青贮饲料对波麻杂交羊血清指标和 背最长肌脂肪酸组成的影响

索效军，张 年

(1.湖北省农业科学院 畜牧兽医研究所，湖北 武汉 430064；2.动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室，湖北 武汉 430064)

脂肪酸组成是衡量肉类营养价值和风味的重要指标，受年龄、性别、品种和饲养管理等多种因素的影响，与人体健康息息相关，羊肉脂肪酸组成已成为研究热点。饲粮类型的变化可引起血液内营养代谢物质的变化。因此，研究饲粮对肉羊血清指标和肌肉脂肪酸组成的影响具有十分重要的意义。波麻杂交羊是以波尔山羊为父本，麻城黑山羊为母本，采用导入杂交方法，历经10余年培育的一个“黑头白身”新类群，主要饲养于湖北省西北部低丘岗地、江汉平原地区，以舍饲为主，具有耐粗饲、耐湿热、性早熟等优点。由于波麻杂交羊尚未大面积推广，饲养范围较小，基础性资料、技术研究及产业化开发利用不足，尚未形成一定的生产规模，关于青贮饲料对肉羊血清指标和肌肉脂肪酸组成影响的报道较少。鉴于此，本试验旨在研究饲粮中添加不同青贮料对波麻杂交羊血清指标、背最长肌脂肪酸组成的影响，为波麻杂交羊肉品质的提高提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

花生蔓于2019年8月10日风干后，粉碎至2～3 cm，直接使用；非全株青贮玉米是将收获籽粒后的玉米秸秆切短、装填、镇压而制成；全株青贮玉米是将乳熟后期至蜡熟前期的整株玉米收获(包括果穗在内的地上全部绿色植株，含水量为55%～70%)，经切短、装填、镇压而制成；饲料桑(L.)，在高为1.2 m左右时，收获第2茬，使用揉丝机处理后，按照全株玉米45%、桑枝45%、麸皮10%进行桑枝+全株玉米混合青贮。花生蔓、非全株青贮玉米、全株青贮玉米、桑枝+全株玉米混合青贮均为荆门景阳畜禽有限公司自种加工。营养成分详见表1。

表1 青贮料营养成分(风干基础)Table 1 Nutritional ingredient of silage(air-dry basis) %

1.2 试验设计

本试验于2019年10月12日至12月18日在荆门某畜禽有限公司的种羊场进行，试验期67 d，其中预试期7 d，正式期60 d。选用体重为(35.3±1.5)kg的10月龄健康波麻杂交羊48只，公母各半，随机分为4组，Ⅰ组为对照组，无添加，Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组为试验组，分别添加非全株青贮玉米、全株青贮玉米、桑枝+全株玉米混合青贮。试验采用全混合饲粮，以等能等氮形式设计配方。日粮组成及营养水平详见表2。

表2 饲粮组成及营养水平(风干基础)Table 2 Compositions and nutritional levels of diets(air-dry basis)

1.3 饲养管理

试验羊为散栏式饲养，每天07:30、18:00饲喂2次，饲喂量按实际需要量的1.1倍供给，保证料槽有余料，自由采食、自由饮水，每次饲喂前清理掉前一次的剩料，保证料槽的清洁卫生。

1.4 样品采集

试验组停止饲喂饲料后，每组随机选取8只羊，颈静脉抽血10 mL，在3 000 r·min的条件下离心15 min，血清分离后，-20 ℃冰箱保存，用于血清指标测定。按照国家实验动物处理饲喂准则屠宰(宰前24 h禁食，2 h禁水)，迅速摘取第10～12胸椎处背最长肌，去除筋膜，用锡纸包裹后，立即放入液氮冻存，运输至实验室后-80 ℃保存备用，用于脂肪酸含量测定。

1.5 指标测定

1.5.1 饲料常规营养成分测定 参照《饲料中中性洗涤纤维的测定》(GB/T 20806-2006)、《饲料中酸性洗涤纤维的测定》(NY/T 1459-2007)、《饲料中粗蛋白的测定》(GB/T 6432-2018)，《饲料中钙的测定》(GB/T 6436-2002)、《饲料中总磷的测定》(GB/T 6437-2002)、《动物性蛋白质饲料胃蛋白酶消化率的测定》(GB/T 17811-2008)方法，进行饲料中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维、粗蛋白、钙、磷、胃蛋白酶消化率的测定。

