618 例男性感染HPV 的基因型分布特点

郝广曙 赵洁 张登才 潘志凤

甘肃省妇幼保健院，甘肃 兰州 730050

人乳头瘤病毒（human papilloma virus，HPV）主要是通过夫妻或性伴侣间性接触进行传播，是一种微小双链环状DNA 病毒，其具有强烈嗜上皮性，黏膜感染后可引起人类皮肤和黏膜多种良性和恶性病变［1-2］。至今已鉴定出200 多种HPV 亚型，不同亚型HPV 的致病性存在很大差异，且男性与女性HPV 感染情况不同［3-4］。女性宫颈癌的发生与HPV 感染的联系已引起人们高度重视，但对男性泌尿生殖器HPV 感染的研究较少［5］。目前，尽管已有多篇文献报道了中国境内的男性关于HPV 的感染情况，但在甘肃地区关于该方面的研究较少［1，13，14］。本研究运用多重荧光PCR 技术对618 例男性HPV 感染患者进行HPV 感染分型检测，为了解男性HPV 感染流行分布状况和临床防治提供参考。

1 材料和方法

1.1 研究对象收集2017 年7 月至2020 年7 月在甘肃省某三甲妇幼保健院男科门诊就诊的618 名男性患者HPV 标本检测资料，年龄13～68 岁，平均（36.5±5.0）岁。所有待检样本均使用一次性宫颈脱落细胞采集器采集样本。采集男性患者尿道口、冠状沟及肛周的组织脱落细胞或分泌物；采集后，低温保存，立即检测，无法立刻检测的标本放在4℃冰箱保存，保存期不超过14 天，-20℃保存期为6 个月，-70℃保存不超过2 年。保存期间避免标本反复冻融。

1.2 主要试剂和设备HPV 基因分型（23 型）检测试剂盒购自潮州凯普生物化学有限公司；荧光定量PCR仪（SLAN-48P）购自上海宏石医疗科技有限公司。

1.3 HPV 基因分型检测各试验步骤均严格按照实验仪器和试剂说明书进行。操作步骤如下：采集器采集的样本取0.5～1mL，13000 转/分钟离心1 分钟；弃上清，加入0.5mL 细胞保存液重悬细胞；13000 转/分钟离心1 分钟，尽量弃干净上清；每样本加入50μL 细胞裂解液，充分振荡重悬细胞，煮沸10 分钟，13000 转/分钟离心10 分钟，保留上清备用（上清液中为释放的DNA）；分别向设定的n 个PCR 反应管中分别加入18μL 配置好的扩增试剂（PCR）混合液17.5μL，DNA 聚合酶0.5μL 和2μL 处理好的样本DNA，总反应体系20μL；按照，如下反应条件：95℃，10min，1 个循环；95℃，15s，60℃，60s，45 个循环；38℃，5s，1 个循环，进行扩增；每次反应均需要设置一个阳性对照和一个空白对照。

1.4 统计学分析本研究采用SPSS19.0 软件，计数资料采用卡方检验，P<0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 HPV 各亚型分布情况618 例受检者中，HPV 阳性256 人，感染率达到41.42%。低危型感染较高的基因型主要有6 亚型、11 型和43 亚型；高危型感染较高的基因型主要有52 亚型、16 亚型、58 亚型、53 亚型。见表1。

表1 HPV 各亚型分布情况

2.2 HPV 感染情况及感染类型构成比256 位HPV阳性感染中单重感染有163 例，多重感染有93 例，单重感染率明显高于多重感染。单重感染中低危型76例，高危型87 例；多重感染中低危型9 例，高危型23例，高低危混合型61 例，并且多重感染中二重和三重感染的感染率占比最高。见表2、表3。

表2 不同HPV 感染类型分布

表3 HPV 感染类型构成比

2.3 不同年龄段HPV 感染情况618 位检测者中，21～40 岁年龄段感染占比最高，年龄分层结果表明，不同年龄组HPV 感染阳性率无统计学意义（P>0.05）。见表4。

表4 不同年龄段HPV 感染情况（例）

3 讨论

流行病学数据证实，男性（特别是尿道内感染致癌HPV 的“高危男性”）是女性宫颈癌的危险因素［6-9］。研究发现，在21～40 岁男性患者中，HPV 感染率占比最高，可能的原因是该年龄段男性是性活跃人群，接触多个性伴侣，从而导致感染率偏高，增加了女性患宫颈癌的风险。HPV 是肿瘤发生发展的密切相关因素，是一种嗜上皮性的DNA 病，根据其致癌危险性的大小分为低危型和高危型。低危型HPV 主要与生殖道、肛周等疣类病和低度子宫颈上皮内病变有关，高危型HPV主要与宫颈癌、高度子宫颈上皮内瘤变、阴道癌、外阴癌、肛门癌和阴茎癌相关［11-12］。由于生理结构的差异，男性生殖道HPV 感染病变的临床表征是非典型的，大部分是无症状的，易漏诊，且检查方法相对局限，缺乏女性检查的专用手段（如阴道镜和宫颈刮片等）。据文献报道，镇江地区［1］男性HPV 阳性率是43.67%，深圳［13］是45.12%，山东［14］是57.3%，本研究检测了618 例样本，HPV 阳性率为41.42%，最常见的亚型是6、11、52和16 亚型。一些研究人员使用生殖器皮肤或尿液的非侵入性取样来识别亚临床HPV 感染的个体。虽然该方法无创伤、简单、耐受性好，但敏感性不高［14］。另有文献表明，男性HPV 的流行与受试者的居住、教育水平和性伴侣的数量具有显著相关性［15-16］，即性伴侣较多、居住在城市地区、受教育程度较低的男性，其HPV 的检出率较高。而有研究报道，年龄、婚姻状况、性取向等社会人口特征和性行为特征与HPV 检出率无统计学关系［17-18］。

本研究618 例HPV 阳性感染者中，单重感染率为63.67%，HPV6（47.77%）和HPV11（24.84%）是低危型最常见的亚型，感染率高于其他亚型；HPV52（18.94%）是高危型中最常见感染亚型。本研究数据显示，二重及以上感染占36.33%，最多达到六重感染。其中二重（21.10%）和三重（11.32%）感染比例最高。本研究结果显示，单一高危型感染比例最高，其次是单一低危型、多重混合型，表明甘肃地区HPV 感染多数为单纯感染和高、低危亚型混合感染，所以研究检测时不能只检测高危亚型或低危亚型，避免漏诊。

综上所述，我院就诊的男性中HPV 感染并不少见，男性HPV 感染主要以6、11、52 和16 亚型为主，多发于21～40 岁，单一感染和高、低危混合感染较常见，多重HPV 混合感染比例相对较高，达到了23.83%。本研究为HPV 在男性中的感染亚型的确定，了解HPV 感染的流行病学特征和男性人群HPV 感染的防治提供参考依据。