FA160 全自动粪便分析仪隐血质控品制备及评价

陈思 祁媚姣 王昱斌 马宝良

兰州大学第二医院，甘肃 兰州 730030

粪便隐血试验（facal occult blood test，FOBT）现常作为消化道出血和消化道恶性肿瘤早期的筛选指标。目前粪便隐血试剂厂家众多而无单一室内质控品供应，随着自动化和图像智能识别技术的提高，全自动粪便分析仪广泛应用于临床工作［1］。不同的仪器，其检测性能存在一定差异［2］。本研究用EDTA 抗凝静脉血充分混匀后，取全血用双蒸水溶血配制成100mg/L 的血红蛋白母液，用于粪便隐血实验室内质控，结果可满足粪便隐血试验室内质控要求。

1 材料与方法

1.1 试剂便隐血（FOB）检测试剂盒（胶体金法），四川沃文特生物技术有限公司（批号：2010280）。

1.2 仪器FA160 全自动粪便分析处理系统，四川沃文特生物技术有限公司。

1.3 样本选取乙型肝炎、丙型肝炎、梅毒、艾滋病抗体皆阴性且血红蛋白在100g/L 的新鲜血细胞分析标本1 份，用于配制系列人血红蛋白溶液。

1.4 方法依据检测试剂盒说明书提供的检测卡线性范围0.20～2000μg/mL，以Hb 浓度100g/L 为原液，蒸馏水为溶剂稀释配制：3000、2500、2000、1000、500、100、2.0、1.0、0.50、0.20、0.10μg/mL 浓度梯度的血红蛋白液，用于FOB 检测及质控品浓度的定值。配制方法见表1。

表1 血红蛋白液的配制

手工法：取出检测卡，置于水平干燥的操作台面上，在检测卡的加样孔内加入上述系列人血红蛋白液100μL，室温孵育4～10 分钟，测试结果在10 分钟内读取，结果判断严格按照操作说明书。分析仪法：装载检测卡与仪器卡槽指定位置，吸取上述系列血红蛋白液2mL 加入样本采集管内，放置于采集管架上，仪器自动对样本采集管进行进样、混匀、加样、反应结果图像采集和辅助判断，操作人员可根据采集图像进行结果的判读。

1.4.1 确定质控品浓度。两种方法对上述系列血红蛋白液，每个浓度进行3 次检测，分析比对各浓度的检测结果，确定隐血阳性质控品的浓度。

1.4.2 室内质控试验。将浓度为2μg/mL 的血红蛋白溶液用5mL 的采血管各分装16 支，每管2mL，一半置-20℃冰箱保存，一半置室温试剂台固定位置保存。每间隔4 天各开启一支，混匀后，直接上机检测，进行室内质控试验并记录其各自的稳定性。

1.4.3 稳定性试验。将100μg/mL（100mg/L）的血红蛋白母液用1.5mL 微量离心管各分装12 支，每管1.0mL。保存于-20℃冰箱，每月取一支自然解冻后混匀，用蒸馏水稀释为2μg/mL 血红蛋白液50mL，按2mL 每管分装保存于4℃冰箱，作为室内质控品，进行测试并记录结果，观测解冻后的母液稳定性。

1.4.4 空白试验。分别用蒸馏水和分析系统配套的样本稀释液作为空白试验样本，用手工方法和分析仪法进行FOB 测试，分别每次取样100μL，各连续检测5 次。

1.4.5 准确性试验。选取显微镜检测RBC 5-10/HP 的FOB 阳性样本5 份和2μg/mL 的血红蛋白溶液质控品5 份，用分析仪法连续测试3 天。

2 结果

2.1 系列血红蛋白溶液隐血试验检测线性范围验证用0 代表阴性，用1～4 代表阳性反应颜色由浅到深，见表2。结果显示：0.10、0.20、0.50μg/mL 浓度的血红蛋白溶液手工法和仪器法隐血试验均为阴性；1.0、2.0μg/mL浓度的血红蛋白溶液手工法试验均为阳性，颜色反应为1；分析仪法1.0μg/mL 浓度为阴性，2.0μg/mL 浓度为阳性，颜色反应为1；100、500、1000、2000μg/mL 浓度的血红蛋白溶液手工法和仪器法隐血试验均为阳性，颜色反应依次为2、3、4；2500、3000μg/mL 浓度的血红蛋白溶液手工法和仪器法隐血试验同时均为阴性，为血红蛋白浓度过高，即抗原过量，引起的HOOK 效应所致假阴性。

