不同品种绵羊超数排卵效果分析

张振良，郭延华，刘长彬，卢守亮，万鹏程，刘昱成，倪建宏

（省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室/新疆农垦科学院畜牧兽医研究所，新疆 石河子 832000）

超数排卵（简称超排）是通过高剂量的促性腺激素刺激供体的卵巢一次排出多枚卵子，并使其受精；胚胎移植是将供体受精后的多个胚胎取出，移植到生理周期相同的受体子宫内，并使其发育成个体。超数排卵和胚胎移植技术是快速扩繁家畜的有效技术手段，在绵羊快速繁育中起到重要作用。

1 材料与方法

1.1 试验时间及地点

试验于2020年9—10月在新疆英吉沙县领头羊有限公司的基地进行。

1.2 供体母羊的选择

分别选择健康、膘情适中、体型相同、繁殖机能正常的三个品种经产羊：萨福克羊47只，其中首次超排的11只，重复超排的36只；白杜泊羊16只（首次超排）；黑杜泊7只（首次超排）。试验开始前一周，在正常管理的前提下给参试羊增加一些能量饲料和干苜蓿草。

1.3 试验材料

药品：孕酮阴道栓（CIDR，澳大利亚生产）；促卵泡素（FSH，500单位·瓶-1，宁波第二激素厂）；前列腺素（PG，0.2mg·支-1，上海计胜生物科技有限公司）；注射用促黄体素释放激素（A3，25μg·支-1，宁波三生生物科技有限公司）；冲胚液（PBS，1000mL·袋-1，新西兰生产）；胚胎保存液（Holding，100mL·袋-1，新西兰生产）；生理盐水；新洁尔灭；5%碘酒；75%酒精；静松灵；青霉素。

器械：放栓枪；5mL注射器；10mL注射器；羊用保定架；手术刀；剪毛剪；体视显微镜；冲胚管；10cm培养皿；四孔培养皿；缝合针；缝合线；纱布；创净布。

1.4 供体超排处理方法

任意一天在供体母羊阴道内放置CIDR，其后第10d下午开始按照6针剂量依次递减的方法注射FSH，第13d早上注射最后一针FSH；第12d下午取出供体羊阴道内的CIDR，同时注射1mL PG，第13天早上再注射1mL PG，撤栓后24h试情，发情羊进行第一次配种，并注射12.5μg A3。间隔10—12h后进行第2次配种，重复2～3次。

1.5 胚胎的收集

供体母羊发情配种后的第7d开始手术冲胚，供体母羊术前空腹24h。首先将母羊放在保定架上保定好，刮去腹部手术部位腹毛，并用5%碘酒消毒，75%酒精脱碘，肌肉注射0.2mg静松灵；待供体羊进入麻醉状态后，用手术刀在其乳房前侧顺着头的方向逐层切开皮肤、脂肪层、肌肉层和腹膜，切口长度5～6cm，注意避开血管；取出子宫和卵巢，观察卵巢的排卵情况，并记录左右两侧卵巢上的黄体数；对重复超排供体羊的卵巢和子宫粘连情况进行观察并记录；然后用器械在子宫体扎一小洞，放入冲胚管；用子宫钳夹住一侧子宫体，在子宫角处插入接胚管，管外端接培养皿；用注射器通过冲胚管将冲胚液注入子宫进行冲胚，过程中保证冲胚液均匀缓慢的流过子宫，用接胚管外端的培养皿接冲胚液完成冲胚；冲胚完成后在显微镜下观察培养皿，找到收集到的胚胎，并按照形态特征将其分为A、B、C三个等级和未受精的卵子。

1.6 供体羊的术后处理

供体羊冲胚结束后，用37℃生理盐水冲洗其子宫体、卵巢和输卵管上的血迹，并用纱布擦拭干净，将再次喷洒生理盐水后的子宫缓慢放入供体羊腹腔内，并向腹腔内灌注300～500mL的37℃生理盐水。术后缝合时，先用可吸收缝合线缝合腹膜和肌肉层，缝合中应注意不要将内脏与肌肉缝合在一起；缝合好肌肉层后，再缝合皮肤层，缝合皮肤层时要将皮肤层与肌肉层一起缝合，同样注意不要与内脏缝合在一起，皮肤层缝合3～4针即可，保证伤口平整对齐，有利于伤口愈合。用碘酒对缝合后伤口消毒，给供体羊肌肉注射160万单位青霉素后，将其从保定架上缓慢放下。术后48h内持续关注母羊恢复情况。

1.7 统计分析

试验所得数据用Excel整理后，再用SPSS 21.0进行方差分析，结果以“平均数±标准差”表示。

2 结果与分析

2.1 不同品种羊超排效果

如表1所列可知，白杜泊的平均回收胚胎数为

表1 不同品种羊超排效果比较Table 1 Comparison of superovulation effects of different breeds of sheep

11.16枚，高于萨福克的7.45枚和黑杜泊的7.29枚；白杜泊的胚胎回收率最高，为85.56%，萨福克为77.91%，黑杜泊最低为66.29%；各品种的A级胚数，萨福克最低，为5.00枚、黑杜泊为6.29枚，白杜泊最高，为7.56枚；萨福克和白杜泊的B级胚数相差不大，分别为1.55枚和1.56枚，黑杜泊仅为0.57枚；未受精卵数分别为0.64、1.94和0.14枚；胚胎移植中，可用胚是指A级胚和B级胚，C级及以下的胚胎为不可用胚，萨福克和白杜泊的可用胚率较接近，分别是84.55%和83.88%，黑杜泊最高，为92.87%；萨福克、白杜泊和黑杜泊卵巢上的平均黄体数分别为10.27、13.13和11.14个，三个品种间以上各指标虽有差异，但差异均不显著（P＞0.05）。

