佛山市高明区水产品中创伤弧菌污染状况及耐药性分析

麦国通 区子阳 程允杰

（佛山市高明区疾病预防控制中心 广东佛山 528500）

1 前言

创伤弧菌是一种有荚膜的革兰阴性嗜盐性弧菌，广泛存在于鱼、虾及贝类等海产品中，与霍乱弧菌和副溶血性弧菌同属致病性弧菌，是水产养殖中危害较大的一种病原菌[1]。创伤弧菌的致病性与其产生的多种致病因子息息相关，现在人们还不能准确、及时、有效地预见弧菌病爆发的时间和株型[2]。创伤弧菌可导致人体出现严重甚至致命性的感染，如急性胃肠炎、坏死性筋膜炎和高致死率的脓毒血症[3]。目前，我国的水产养殖业中存在兽药滥用的情况，导致耐药菌株的出现，国内外已有诸多关于创伤弧菌耐药的报道[4-5]。为了解佛山市高明区市售水产品的创伤弧菌污染状况及其耐药情况，本文对3类水产品共360份进行分离鉴定及药敏分析。

2 材料与方法

2.1 材料

选取高明区城区和各乡镇街道的水产交易市场为采样点，按照《水产品抽样方法》（SC/T 3016-2004）[6]的方法，于2020年9月—2021年2月，随机采集3类水产品共计360份，其中鱼类145份、甲壳类116份、贝类99份。样品采集均由本单位人员持采样员证按相关国家标准采集，采样后及时送检。对分离出的53株创伤弧菌进行药敏试验。

2.2 仪器与试剂

全自动微生物鉴定/药敏分析系统（Vitek 2 Compact 30）；弧菌显色培养基；革兰氏阴性药敏鉴定卡（AST-GN09）；15种抗生素：阿米卡星AN、氨苄西林AM、舒巴坦SAM、头孢唑啉CZ、头孢吡肟FEP、头孢他啶CAZ、头孢呋辛CXM、环丙沙星CIP、庆大霉素GM、亚胺培南IPM、左氧氟沙星LEV、美罗培南MEM、哌拉西林PIP、哌拉西林/三唑巴坦TZP、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑SXT。试剂均在有效期内使用。

2.3 方法

菌株分离鉴定按照《国家食品污染和有害因素风险工作手册》[7]规定的方法进行；药敏分析采用法国梅里埃全自动微生物鉴定/药敏分析系统（Vitek 2 Compact 30），本文对53株创伤弧菌进行了药敏试验（MIC法），结果参照药敏卡的说明书及美国临床实验室标准化协会工作手册[8]（Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI）标准进行判定，每次试验都以大肠杆菌ATCC 25922作为质控菌株。

2.4 质量控制

本实验室每年参加广东省疾控中心和佛山市疾控中心的致病菌分离鉴定能力考核，均取得满意结果；所有试剂耗材均经过验收合格后使用。

2.5 统计学处理

通过Excel 2010和SPSS21.0软件对数据进行整理和分析，率值比较采用卡方检验χ2，P＜0.05表明差异有统计学意义。

3 结果

3.1 水产品检出创伤弧菌的总体情况

本文共采集佛山市高明区水产品360份，53份检出创伤弧菌，总检出率为14.72%。3类水产品的检出率分别为：鱼类15.86%、甲壳类15.52%、贝类12.12%，其中鱼类检出率最高，贝类检出率最低。3类水产品创伤弧菌检出率的差异没有统计学意义（χ2=0.74，P＞0.05），详见表1。其中，甲壳类、贝类和鱼类三者间检出率差异均无统计学意义（χ2贝类/甲壳类=0.51，χ2贝类/鱼类=0.67，χ2甲壳类/鱼类=0.006，P＞0.05）。甲壳类分别采集了虾60份和蟹56份，检出率分别为23.33%和7.14%，两者检出率差异有统计学意义（χ2=5.79，P＜0.05）；鱼类分别采集淡水鱼98份和海鱼47份，检出率分别为12.24%和23.40%，两者检出率差异有统计学意义（χ2=4.87，P＜0.05）。

表1 三类水产品总检出情况

3.2 不同季节水产品的检出情况

本文主要以夏秋季和冬春季对高明区内市售水产品中的创伤弧菌检出情况进行分析，详见表2。其中夏秋季创伤弧菌检出率（21.74%）比冬春季（7.39%）高，其差异有统计学意义（χ2=14.76，P＜0.05）。其中甲壳类和鱼类的夏秋季创伤弧菌检出率比冬春季高，且差异均有统计学意义（χ2=甲壳类（夏秋/冬春）=5.21，P＜0.05；χ2=鱼类（夏秋/冬春）=4.25，P＜0.05）。