表2 系列浓度血红蛋白溶液隐血试验结果

根据FA160 全自动粪便分析仪隐血检测线性范围验证结果，浓度为2μg/mL 的血红蛋白溶液的隐血试验结果为阳性，可将2μg/mL 的血红蛋白溶液作为FA160全自动粪便分析仪隐血的室内质控品浓度。结果显示：2.0～2000μg/mL 的血红蛋白溶液做隐血试验，手工法和分析仪法均具有很好的重复性和稳定性，本实验室测得隐血检测试剂卡的检测线性范围为1.0～2000μg/mL，最适室内质控浓度为2μg/mL。见表3。

表3 手工法和分析仪法确认隐血检测线性范围的性能比对

2.2 保存条件采用2μg/mL 的血红蛋白溶液作为室内质控品，室温保存一周和-20℃冰冻保存1 月，做隐血试验结果均为阳性（颜色1+），稳定性较好。

2.3 稳定性采用-20℃冰冻保存的100μg/mL 血红蛋白溶液（母液），每月稀释一支，隐血试验结果稳定，在1 年内均能得到理想的质控结果。

2.4 空白试验结果手工法和分析仪法检测FOB 结果均为阴性，符合率均为100%。

2.5 准确性试验结果阳性样本和自制2μg/mL 的血红蛋白溶液质控品连续检测比对结果一致，均为阳性，符合率均为100%。

2.6 重复性试验结果所有测试设计均涉及重复试验次数，检测结果一致，符合率均为100%。

3 讨论

FOBT 是指肉眼或者显微镜观察不到的潜在的一种出血现象，目前国内粪便常规的检查普遍使用显微镜法和FOB 方法，它是临床诊断消化道出血和消化道肿瘤早期筛查常用的一种鉴别方法［3，4］，具有检测便捷、特异、无创、时间短等优点。对于急性或慢性消化道出血、消化道恶性肿瘤等疾病具有重要的临床诊断价值［5］。常用检测方法有化学法、免疫化学法和免疫层析法［6］，各有优点和局限性。化学法灵敏度低［7］，特异性高，存在一定的假阳性，对上消化道出血检出率高［8］。免疫法检测灵敏度高，特异性强，对下消化道出血检出率高，受抗原性和钩状效应的影响而存在一定的假阴性，两种方法联合检测，可以提高阳性检出率，避免漏检［9］。免疫层析法是人血红蛋白和转铁蛋白的联合检测方法，对于上消化道出检出率高［10，11］，方法学上优于其他两项FOBT，但他的成本要明显高于其他两项试验。

随着自动化分析仪技术和图像智能识别技术不断进步，越来越多的全自动粪便分析仪应用于临床工作［12，13］，提高了工作效率。不同的仪器检测性能有一定的差异［2］，所以在使用全自动粪便分析仪时，严格执行室内质控尤为重要，粪便结果的准确性和有效性才能得到有效的保障［14，15］。

FA160 全自动粪便分析仪采用轨道式流水线自动进样，机械手抓取样本采集管，穿刺加注稀释液后进行气动混匀方式对样本进行充分的混匀、加样、自动采集样本颜色性状图像，有形成分形态学图像拍照，传输到软件图像采集系统，由专业人员进行结果的判读和保存。全程实现自动化，避免人为操作的误差和随意性，并且消除了检测过程中的安全隐患，确保了工作环境的干净、整洁、舒适，并且生物安全性高。

室内质控是检验工作中的灵魂，开展室内质控是保证FOBT 质量的必要措施［16］，目前市售的室内质控品多为商家配套提供商品，多为套餐或组合式包装，很少有单一质控品。大多推荐用众多实验室认可好评的质控品供应商的商品，其价格昂贵，使用周期短，不宜广泛推广应用。国内有陆永辉［17］林馥嘉［18］等通过自制1μg/mL 血红蛋白质控品验证其可检测线性，保存条件验证，进行FOB 日常室内质控应用取得好的效果，但其配制方法操作性还可尝试优化。

本文制备浓度为2μg/mL 血红蛋白液作为隐血阳性质控品，母液分装12 支，-20℃储藏，每月取1 支母液配100mL 质控应用液，4℃不添加任何防腐剂保存，每次取2mL 质控应用液上机完成每天室内质控。本文中隐血阳性应用液质控品配制简单、4℃保存、质量稳定、实用价廉，完全能满足FA160 全自动分析仪隐血试验的室内质控要求，同时也解决了目前隐血阳性质控品市场良莠不齐、价格昂贵、开瓶期短的问题。为FOB结果的准确性提供了有力的保障。本研究自制的室内质控品配制简单，稳定性可控良好，价格低廉，具有较好的实用性。

综上所述，本文制备的浓度为2μg/mL 的血红蛋白液隐血阳性质控品可作为日常室内质控应用，4℃无防腐剂条件保存，能够满足临床便隐血检验，易推广使用。