瑶药蚂蝗七水煎液对小鼠离体肠平滑肌的影响

刘传梦，杨丹荔，冯秋瑜，2 *

(1.广西中医药大学，广西 南宁 530200；2.广西壮瑶医药与医养结合人才小高地，广西 南宁 530020)

蚂蝗七ChiritafimbrisepalaHand.-Mazz.又名石螃蟹、石蜈蚣、红蚂蝗七、岩白菜、水白菜等，为苦苣苔科唇柱苣苔属Chirita的植物，以根茎入药[1]。蚂蝗七生于林中石上，山林湿地，为广西瑶族民间习用草药。其性凉，味微苦，具有清热利湿、行滞消积、止血活血、解毒消肿的功效，多用于治疗胃肠道疾病以及跌打外伤[2]，瑶族民间常用于治疗消化不良及小儿疳积等。近年来，关于蚂蝗七成分研究发现，它的主要化学成分为黄酮类。蚂蟥七总黄酮是蚂蟥七根茎中具有药理活性的主要成分之一，前期研究证实其具有广泛的抗菌、抗炎的药理作用[3-4]。目前已确定的化合物为mahuangchiside(Ⅰ)，hispidulin(Ⅱ)，kaempferol(Ⅲ)和甾醇苷daucosteral(Ⅳ)[5]，其中II和III首次从Gesneriaceae家族中分离得到，并首次从Chirita属中分离出Ⅳ[6]。对蚂蟥七药理作用研究主要集中在抗菌、抗炎等方面。在临床治疗过程中发现蚂蝗七能抑制肠道收缩，对腹泻的患者具有很好的疗效，目前尚未有文献报道。本实验拟以小鼠肠平滑肌为研究对象，研究蚂蝗七水提液对离体肠平滑肌的影响，并对其作用机制进行了分析。

1 实验材料

1.1 动物

KM种小鼠，SPF级，雌雄兼用，体质量(20±2)g，购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司(许可证编号：SCXK(湘)2016-0002)。

1.2 仪器

BL-420F型生物机能实验系统(成都泰盟软件有限公司)；HW-400E型恒温平滑机槽(成都泰盟软件有限公司)；PT-100型生物张力传感器(成都泰盟软件有限公司)。

1.3 药品与试剂

蚂蝗七采集于广西来宾市金秀瑶族自治县，经广西中医药大学韦松基教授鉴定为苦苣苔科唇柱苣苔属植物蚂蟥七ChiritafimbrisepalaHand.-Mazz的根；乙酰胆碱(Acetylcholine，Ach，国药集团化学试剂有限公司，批号20160523)；阿托品(Atropine，Atr，民生药业集团绍兴医药有限公司，批号0601002)；Tyrode's溶液所用试剂均为分析纯，现配现用。

2 实验方法

2.1 Tyrode’s溶液配制[7]

取NaH2PO4·2H2O 0.065 g、CaCl20.2 g、NaCl 8.0 g、KCl 0.2 g、MgSO4·7H2O 0.26 g、NaHCO31.0 g、葡萄糖1.0 g，CaCl2溶液须在其他基础溶液混合并加蒸馏水稀释之后，方可搅拌。同时，逐滴加入，否则将生成钙盐沉淀，葡萄糖在临用前即时加入，加入葡萄糖的溶液不能久置。

2.2 样品的制备

取蚂蝗七原药材200 g，适当粉碎，加10倍量水浸泡0.5 h，加热煮沸，小火保持微沸，煎煮1.5 h取出，用8层纱布过滤。药渣内加入8倍量水，煎煮1 h，取出用8层纱布过滤。药渣内再加入8倍量水，再煎煮1 h，取出用8层纱布过滤，合并煎煮液，用8层纱布过滤，水浴浓缩至200 mL，得到含生药1 g·mL-1的蚂蝗七水煎液。

2.3 实验装置

将生物机能实验系统、恒温平滑机槽、张力传感器等按图1安装。设置恒温平滑机槽的温度为37 ℃，调节空气流速，速度为每秒1～2个气泡。浴槽内管装入新鲜配置的15 mL Tyrode营养液。将十二指肠挂在浴槽中，一端用线结一角，固定于张力传感器上与生物信号采集处理系统相连，另一端固定在L型通气钩上，记录十二指肠收缩时张力的变化。实验装置如图1。

图1 实验装置

2.4 离体小肠平滑肌的制备

取禁食12 h后的小鼠，脱颈椎致死，立即剖开腹腔，找出胃幽门与十二指肠交界处，以此为起点，取十二指肠近端6～8 cm肠管置于装有Tyrode溶液的平皿中[8-12]。