1.5.2 血清生化指标测定 抗氧化指标包括总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性，丙二醛(MDA)含量；免疫指标包括免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、肿瘤坏死因子(TNFα)等，以上指标均采用武汉三倍体生物有限公司的试剂盒测定，测定方法严格按照说明书进行。

1.5.3 背最长肌脂肪酸组成测定 取背最长肌组织样品，修剪去筋膜和脂肪组织，手工切成小肉丁，加入液氮进行速冻。样品的预处理：称取样品100 mg于2 mL研磨管中，加入一个小钢珠，再加入1 mL氯仿:甲醇(V/V=1:1)，置于冷冻研磨仪中研磨3 min；低温超声15 min，-20 ℃静置15 min。4 ℃，6 000 r·min离心10 min，吸取上清液到5 mL EP管中；再加入1 mL二氯甲烷到样本中，重复上述步骤进行两次萃取；氮气吹干并加入1 mL 0.5 mol·L氢氧化钠-甲醇溶液，涡旋30 s，60 ℃水浴0.5 h；水浴冷却后，加入1 mL正己烷，涡旋30 s。再加入1 mL饱和氢氧化钠水溶液，涡旋30 s，4 ℃，6 000 r·min离心10 min，取上层(正己烷层)溶液到1.5 mL离心管中；氮气吹干，加入200 μL正己烷，涡旋30 s复溶。4 ℃，6 000 r·min离心5 min，取上清溶液到进样小瓶，进GC-MS检测。色谱条件：CP-SIL 88毛细管柱(100 m，0.25 mm，0.25 μm，Agilent J&W Scientific，Folsom，CA，USA)，载气为高纯氦气(纯度不小于99.999%)，流速1.0 mL·min，进样口的温度为260 ℃。进样量1 μL，分流进样，分流比10:1。程序升温：柱温箱的初始温度为60 ℃，以20 ℃·min程序升温至110 ℃，4 ℃·min升温至230 ℃保持16 min，后运行235 ℃保持2 min。质谱条件：电子轰击离子源(EI)，离子源温度230 ℃，四级杆温度150 ℃，传输线温度235 ℃，电子能量70 eV。扫描方式为选择离子扫描(SIM)模式。

1.6 统计分析

试验数据经Excel 2019简单分析后，采用SPSS 23.0中ANOVA过程进行单因素方差分析，使用Duncan's法进行多重比较，<0.05表示组间差异显著，<0.01表示组间差异极显著。

2 结果与分析

2.1 添加不同青贮料对肉羊血清生化指标的影响

由表3可知，与对照组相比，三个试验组背最长肌T-AOC活性显著增加(<0.05)，Ⅲ和Ⅳ组T-SOD、GSH-Px活性极显著增加(<0.01)；与对照组相比，三个试验组MDA含量均降低，其中Ⅲ和Ⅳ组MDA含量极显著低于对照组(<0.01)；三个试验组IgA、IgG、IgM、TNFα含量较对照组均有所增加，其中Ⅲ和Ⅳ组各指标极显著高于对照组(<0.01)，说明饲粮中添加青贮料对肉羊血清生化指标含量产生了一定影响。

表3 添加不同青贮料对肉羊血清生化指标的影响(n=8)Table 3 Effect of different silage on serum biochemical indexes of goats(n=8)

2.2 添加不同青贮料对背最长肌脂肪酸含量的影响

由表4可知，各组共检测出12种饱和脂肪酸(SFA)，其中棕榈酸(C16:0)和硬脂酸(C18:0)含量较高，其余种类含量较少，Ⅰ组棕榈酸含量显著高于试验组(<0.05)；共检测出20种不饱和脂肪酸(UFA)，其中油酸(C18:1n9c)含量最高，Ⅲ、Ⅳ组与Ⅰ组差异显著(<0.05)。Ⅳ组SFA占总脂肪酸比例最低，UFA占总脂肪酸比例最高，Ⅳ组的SFA、UFA占总脂肪酸比例与Ⅰ组差异显著(<0.01)；Ⅲ和Ⅳ组的n-6/n-3含量显著低于Ⅰ和Ⅱ组(<0.05)，说明饲粮中添加青贮料对肉羊脂肪酸含量产生了一定影响。

表4 添加不同青贮料对肉羊背最长肌脂肪酸组成的影响(n=8)Table 4 Effect of different silage on fatty acid composition of longissimus dorsi muscle of goats (n=8)

