青海省海北藏族地区牛病毒性腹泻的调查

马晓茜

摘要：为了解我国青海省海北藏族地区牛病毒性腹泻病毒（BVDV）的感染情况，对该地区的海晏县、祁连县、刚察县、门源回族自治县腹规模化牛场进行样品采集，分别采取104、89、113、142份牛血清样品，然后利用牛病毒性腹泻病毒血清学进行抗体检测，同时利用RT-PCR法对牛病毒性腹泻病毒进行病原学检测。结果显示，海北藏族地区海晏县、祁连县、刚察县、门源回族自治县牛病毒性腹泻病毒抗体总阳性率为44.64%;RT-PCR检测病毒性腹泻病毒病原结果阳性率分别为6.73%、6.74%、8.85%、4.23%;说明青海省海北藏族地区牛病毒性腹泻病毒的整体免疫水平不高，且该病的病原阳性率偏高，需要加强对该病的一个免疫预防。

关键词：牛病毒性腹泻病毒;血清学;病原学;调查

牛病毒性腹泻病毒属于黄病毒科瘟病毒属，在分类上与边界病毒、猪瘟病毒同为一属，在抗原性上面具有有交叉性反应[1-2]。该病是在美国东部地区首次发现并分离的，我国是在上个世纪80年代首次在引进的国外牛的流产胎儿中分离[3]。临床上该病毒会感染牛、猪、羊等多种家畜，但是主要以感染牛为主。牛感染该病之后会出现腹泻、发热、白细胞减少、流产等症状，同时对犊牛还会造成先天的持续性感染，给养牛业造成巨大损失。为了了解青海省海北藏族地区牛病毒性腹泻病毒的感染情况，笔者对该地区的海晏县、祁连县、刚察县、门源回族自治县牛病毒性腹泻病毒进行血清学和病原学调查，为该病的防治提供科学依据。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1样品

在青海省海北藏族地区海晏县、祁连县、刚察县、门源回族自治县的规模化牛场分别采取104、89、113、142份病牛血清样品，共计448份。每份样品的血样采集3-5mL，置于加有肝素或EDTA抗凝剂的采血管中，2～8°C冷藏保存至实验室。

1.1.2主要试剂

RNA提取试剂盒购于北京天根生物科技有限公司，购自北京康为世纪生物科技有限公司;BVDV阳性血清、阴性血清购于华威特生物制药有限公司。

1.2试验方法

1.2.1抗体效价测定

用DMEM细胞培养液（含3.5%马血清）对待检样品和BVDV阳性、阴性对照血清在96孔U型板内进行2倍稀释，按1∶2、1∶4和1∶8比例进行稀释，每个稀释度接种2孔，每孔0.1mL。用DMEM细胞培养液（含3.5%马血清）将牛病毒性腹泻病毒中和抗原稀释为200 TCID50/0.1mL。将稀释好的中和抗原液按每孔0.1mL的量加到含有血清的96孔板中，置37°C的二氧化碳培养箱中和1h。最后取培养16～24h、长成良好的MDBK96孔培养板细胞去中和1h的病毒，每孔0.1mL，置于37°C的二氧化碳培养箱培养4d，然后计算细胞板中的血清中和抗体效价，同时记录阳性个数然后计算阳性率。

1.2.2病原学检测

取阴阳对照和待检样品根据RNA提取试剂盒说明书进行提取，然后通过反转录方法获得cDNA，在PCR扩增仪上进行扩增。扩增产物用1%琼脂糖凝胶电泳，在凝胶成像仪系统下观察并记录BVDV抗原阳性份数，然后计算阳性率。

2结论

2.1血清抗体检测结果

由表1可以看出4个县的牛群牛病毒性腹泻病毒血清中和试阳性率分别为43.27%、35.96%、51.33%、45.75%，阳性血清总的为200份，总阳性率44.75%。抗体阳性率直接反映样品病牛过往感染牛病毒性腹瀉，同时也反映母源抗体获得情况和疫苗免疫情况，本调查结果说明44.64%的牛只已获得牛病毒性腹泻免疫力。

2.2抗原检测结果

从表2 可以看出4个县的牛群样品牛病毒性腹泻病毒抗原检测的阳性率分别为6.73%、6.74%、8.85%、4.23%。抗原检测结果阳性说明病牛感染了牛病毒性腹泻病毒，或者为牛病毒性腹泻病毒持续性感染牛。

3讨论

牛病毒性腹泻病毒自从1980年传入我国，就是我国各地区多个省份普遍存在[7];有学者对内蒙古自治区集约化养牛场病毒性腹泻感染情况进行调查，发现巴彦淖尔、乌兰浩特、呼和浩特地区的牛场病毒性腹泻病毒平均阳性率分别为48.70%、77.80%、33.33%，总血清阳性率为58.35%[8]。王建领等[9]在2012年对牛病毒性腹泻在我国的流行范围进行调查，发现该病在我国各地已经广泛流行。本次对青海省海北藏族地区牛病毒性腹泻病毒的血清抗体和病原进行检查，发现4个县的448份牛血清样品的整体抗体水平在35.96%- 51.33%，总的阳性血清为200份，说明这4个县的牛病毒性腹泻的整体免疫水平参差不齐，且抗体水平不高，说明该地区的羊牛场应该加强对牛病毒性腹泻的整体免疫水平，而且病原学的检测结果牛病毒性腹泻的阳性率在4-23%-8.85%，充分证明了北藏族地区牛病毒性腹泻病毒的感染率偏高，也证明了对该病毒的抵抗能力偏弱，需要对牛群合理安排牛病毒性腹泻病毒的疫苗免疫。

参考文献：

[1]Tomoko Y， Takashi K， Hiroshi A， et al. Genomic analyses of bovine viral diarrhea viruses isolated from cattle imported into Japan between 1991 and 2005[J]. Vet Microbiol， 2008， 127（3-4）： 386-391.

[2]张淑琴，郭利，冷雪，等.牛病毒性腹泻病毒 BVDV-JL 株的分离与鉴定[J]. 中国预防兽医学报，2011，33（3）：181-184.

[3]兰宇，孟相秋，赵建增，等.牛病毒性腹泻的免疫预防[J]. 中国动物保健 ，2016，2（18）：29-31.