2.2 重复超排对萨福克羊排卵效果的影响

如表2所列可知，对萨福克进行4次重复超排后，第二次超排回收胚胎数高于其他三次，第一、二和三次超排间差异不显著（P＞0.05），但第一、二次超排显著高于第四次超排（P＜0.05）。第二次超排获得A级胚数显著多于第四次超排（P＜0.05），其余各次间差异均不显著（P＞0.05）；4次超排获得的B级胚数和未受精胚数间差异均不显著（P＞0.05）。

表2 萨福克羊重复超排效果比较Table 2 Comparison of the effect of repeated superovulation of black-headed Suffolk sheep

3 讨论

3.1 不同品种羊超排效果和胚胎质量的分析

随着胚胎移植技术不断改进和完善，目前该技术已广泛运用到家畜的品种改良和快速扩繁中。胚胎移植技术中的超排是一个复杂的过程，其效果受到品种、激素、个体营养状况、饲养管理、超排方案、环境、季节等诸多因素的影响。赵霞[3]研究德国美利奴羊和无角陶赛特羊的超排效果，发现两个品种间的排卵数和可用胚数差异均不显著（P＞0.05）；唐大为等[4]对无角陶塞特、特克塞尔和萨福克进行超排对比，结果显示三个品种间平均黄体数、平均回收胚胎数和平均可用胚胎数差异均不显著。本研究针对三个品种的羊进行超排试验，结果显示三个品种间的回收胚胎数、A级胚数、B级胚数和未受精胚数差异均不显著（P＞0.05），这与前人研究结果相似。易金云等[5]对萨福克和杜泊进行超排试验，两个品种的羊冲胚数都在10枚以上，且两者间差异不显著（P＞0.05），本研究中萨福克和黑杜泊的冲胚数在7枚左右，但黄体数大于10枚，可能是冲胚人员经验不足，导致胚胎没有全部冲出。徐鹏举等[6]对萨福克羊进行超排，其平均回收胚胎数7.96枚，平均可用胚胎数6.56枚，与本研究结果相似。

本研究中，不同品种羊的黄体数与可用胚数萨福克为10.27个和6.55枚，白杜泊为13.13个和9.13枚，黑杜泊为11.14个和6.68枚，这与张秀陶等[7]同一时间不同品种绵羊的超排试验，得到的黄体数和可用胚数白头萨福克羊10.8个和7.5枚，东弗里生羊10.8个和3.6枚，陶赛特羊9.2个和4.3枚及特克塞尔羊8.8个和3.5枚的试验结果相似。张璐等[8]对5个不同品种的绵羊进行超排，结果显示羊的平均黄体数6～16个不等，平均可用胚数3～7枚不等，由此可看出不同品种羊的超排效果间存在一定差异，可能是由于不同品种的羊对激素的用量存在不同的耐受性。不同的季节对超排也有很大的影响。苟想珍等[9]在春秋两季对萨福克进行超排试验，发现秋季羊的平均回收胚胎数和平均可用胚胎数显著高于春季（P＜0.05），本研究在秋季进行，其春季超排情况有待进一步研究，但绵羊作为季节性发情动物，秋季超排效果应该相对较好。

3.2 重复超排对排卵效果的影响

重复超排的目的是充分挖掘良种母畜的遗传潜力，发挥其最大价值，由此给养殖户和社会带来更多经济效益。本研究中，对萨福克羊重复超排4次后，其第一、二次回收胚胎数显著高于第四次（P＜0.05），第二次超排获得的A级胚数显著高于第四次（P＜0.05），这说明对萨福克羊进行四次超排，会显著影响获得的胚胎数和胚胎质量。张果平等[10]对杜泊羊重复超排处理，第三次回收的胚胎数显著低于第一、二次（P＜0.05），与本研究结果稍有不同，可能是由于品种不同造成的差别；王峰等[11]对陶赛特羊重复超排，第二次超排获得可用胚数最多，然后依次减少，整体趋势与本研究结果一致；柴孟龙等[12]对萨福克羊两次重复超排，两次超排间差异不显著（P＞0.05），这与本研究中的前两次超排结果一致。陈童等[13]对细毛羊两次重复超排，两次超排后卵泡发育数大幅减少，与初次超排相比差异极显著（P＜0.01），但可用胚胎数没有明显减少（P＞0.05）。由此可见，重复超排受品种、激素剂量、体况、生殖器官状态和季节等因素影响。

朱芳贤等[14]认为重复超排应在手术时防止出血及术后严格管理来防止子宫粘连。在实际生产中，手术减少出血是必要的，同时还可通过延长两次冲胚的间隔时间或两次冲胚间让母羊自然生产一次及在术后受体腹腔内灌注生理盐水的措施来防止子宫粘连。同时还需在生产实践中进一步验证以获得更好的方法。

4 结论

通过对萨福克、白杜泊和黑杜泊这三个品种的羊进行超排试验，三者间的回收胚胎数、A级胚数、B级胚数、黄体数和可用胚胎数差异均不显著（P＞0.05），说明同一超排方案对三个不同品种的羊影响不大；对萨福克进行4次重复超排，随超排次数的增加，子宫粘连愈发严重，特别是输卵管伞粘连后无法包裹卵巢，卵子无法进入输卵管，导致胚胎回收率低。