所致。疫疠，是一种外感致病因素，一般具有较强传染性，发病急骤，蔓延迅速[1]。疫疠流行主要受气候反常变化、环境卫生不良等因素的影响。由于贵州地区的气温变化较大，降雨较多，本次梅花鹿发病应属外邪入里。治疗方剂采用《伤寒论》的“白头翁汤”加减，组方为白头翁15 g、黄柏15 g、黄连15 g、郁金10 g、猪苓15 g、茯苓15 g，候温饲喂，每头每天1剂，连用6 d后梅花鹿群基本恢复正常。

5 讨论

通过对发病梅花鹿的临床症状、病理变化及革兰氏染色观察，判断其患有产气荚膜梭菌感染。采取了中药内服、外部清理消毒及抗生素投喂的综合治疗方法，经过1 d的治疗，没有新增死亡病例。经过6 d的治疗后，发病梅花鹿全部被治愈。

产气荚膜梭菌病是由产气荚膜梭菌(也称魏氏梭菌)感染引起的病畜多种器官出血、急性病变和突然死亡为主要特征的疾病。该病病程短，致死率极高，应以预防为主，并加强管理[2]。第一，建议梅花鹿园区及周边使用0.1% KMnO4水溶液进行彻底消毒，对发病死亡的梅花鹿进行无害化处理，如铺垫及覆盖生石灰深埋、焚烧等[3]；第二，对发病梅花鹿进行隔离，防止产气荚膜梭菌感染扩散及交叉感染园内其他动物；第三，保证食物干净新鲜卫生，营养均衡，提高机体抵抗力，严禁饲喂发霉变质饲料，保证梅花鹿体内肠道正常菌群平衡[4]。为防止应激情况，应提前在饮水中添加电解多维，同时对圈舍、水槽、料槽及饲养工具进行清洁和消毒，保持洁净和干燥，提高动物的生活环境质量，从而预防疫病发生。建议该动物园采用鹿猝死病三联菌苗，或将本地分离菌株经甲醛灭活后，使用氢氧化铝作为佐剂制成灭活苗接种，可有效防止产气荚膜梭菌病的发生。