2021 年福建省龙岩市病死鸡群中4 种病毒感染情况调查

陈长福

（龙岩市动物疫病预防控制中心，福建龙岩 364000）

鸡细小病毒（chicken parvovirus，ChPV）是引起鸡肠道疾病的主要病原体之一，主要侵害雏鸡，既可水平传播，也可垂直传播[1-2]。1984 年，Kisary 等[3]首次鉴定出ChPV；1987 年，伍 荻滕[4]首次证实该病毒存在于国内10 日龄雏鸡肠道中。该病在美国、匈牙利、波兰、韩国、加拿大、英国等国家广泛流行，在美国ChPV 感染率接近80%[5]。圆圈病毒3 型（gyrovirus 3，GyV3）由Chu 等[6]于2012 年首次从儿童粪便中鉴定出来；2018 年李根等[7]首次在患有传染性腺胃炎的肉鸡中鉴定出GyV3。现已证实GyV3 是引起鸡传染性胃肠炎的病原体之一。国内除山东省外尚未见其他省（自治区、直辖市）有关GyV3 流行的报道。禽白血病（avian leukosis，AL）是禽类多种肿瘤性疾病的总称，其中J 亚群禽白血病病毒（avian leucosis virus subgroup J，ALV-J）主要引起肉鸡的髓细胞瘤。我国于1999 年从肉鸡中分离鉴定出该病毒，随后国内多个省（自治区、直辖市）有该病发生的报道。ALV 造成经济损失主要表现在产生肿瘤，导致鸡死亡及引起鸡的免疫抑制[8-10]。鸡传染性贫血病毒（chicken infectious anemia virus，CIAV）是引起鸡传染性贫血病（chicken infectious anemia，CIA）的病原，主要感染2～4 周龄鸡群。该病的报道最早可追溯到1959 年。1979 年日本学者Yuasa 等[11]首次分离鉴定到CIAV（Gifu-1 株）。崔现兰等[12]1992 年首次在国内分离鉴定到CIAV，随后山东、江苏、广东等多地相继报道了CIAV 的流行[13-16]。

龙岩市是福建省畜牧业生产大市，2020 年牧业产值高达300 多亿元，占农林牧渔业总产值的55.5%，肉蛋奶产量68.5 万t，家禽出栏1.95 亿羽，同比增长5.5%，主要家禽产值1.44 亿元，同比增长5.2%，家禽业生产已成为龙岩市农牧业经济中最具活力和最有潜力的主导产业之一。目前龙岩市尚无ChPV、GyV3、ALV-J 和CIAV 感染的相关报道。为探明龙岩市规模化鸡场是否存在这4 种病毒的感染，2021 年采集龙岩市各县（市、区）鸡场病死鸡相关样品进行PCR 或RT-PCR 检测，以期为今后龙岩市以及周边省市规模化鸡场主要疫病防控提供参考。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 相关发病鸡场分布 32 个养鸡场病死鸡样品，由7 个县（市、区）动物疫病预防控制中心送检，其中存栏量1 万羽以下的主要是家庭农场，共有16 个，1 万～5 万羽的规模化鸡场共9 个，5 万羽以上规模化鸡场共7 个（表1）

表1 不同规模发病鸡场数量分布 单位：个

1.1.2 组织样品来源及处理 2021 年1—11 月龙岩市7 个县（市、区）32 个鸡场共送检病死鸡肝、脾、肾等组织样品297 份。组织样品于生物安全柜内剪碎、研磨后，按1:5（m/m）加PBS 制成组织匀浆，-70 ℃保存备用。

1.1.3 主要试剂 病毒DNA/RNA 提取试剂盒、反转录试剂盒，均购自北京全式金生物技术有限公司；DL 2 000 DNA Marker，购自宝日医生物技术（北京）有限公司；PCR 扩增相关酶，购自湖南艾科瑞生物工程有限公司。

1.2 方法

1.2.1 引物设计与合成 根据GyV3 SDAU-1 株（GenBank：mg366592.1）VP2基因、ChPV GXCH-PV-25 株（GenBank：MG602515.1）NS1基因设计特异性引物，参考文献[17-18]设计ALV-J 和CIAV 引物，引物序列如表2 所示。所用引物均由福州铂尚生物技术有限公司合成。

表2 4 种病毒检测引物序列

1.2.2 样品核酸提取及反转录 参照试剂盒说明书，分别提取组织样品的总RNA/DNA，并将RNA 反转录成cDNA，-20 ℃保存备用。

1.3 RT-PCR 或PCR 检测

采用20.0 µL PCR反应体系：PCR扩增酶10.0 µL，cDNA 或DNA 模版2.0 µL，上、下游引物各0.5 µL，无菌去离子水7.0 µL。混匀后放入PCR 扩增仪中进行扩增。反应条件：95 ℃ 5 min；95 ℃ 30 s，55～56 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，30 个循环；72 ℃ 5 min。待反应结束后取7.0 µL 反应终产物加入至1%琼脂糖凝胶中，经125 V 电泳25 min 后置于紫外凝胶成像系统中观察结果。

