食管癌miR-552表达与CT征象相关性分析

王 彬，杨 璐

食管癌是导致癌症患者死亡的最常见原因，迄今为止的标准诊断方法包括射线照相术、超声和磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)[1]。食管癌的检测基于细微的结构变形、显示接近正常组织密度的肿块、皮肤增厚和微钙化[2]。组织病理学上，食管癌通常表现为腺癌或鳞状细胞癌。T1～2a期肿瘤单纯手术治疗和局部晚期放化疗和手术三联治疗仅限于无远处转移的患者。由于症状出现较晚，大多数患者发现时已属疾病晚期，主要采用非手术治疗，例如放疗和/或化疗，导致预期的5 a生存率低于15%[3]。

MicroRNAs(miRNAs)是一类含有约22个核苷酸的非编码小RNA分子，存在于植物、动物和一些病毒中，能够在转录和翻译水平上调节基因表达miRNAs[4]。有证据表明miRNAs在细胞增殖、凋亡、分化和迁移等多种生物学过程中发挥重要作用。更多的研究还发现miRNA调节多种癌症的增殖、凋亡、转移和代谢，包括食管癌、肺癌、肝癌和卵巢癌[5]。因此，miRNA还可以作为潜在的预后生物标志物和各种癌症的新治疗靶点。miR-552是一种新发现的miRNA，促进结直肠癌细胞增殖[6]。然而，miR-552在食管癌中的作用鲜为人知。目前，基于血液或组织中肿瘤标志物的非侵入性癌症检测方法已引起广泛关注。本研究重点分析食管癌组织miR-552表达水平，并与CT征象进行对比研究，为临床治疗提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料2018年1月至2021年4月漯河市中医院外科液氮冻存的61例食管癌组织，男41例，女20例；年龄25～60(51.27±6.82)岁，同时选取相应的患者癌旁正常组织作为对照组。纳入标准：①病理检查确诊为食管癌的患者。②患者术前未接受放化疗及其他治疗。排除标准：获得癌组织但无对应癌旁正常组织；样本因保存不当导致RNA降解，或石蜡包埋标本。提前告知患者标本采集情况，签署知情同意书，经医院伦理委员会批准。

1.2 方法所有受试者在检查前禁食6 h以上，患者处于仰卧位，使用美国GE64层螺旋CT进行常规平扫。扫描参数为：间距1.5 mm，切片厚度10 mm，电压120 kV，电流160 mA。普通扫描后，从肘正中静脉以3.5～4 mL·s-1的流速静脉注射80 mL碘海醇。增强扫描参数设置如下：切片厚度5 mm，管电压130 kV，120 ma·s-1。图像由放射科主治医师(至少2名)共同分析。

1.3 qRT-PCR检测miR-552表达水平使用TRIzol试剂(Invitrogen，美国)分离总RNA。采用PrimeScript miRNA cDNA试剂盒(TaKaRa，日本)进行逆转录。使用SYBR Premix Ex Taq I进行RT-PCR，U6用作miRNA的内参基因。实验中使用的引物由上海铂尚生物科技有限公司提供，miR-552上游序列：5’-GTAGAGTGTGTGGTCCCAGT-3’，下游：5’-CAGGGAGACCTGTATGGTCC-3’，产物大小93bp；内参U6上游序列：5’-CGAGCGCCACTTCAGAATA-3’，下游序列：5’-CTCACGGCGCTTCATCAGAT-3’，长度139 bp。采用2-ΔΔCt方法计算miR-552相对表达水平。

1.4 统计分析采用SPSS 21.0软件对实验数据进行统计分析，应用t检验对计量资料、χ2检验对计数资料进行统计分析，ROC用于评估miR-552的诊断价值，采用Spearman 进行秩相关分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 miR-552水平比较qRT-PCR显示，癌组织miR-552表达水平(9.12±2.27)明显高于癌旁组织(3.12±1.24)，差异有统计学意义(t=18.117，P<0.01)。

2.2 miR-552水平与临床病理参数的关系表1显示，淋巴结转移、中低分化、T3-4期的患者的miR-552水平明显高于无淋巴结转移、高分化、T1～2期患者的表达水平(P<0.05)。

表1 miR-552水平与临床病理参数的关系

2.3 不同CT征象患者miR-552表达水平表2、图1-2显示，miR-552水平在不同肿块大小、肿块边缘有无毛刺方面差异无统计学意义(P>0.05)，在有无微小钙化点、不同肿块形态、有无淋巴结转移方面差异有统计学意义(P<0.05)。

图1 CT平扫

图2 CT增强

表2 不同CT征象患者miR-552表达水平

2.4 CT征象与miR-552水平相关性Spearman秩相关分析显示，miR-552与微小钙化点、肿块形态、淋巴结转移相关(P<0.05)。见表3。

表3 CT征象联合miR-552对食管癌诊断结果

2.5 miR-552和CT征像评估食管癌严重程度的价值CT的ROC曲线下面积AUC为0.781，miR-552为0.701，联合检测为0.890。见图3、表4。

图3 ROC曲线

表4 CT、miR-552诊断食管癌的价值 %

3 讨论

miRNA在各种癌症中表现出特定的变化，并且在血清或组织中稳定，可作为有效的生物标志物用于疾病的诊断和监测。miR-552是一种新发现的miRNA，其在生物过程和疾病中的功能和作用机制尚不完全清楚[7]。先前的研究发现，miR-552通过Wnt/β-catenin信号通路直接靶向DACH1来促进结直肠癌细胞进展[8]。此外，miR-552还通过靶向解聚素、金属蛋白酶增强结直肠癌细胞的转移能力[9]。另外，miR-552通过抑制AJAP1表达促进肝癌细胞的增殖、迁移和上皮-间质转化(epithelial to mesenchy-maltransition, EMT)[10]。然而，miR-552在食管癌中的作用尚不清楚。本研究通过PCR检测表明，miR-552在食管癌组织中高表达，并与淋巴结转移、分化程度、TNM分期相关。通过绘制ROC曲线，发现miR-552诊断曲线下面积为0.701，灵敏度和特异度分别为65.5%、76.8%。由此推测miR-552可作为食管癌的生物标志物，可能具有评估肿瘤进展的能力。

CT光谱成像用于区分食管癌患者的病理变化、食管癌的诊断具有一定的价值[11]。本研究对患者进行CT检查，结果显示CT诊断敏感性为70.8%，特异性为57.8%，表明CT可用于鉴别食管癌，但诊断效率不高。对于非典型病变，常规CT有一定的局限性，而且CT检查过程中存在间歇性伪影，容易漏掉一些具有诊断意义的快速、短暂的特征变化，造成漏诊、误诊。然而，许多研究显示了血清或组织标志物结合CT诊断的价值，而且不同细胞因子的异常表达会导致肿瘤组织图像表现出不同的差异。本研究中，miR-552水平在微小钙化点有无、不同肿块形态、有无淋巴结转移方面差异均有统计学意义，这与肿瘤组织增殖、迁移、分化程度密切相关，也反映了肿瘤指标与影像学相结合的价值。而且通过miR-552联合CT检测，发现联合诊断的敏感性、特异性分别为71.9%和92.6%，联合诊断的效果明显。这也提示可以通过联合检测来弥补两者之间的缺陷，从而获得更好的诊断价值和更高的特异性，更有利于食管癌的诊断。

总之，食管癌miR-552表达与CT征像存在一定的相关性，将miR-552表达与CT征像相结合，可准确判断食管癌的恶性程度。本研究结果也显示，miR-552表达水平与边缘有无毛刺差异无统计学意义，这可能与样本过少有关，还有待进一步研究探讨。