表2 不同季节水产品创伤弧菌检出情况

3.3 检出的创伤弧菌药敏分析

53株创伤弧菌采用全自动微生物鉴定/药敏分析系统（Vitek 2 Compact 30）进行药敏试验。实验结果表明，53株创伤弧菌中，有40株菌株耐药，平均耐药率达85.5%，耐受10种以下抗生素的菌株有32株，占耐药株总数的80.0%；耐受10～12种抗生素的菌株共计8株，占总数的20.0%。其中耐药率最高的前3种抗生素分别为耐氨苄西林（69.81%）、头孢呋辛（62.26%）和头孢吡肟（60.38%）。53株菌株均不耐药的有环丙沙星、庆大霉素和左氧氟沙星，详见表3。

表3 53株创伤弧菌抗生素敏感试验

3.4 不同水产品检出菌株的耐药情况

3类水产品中检出的创伤弧菌耐药菌株构成见表4，3类水产品检出的创伤弧菌耐药率差异没有统计学意义（χ2=1.25，P＞0.05），其中贝类检出的创伤弧菌耐药菌株占比最高，12株中有10株耐药株，占比达83.33%；甲壳类检出创伤弧菌耐药率最低，为66.67%。

表4 不同水产品检出菌株的耐药情况

4 讨论

本文研究结果显示，佛山市高明区市售水产品中创伤弧菌总体检出率为14.72%，低于白瑶等[9]、杨春晓等[10]报道的结果，但高于李迎月等[11]、黎剑华等[12]报道的结果，表明佛山市高明区市售水产品中创伤弧菌污染的总体情况不容乐观；甲壳类、鱼类和贝类等不同水产品的创伤弧菌检出率基本一致，检出率差异没有统计学意义，表明本区域内创伤弧菌已经污染了鱼、虾、蟹和贝类等不同类别的水产品。

创伤弧菌不仅是海水养殖经济动物弧菌病的主要致病菌之一，还是引起人兽共患病的重要病原菌之一。皮肤伤口接触创伤弧菌污染的海水，食用生的或未煮熟的水产品均容易导致感染，经皮肤伤口感染可引起败血症或组织坏死，经口感染可引起肠胃炎。虽然我区暂时还没有关于感染创伤弧菌而致病的报道，但消费者应加强防范，避免感染。

创伤弧菌为嗜温性细菌，当水体温度高于18℃时会快速繁殖，于26℃时达到峰值，在低于5℃时进入休眠状态，因此夏秋季是创伤弧菌感染的高峰季节[13]。本文研究结果表明，夏秋季创伤弧菌检出率明显高于冬春季，不同季节检出率差异具有统计学意义，与上述报道一致；研究结果还表明甲壳类和鱼类的夏秋季创伤弧菌检出率比冬春季要高很多。生食被创伤弧菌污染的海产品可能会引起高热、呕吐、腹泻、休克等急性肠胃炎症状，还可能引起原发性败血症危及生命，致死率高达50%，免疫功能低下人群例如慢性肝炎、糖尿病、慢性肾病患者、艾滋病患者及免疫系统疾病患者感染创伤弧菌后引起败血症的概率更高[14]。本文研究提示，消费者应注意避免生食鱼虾等水产品，特别是在致病菌感染高发的夏秋季节，应当注意防范；佛山地区市民有食用虾生鱼生的传统，应更改食用方式，避免感染致病性海洋弧菌。

创伤弧菌对水产品的污染日益严重，其感染人体引起的高致死率以及多重抗生素耐药性已引起全球关注，近年也有多起关于创伤弧菌感染的报道[15-17]。本文对分离出的53株创伤弧菌进行药敏试验，结果显示，40株菌株耐药，平均耐药率达85.5%；数据表明，甲壳类、鱼类和贝类检出的创伤弧菌耐药率三者间没有差异，表明该菌耐药情况在不同的水产品中普遍存在。该菌对氨苄西林药、头孢呋辛和头孢吡肟耐药比较严重，对环丙沙星、庆大霉素和左氧氟沙星均不耐药，与黎炯等[18]，彭淑萍等[19]报道的创伤弧菌药敏结果相近。近年来佛山市的水产养殖业快速发展，使用抗生素来防治鱼类的细菌性疾病现象日益严重，抗生素的滥用不仅会导致严重的水产品安全问题，还会引起病原菌产生严重的耐药性，本文已发现能耐受十余种抗生素的创伤弧菌。这些均提示相关人员在治疗病原菌引起的疾病过程中要合理用药，尽量减少抗生素的使用，同时要减少同种药物的反复使用，避免形成耐药菌株，从而提高治疗效果。

本文通过对佛山市高明区销售水产品开展创伤弧菌的分离鉴定和耐药性研究，详细了解创伤弧菌在高明区销售水产品中的污染率和菌株耐药性，为相关人员提供准确可靠的创伤弧菌污染信息，为相关职能部门开展食品安全风险评估提供技术支撑和数据支持；为高明辖区内由创伤弧菌引起的暴发病例或散发病例的临床用药治疗提供指导和参考。

目前，佛山市正在创建国家食品安全城市，开展创伤弧菌等食品致病菌污染的监测工作，有利于及时发现高风险食品，通过食品污染风险预警，避免市民进食受污染的食品，可以有效降低食物中毒等食源性疾病发生的风险，对佛山市创建国家食品安全城市起到积极的推进作用。