2 结果与分析

2.1 总体情况

对2021 年龙岩市各地采集的297 份病死鸡组织样品进行检测，结果4 种病原均有阳性检出（图1～2），分别检出CIAV、GyV3、ChPV、ALV-J 阳性样品102、85、56、39 份，阳性检出率分别为34.34%、28.62%、18.86%、13.13%（表3）。从病原分布看，CIAV 分布最广，除漳平市外其余6 个区县均有检出，各区县检出率介于12.00%～98.00%；其他3 种病原呈局限性分布，均只在4 个区县有检出，各区县检出率也有差异，但均在12.00%以上，其中武平县GyV3 检出率高达92.00%。

表3 龙岩市各县（市、区）4 种病毒总体感染情况

2.2 单一感染情况

单一感染统计结果（表4）显示：共检出单一感染阳性样品79 份，总单一感染阳性检出率为26.60%（79/297），其中ChPV 的单一感染阳性检出率最高，单一感染阳性检出率从高到低依次为ChPV（14.81%）、CIAV（5.05%）、ALV-J（4.71%）、GyV3（2.02%）。

表4 龙岩市各县（市、区）4 种病毒单一感染情况

2.3 病毒混合感染

混合感染统计结果（表5）显 示：CIAV+ChPV双重感染阳性检出率为2.69%（8/297），CIAV+GyV3 为18.18%（54/297）；CIAV+ALV-J+GyV3三重感染阳性检出率为7.07%（21/297），CIAV+ChPV+ALV-J+GyV3 四重感染为1.34%（4/297）。在混合感染类型中，CIAV 与其他病原的混合感染最普遍，双重和多重感染均有，在102份CIAV 阳性样品中，有87 份为混合感染，占85.29%。

表5 龙岩市各县（市、区）4 种病毒混合感染情况

3 讨论

对龙岩市各地鸡场病死鸡4 种病毒的感染检测发现，2021 年龙岩市存在CIAV、GyV3、ChPV、ALV-J 4 种病原的感染，阳性检出率为13.13%～34.34%，其中CIAV 分布较广，阳性检出率最高（34.34%），其他病原呈现一定的区域分布特征。ChPV 在漳平市、永定区、上杭县和新罗区有检测出，检出率为22.00%～44.12%，与奉彬等[19]报道的广西地区肉鸡群ChPV 检出率为16.67%（8/48）相比略高。2018 年，山东农业大学成子强团队首次从患有传染性腺胃炎的白羽肉鸡中分离鉴定出GyV3，并从2014—2018 年采集的336份临床样品中检测出42 份阳性，阳性检出率为12.50%[20]，而国内其他省市暂无GyV3 流行的报道。在本调查发现，GyV3 在龙岩市4 个区县有检出，其中武平县的检出率高达92.00%，其他区县检出率也在20.00%以上，提示GyV3 在龙岩市部分地区可能广泛流行。ALV-J 在连城县、长汀县、新罗区和武平县均有检出，检出率分别为42.50%、28.00%、18.00%和12.00%，与国内其他地区的检测结果相近，如鲍伟华等[21]对浙江省宁波市鸡场进行ALV-J 抗体检测的阳性率为21.50%，马亚珍等[10]在新疆3 个县均检测出ALV-J 抗体，阳性率为26.00%，邢林林等[22]对山东省7 个种鸡场进行ALV-J 抗体检测，发现阳性率为19.80%。这表明龙岩市部分区县的ALV-J 流行可能也较为严重，应引起重视。李岳等[23]于2016 年1 月—2019 年9月对我国13 个省市规模化养殖场开展了CIAV 流行病学调查，发现CIAV 感染普遍存在，感染率介于12.50%～25.69%。本调查发现，CIAV感染率最高，分布也最为广泛，除漳平市外其余6 个区县均有检出，其中武平县检出率高达98.00%，其他区县检出率也普遍较高（12.00%～50.00%）。研究[14-16]表明，CIAV 与免疫抑制病毒混合感染时，可使CIAV 致病性增强，感染鸡群病症加剧，死亡率增加，这可能是导致CIAV 高阳性率的主要原因之一。

单一感染统计结果显示，单一感染阳性检出率为26.60%（79/297），其中ChPV 单一感染阳性检出率最高，检出率从高到低依次为ChPV（14.81%）、CIAV（5.05%）、ALV-J（4.71%）、GyV3（2.02%）。从混合感染统计结果来看，除漳平市外，龙岩市各区县养殖场均存在两种以上病毒混合感染，混合感染较为普遍，其中最普遍的表现为CIAV 与其他病原的混合感染，如CIAV+ChPV双重感染阳性检出率为2.69%（8/297），CIAV+GyV3 为18.18%（54/297）；CIAV+ALVJ+GyV3 三重感染阳性检出率为7.07%（21/297），CIAV+ChPV+ALV-J+GyV3 四重感染为1.34%（4/297）。在102 份CIAV 阳性样品中，有87 份为混合感染，占85.29%。混合感染是摆在当今养殖业面前的一道难题，需要系统研究开展综合防控。

本调查的样品全部来自病死鸡，因而检测结果并不能代表这些病原的真实流行情况，今后需要系统开展流行病学调查，为这4 种疫病的科学防控提供数据支撑。

综上所述，龙岩市鸡群中存在CIAV、ALV-J、ChPV 和GyV3 等4 种病原的感染，且部分地区感染较为严重，混合感染现象普遍，应引起养鸡生产者的高度重视，积极开展疫病监测，加强鸡场的生物安全综合防控，以保障该地区家禽养殖业健康发展。