变应性鼻炎鼻黏膜组织中miR-107表达与病情严重程度及炎症因子相关性研究

陈 娟， 古丽波斯坦·买买提艾力， 卡迪丽娅·木拉提， 郭小平， 张 瑾， 唐 亮

新疆维吾尔自治区人民医院 耳鼻喉诊疗中心，新疆 乌鲁木齐 830001

变应性鼻炎(allergic rhinitis，AR)为临床较常见的非传染性鼻炎，以鼻黏膜慢性炎症为主要特征，发病率呈上升趋势[1]。AR发病机制复杂，免疫细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞、炎症介质等均参与此过程，其中，免疫反应是AR发病的病理基础，免疫机制失衡可引起大量炎症因子释放，加重AR病情[2]。miRNAs在免疫细胞发育分化、炎症反应起到调控作用，其异常表达可能导致免疫紊乱，激发炎症反应[3]。miR-107参与炎症反应调控，其表达可抑制炎症反应信号通路，从而减少炎症反应的发生[4]。本研究旨在探讨miR-107与AR病情严重程度以及炎症因子的相关性，以期为临床诊治提供参考。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 将新疆维吾尔自治区人民医院自2018年1月至2020年10月收治的74例AR患者纳入B组。纳入标准：典型阵发性喷嚏、流鼻涕、鼻痒、鼻塞，符合2015年天津AR诊治指南相关标准[5]；年龄>18岁。排除标准：血管运动性鼻炎、非变应性鼻炎伴嗜酸粒细胞增多综合征、感染性鼻炎、激素性鼻炎、药物性鼻炎等其他鼻部疾病；近期患有急慢性感染性疾病；合并其他部位恶性肿瘤。另将同期于我院行鼻中隔矫治手术的69例患者纳入A组。A组：男性39例，女性30例；年龄25～59岁，平均年龄(35.02±4.93)岁。B组：男性41例，女性33例；年龄23～56岁，平均年龄(34.41±4.72)岁。两组患者一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经医院伦理委员会批准。所有患者均签署知情同意书。

1.2 研究方法 局部麻醉下，取患者下鼻甲前黏膜组织，无菌生理盐水漂洗干燥后，于-80℃液氮保存待检。室温下，复融组织标本，TRIzol法提取总RNA。选择吸光度值A260/A280在1.8～2.0的RNA样品，采用M-MLV 逆转录酶(Epicentre公司)，按照试剂盒说明将其转录为cDNA。采用CFX96实时荧光定量PCR仪(美国Bio-Rad)检测组织中miR-107、白细胞介素(interleukin，IL)-6、IL-1β、IL-13、IL-17、IL-22、IL-23、IL-10、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)表达。引物合成及序列测定由上海基康公司完成。miR-107：上游5′-ACACTCCAGCTGGGAGCAGCATTGTACAGG-3′，下游5′-TGTCGTGGAGTCGGCAATTC-3′。IL-6：上游5′-GGTACATCCTCGACGGCATCTC-3′，下游5′-GCTCTGGCTTGTTCCTCACTACT-3′。IL-1β：上游5′-ATCTGTACCTGTCCTGCGTGTTG-3′，下游5′-TTCTGCTTGAGAGGTGCTGATGT-3′。IL-13：上游5′-CCACGGTCATTGCTCTCACTT-3′，下游5′-GCTGTCAGGTTGATGCTCCAT-3′。IL-17：上游5′-TTACTACAACCGATCCACCTCAC-3′，下游5′-CCACGGACACCAGTATCTTCTC-3′。IL-22：上游5′-AGGACACAGACGGTGGAAAC-3′，下游5′-TGTTTTCGCAGCATCAGAAC-3′。IL-23：上游5′-AGCAGCTCAAGGATGGCACTCAG-3′，下游5′-CCCCAAATTTCCCTTCCCATCTA-3′。IL-10：上游5′-TGTTGCCTGGTCCTCCTGACT-3′，下游5′-GCCTTGATGTCTGGGTCTTGGTT-3′。TGF-β1：上游5′-GCTAATGGTGGACCGCAAC-3′，下游5′-GCAGTGAGCACTGAAGCGA-3′。反应条件：95℃变性10 s，65℃退火20 s；75℃延伸15 s，共40个循环。以U6 snRNA为内参，根据2-ΔΔCt计算miR-107、IL-6、IL-1β、IL-13、IL-17、IL-22、IL-23、IL-10、TGF-β1相对表达量。

2 结果

2.1 两组患者鼻黏膜组织中miR-107及各炎症因子水平比较 B组患者鼻黏膜组织中miR-107、IL-10、TGF-β1水平均低于A租，IL-6、IL-1β、IL-13、IL-17、IL-22、IL-23水平均高于A租，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