2.5 蚂蝗七水煎液对正常小鼠离体肠平滑肌的影响

取“2.4”方法制备的肠段，放入恒温平滑肌槽稳定约30 min后，记录正常曲线5 min，然后加入0.1 mL的蒸馏水(空白对照组)或加入0.1 mL不同浓度的受试药液(其终浓度分别为12.5，25，50，75，100 mg生药·mL-1)，记录加入蒸馏水或受试药液后的曲线10 min，观察小鼠离体肠段的收缩张力。

2.6 蚂蝗七水煎液对Ach致小鼠离体肠平滑肌兴奋作用的影响

取“2.4”方法制备的肠段，放入恒温平滑肌槽稳定约30 min后，记录正常曲线5 min(计算1，5，10 min时间点张力，取平均值作为正常值)，然后加入1.5×10-5g·mL-1Ach 2滴，1 min 后加入0.1 mL蒸馏水(对照组)或不同浓度的受试药液(其终浓度分别为 12.5，25，50，75，100 mg生药·mL-1)，并记录曲线10 min，观察小鼠离体肠段的收缩张力。

2.7 蚂蝗七水煎液对Atr致小鼠离体肠平滑肌抑制作用的影响

取“2.4”方法制备的肠段，放入恒温平滑肌槽稳定约30 min后，记录正常曲线5 min(计算1，5，10 min时间点张力，取平均值作为正常值)，然后加入0.5 mg·mL-1Atr 0.1 mL，1 min后加入0.1 mL蒸馏水(对照组)或同体积不浓度的受试药液(其终浓度分别为12.5，25，50，75，100 mg生药·mL-1)，并记录曲线10 min，观察小鼠离体肠段的收缩张力。

3 统计学方法

4 实验结果

4.1 蚂蝗七水煎液对正常小鼠离体肠平滑肌收缩作用的影响

结果表明，蚂蝗七水煎液能使肠肌张力降低，收缩幅度变小，给药前后比较平均张力、频率有显著性差异(P<0.01或P<0.05)。给药前后比较，蚂蝗七水煎液在50、75、100 mg生药·mL-1剂量内，具有显著差异。说明蚂蝗七水煎液对正常小鼠离体肠平滑肌收缩作用有明显抑制作用。实验结果见表1、图2、图3。

表1 各剂量蚂蟥七对小鼠正常离体肠平滑肌频率和平均张力的影响

注：与给药前比较，*P<0.05，**P<0.01，ns没有差异。

注：a-e表示12.5、25、50、75、100 生药mg·mL-1。

4.2 蚂蝗七水煎液对Ach致小鼠离体肠平滑肌收缩作用的影响

结果显示，Ach造成离体肠平滑肌兴奋模型，表现为基线上升、张力明显提高。给药前与给药后比较平均张力，在50、75、100 生药mg·mL-1剂量时，说明蚂蝗七水煎液具有对抗Ach兴奋小鼠离体平滑肌的作用，实验结果见表2、图4、图5。

表2 各剂量蚂蟥七Ach致离体肠平滑肌兴奋平均张力的影响

注：与给药前比较，*P<0.05，**P<0.01，ns没有差异。

注：a-f表示0、12.5、25、50、75、100 生药mg·mL-1。

4.3 蚂蝗七水煎液对Atr致小鼠离体肠平滑肌抑制作用的影响

结果显示，Atr造成离体肠平滑肌抑制模型，表现为基线下降、张力明显降低。给药前后比较平均张力，在50、75、100生药mg·mL-1剂量，具有显著性差异，说明高剂量的蚂蝗七水煎液与Atr可协同作用于小鼠离体平滑肌，使离体平滑肌抑制，实验结果见表3、图6、图7。

表3 各剂量蚂蟥七Ach致离体肠平滑肌兴奋平均张力的影响

注：与给药前比较，*P<0.05，**P<0.01，ns没有差异。

注：a-f表示0、12.5、25、50、75、100 生药mg·mL-1。

5 讨论

本研究表明，在生药50～100 mg·mL-1剂量的蚂蝗七水煎液对小鼠正常离体肠的运动具有不同程度的抑制作用，呈剂量依赖性。Ach为M受体激动剂，M受体属于G蛋白偶联受体，在结合Ach后生成第二信使IP3，激活肌浆网，引起细胞内钙离子浓度增加，诱导肠肌收缩[13]。我们的研究发现蚂蟥七能明显拮抗Ach对小鼠离体肠平滑肌的兴奋作用。Atr是M受体拮抗剂，能可逆性阻断节后胆碱能神经支配的效应器上的M受体，Atr通过与Ach竞争性结合M受体，能抑制肠道收缩，解除平滑肌痉挛[14]。我们研究发现蚂蝗七对Atr的舒张起到协同作用。由此可以推测瑶药蚂蝗七水煎液可能通过阻断M受体，从而减弱肠道平滑肌的收缩活动。而关于蚂蟥七对其他影响肠道平滑肌收缩的因素(如钙离子通道以及组胺受体等)的作用，尚需要进一步观察研究。