3 讨 论

3.1 添加不同青贮料对肉羊血清生化指标的影响

李伟玲采用发酵桑叶粉饲喂蒙古羯羊，结果发现血清T-AOC和T-SOD活性升高，MDA活性降低；Cheong等等研究发现，在韩牛的全混合日粮中添加10%青贮桑叶可提高T-SOD、GSH-Px等抗氧化物酶的活性；刘华等研究表明，在饲粮添加24.15%花生蔓+27.55%全株玉米青贮能够提高肉牛抗氧化和抗应激能力。与上述研究结果类似，本研究发现，各试验组波麻杂交羊T-AOC活性较Ⅰ组显著增加，T-SOD、GSH-Px活性较Ⅰ组极显著增加，而MDA活性均降低，其中Ⅲ和Ⅳ组MDA活性极显著低于Ⅰ组，Ⅳ组抗氧化相关指标与Ⅰ组差值最大，这提示波麻杂交羊血清抗氧化能力跟饲粮类型有关，可能由于青贮饲料中的黄酮类化合物、T-SOD等物质所致，而黄酮类化合物具有抗氧化作用，T-SOD则能够清除自由基。张霞等研究发现，杜泊羊和小尾寒羊饲喂玉米青贮后血清T-AOC和T-SOD活性无明显变化，与本试验存在一定差异，可能是由于肉羊品种及饲料成分差异较大所致，仍有待作进一步研究。

李伟玲研究发现，饲喂添加桑叶可以提高肉羊机体的免疫能力。任伟忠等采用全株玉米青贮饲喂干奶前期奶牛，结果发现IgA、IgG和IgM均增高；在本试验中，添加青贮料试验组的血清IgA、IgG、IgM、TNFα含量与Ⅰ组相比有不同程度增多，Ⅳ组的IgA、IgG、IgM、TNFα含量显著高于Ⅰ组，与上述研究结果一致，说明在肉羊饲粮中添加桑叶和全株玉米青贮料能够使肉羊血清中的免疫球蛋白含量增多，有利于增强机体免疫能力，促进生长发育。

3.2 不同青贮料对背最长肌脂肪酸组成的影响

索朗达等研究表明，饲粮类型可显著影响肌肉脂肪酸含量，可通过调整饲粮结构来调控羊肉品质。侯川川等研究发现，湖羊饲喂全混合日粮显著降低了SFA、增加了UFA在总脂肪酸中的比例，且可改善羊肉品质。本试验发现，试验组背最长肌SFA在总脂肪酸中所占比例显著降低，UFA在总脂肪酸中所占比例显著增加，主要是SFA中的棕榈酸比例下降，UFA中的油酸比例升高，原因可能是添加青贮料后饲粮营养特性发生改变，瘤胃微生物通过氢化作用合成了部分脂肪酸，提高了瘤胃微生物活性，瘤胃微生物对饲粮UFA氢化强度随着青贮料的加入而增加，可见青贮饲料可显著改善羊肉脂肪酸组成，提高肉品质。

张秋旭等研究表明，可通过动物饲粮的调控来提高反刍动物肌肉脂肪酸中n-3多不饱和脂肪酸的含量。本研究结果表明，与Ⅰ组相比，试验组波麻杂交羊背最长肌n-3多不饱和脂肪酸含量增加，n-6脂肪酸含量降低，n-6/n-3的比值降低，说明添加全株青贮玉米和青贮混合桑改善了羊肉脂肪酸的构成，这可能是由于桑枝+全株青贮玉米混合青贮饲料中含有的活性成分具有抗菌作用，影响了反刍动物瘤胃微生物对不饱和脂肪酸的生物氢化作用，也说明波麻杂交羊对饲料中n-3多不饱和脂肪酸有着良好的吸收能力，添加青贮料显著提高了背最长肌中n-3多不饱和脂肪酸含量，降低了n-6/n-3的比值，这与樊懿萱等的结果相一致。综合分析，Ⅳ组波麻杂交羊背最长肌中n-6/n-3比值更低，更符合人类健康的需求。

4 结 论

在本试验条件下，饲喂添加青贮饲料的饲粮可提高肉羊的免疫和抗氧化能力，降低肉羊肌肉SFA含量和n-6/n-3的比值，可改善羊肉脂肪酸的构成，在3个青贮料添加组中，桑枝+全株玉米混合青贮组(Ⅳ组)的效果最显著。