2.2 AR患者miR-107表达水平与临床病理特征关系 中重度患者鼻黏膜组织中miR-107表达水平低于轻度患者，差异有统计学意义(P<0.05)；IgE阳性患者鼻黏膜组织中miR-107表达低于阴性患者，差异有统计学意义(P<0.05)；伴哮喘患者鼻黏膜组织中miR-107表达低于无哮喘患者，差异有统计学意义(P<0.05)。不同年龄、性别、症状发作时间患者miR-107表达水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 AR患者miR-107表达水平与临床病理特征关系

2.3 AR患者鼻黏膜组织中miR-107表达与病情严重程度、炎症因子相关性 AR患者鼻黏膜组织中miR-107表达与疾病严重程度、IL-6、IL-1β、IL-13、IL-17、IL-22、IL-23表达均呈负相关性(r=-0.543、-0.609、-0.598、-0.537、-0.429、-0.538、-0.491，P<0.05)，与IL-10、TGF-β1表达呈正相关性(r=0.612、0.693，P<0.05)。

3 讨论

miRNAs调节细胞增殖、凋亡以及分化等多种生理过程，并参与恶性肿瘤、炎症性疾病、免疫疾病等多种疾病发病机制[6]。miR-107在心脏、骨骼肌、大脑、肺、胎盘中广泛而稳定的表达，在细胞对缺血应激反应、细胞代谢、细胞周期调控、组织损伤修复中发挥重要作用[7]。miR-107具有免疫调节功能，在炎症性疾病中表达降低，可通过调控免疫反应影响炎症因子水平，促炎细胞因子对miR-107也有调控作用，两者相互作用参与炎症性疾病发生[8]。本研究结果表明，miR-107在AR患者鼻黏膜组织中表达明显降低。这说明，miR-107表达缺乏可能引起AR发病。本研究同时发现，B组患者鼻黏膜组织中IL-10、TGF-β1水平均低于A租，IL-6、IL-1β、IL-13、IL-17、IL-22、IL-23水平均高于A租，差异均有统计学意义(P<0.05)。这表明，AR患者体内存在Th17/Treg免疫失衡和Th17介导的过度炎症反应。

Th17/Treg动态平衡在维持免疫稳定中发挥重要作用，Th17/Treg失衡可能导致机体炎症反应、自身免疫疾病的发生。IL-10可抑制炎症细胞激活、迁移和粘附，起到抗炎作用[9]。TGF-β1可抑制免疫细胞增殖、淋巴细胞分化、炎症细胞因子产生，并能诱导Treg细胞产生，TGF-β1、Treg细胞在AR患者均降低，TGF-β1/Treg参与AR发病[10]。IL-6可促使CD4+T细胞向Th17细胞分化，IL-17、IL-22、IL-23均为Th17细胞相关因子，具有介导T细胞炎症反应作用[11]。IL-1β是一种典型促炎因子，AR患者线粒体活性氧和NLRP3炎症小体产生可上调IL-1β，IL-1β过度释放可促进AR严重炎症反应[12]。IL-13可诱导鼻上皮炎症反应，参与AR发病[13]。本研究发现，miR-107表达与IL-10、TGF-β1表达呈正相关性，与IL-6、IL-1β、IL-13、IL-17、IL-22、IL-23表达呈负相关性。这说明，miR-107可能通过调控Th17/Treg系统参与AR发病机制，miR-107表达缺失可诱导Th17相关细胞因子释放，抑制Treg相关细胞因子合成，进而促进炎症反应的发生。miR-107调控AR炎症反应的机制尚不清楚，可能机制为：miR-107作为一种抑制炎症反应基因，通过多种信号通路降低炎症反应、内质网应激反应，并通过调控炎症因子表达抑制炎症反应[3，9-11]。miR-107表达缺失可能导致AR免疫失调，导致促炎细胞因子过度释放，加重上呼吸道炎症反应。本研究还发现，miR-107表达与IgE表达和伴发哮喘有关。这说明，miR-107表达持续缺失可能导致AR病情加重，miR-107表达水平可能受IgE表达和伴发哮喘影响。IgE介导的Ⅰ型变态反应是AR发病的核心机制，IgE水平越高，AR发作强度越大[14]，可能导致miR-107表达下调。

综上所述，AR患者鼻黏膜组织中miR-107表达下调，且与病情严重程度及炎症因子水平均相关，miR-107介导的免疫失衡和过度炎症反应在AR发病机制中可能发挥重要作用。