猪肠道大肠杆菌病的诊断及抗生素治疗

贾博/甘肃省庄浪县朱店镇畜牧兽医站 744699

大肠杆菌是一种可引起多种猪病的病原体，包括新生仔猪腹泻和断奶后仔猪腹泻（post-weaning diarrhoea，PWD），是造成全世界哺乳期仔猪和断奶仔猪死亡的重要病因。产肠毒素大肠杆菌（enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC）是猪肠道大肠杆菌病的主要致病菌。由于ETEC 感染引起新生仔猪和断奶仔猪腹泻暴发，通常发病率较高，并在发病的猪群中反复发生，因此造成高额的治疗和防控费用。猪肠道大肠杆菌病可应其造成猪较高的死亡率、体重增加减少、治疗费用增加、疫苗接种和饲料浪费等造成重大的经济损失。据统计，根据猪肠道大肠杆菌病的严重程度，PWD 造成的经济损失为每头40 至314 欧元。预防和控制新生仔猪大肠杆菌病的常用措施包括减少环境中致病性大肠杆菌的数量、实施养殖场卫生措施、保障场内外的生物安全、维持适宜仔猪生长的环境条件、通过母猪接种疫苗保障仔猪获得较高水平的被动免疫力、提高仔猪的免疫水平等。除上述预防方法外，口服或注射途径用应用抗生素仍仅用于治疗猪肠道大肠杆菌病。此外，控制猪肠道大肠杆菌病需要对大肠杆菌有足够的了解，尤其是其致病机制，以便实施适当的诊断、预防和治疗措施。可靠准确的诊断方法是应对猪大肠杆菌病暴发诊断的关键因素。

1 猪肠道大肠杆菌病的诊断

在诊断猪肠道大肠杆菌病时有多种诊断方法，从临床观察患病猪的临床症状和大体病变开始，再到大肠杆菌的细菌性分离鉴定及流行病学调查等存在不同的诊断程序组合。

ETEC 引起的新生仔猪腹泻常见于0～4 日龄的仔猪，一般情况下，在流行病学调查中，由于第一胎母猪所产仔猪缺乏被动免疫保护从而更容易患肠道大肠杆菌病。ETEC 所致的PWD 通常在断奶后的2～3 周可观察到，但有报道在6～8 周也可发生。ETEC 所致的新生仔猪腹泻可观察到大量水样或乳样的腹泻物，具有独特的气味，颜色通常为白色或黄色。ETEC 引起断奶后仔猪大肠杆菌病的临床表现为淡黄色、灰色或略带粉红色的水样腹泻，具有特征性的气味，一般临床症状可持续1 周。发病猪通常会出现食欲下降、被毛粗糙和精神沉郁。患病猪可出现突然性死亡，特别是在暴发初期，病猪通常会出现脱水症状和眼睛凹陷。剖检病猪可见小肠扩张、轻微水肿和充血。在新生仔猪或断奶仔猪患大肠杆菌病后，胃通常扩张并充满凝结的乳块或饲料，眼底充血，肠系淋巴结肿大充血。但应注意的是这些病变不具有特征性，应结合其他检测结果进行判断或进行实验室诊断。

经临床观察和大体病变判断为猪大肠杆菌病时，可采集样品送至实验室进行细菌学或分子生物学检测。采样时可选取3～5 头未治疗的仔猪，采样猪腹泻时间在12～24h。对其进行安乐死并尸检，评估患病猪的各消化器官病变并收集样品。将小肠段和大肠段末端打结，用于病理组织学试验需用10%的福尔马林固定，而细菌学检测则保证样品的新鲜度因此需在4℃温度下储存并在24h 内迅速送至实验室。自然死亡的动物也可采样，但应注意的是在动物死亡后尸体会发生自溶而影响结果，因此应在动物死后立即进行剖检和样品采集。如果无组织样品可收集，也可收集3～5 头猪的粪便或直肠拭子作为检测样品，但应注意粪便不能被环境中的其他污染物污染。

采集的样品可以接种至血琼脂培养基和麦康凯培养基或其他肠杆菌科选择或鉴定培养基进行大肠杆菌的分离和初步鉴定。新生仔猪腹泻或PWD样品中分离的菌株在血琼脂培养基上菌落的溶血性常用作诊断ETEC 的常用指标。一般来说，从患有大肠杆菌病的新生仔猪腹泻样品中分离菌株在血琼脂培养基上溶血和非溶血的菌落均存在，但从PWD 样品中分离的ETEC 具有溶血性的菌株占比较大。但致病菌株的检测结果并不总能证明仔猪出现大肠杆菌病，还要结合大肠杆菌的致病性、患病猪的临床症状等方面因素综合判断。此外对用抗生素治疗后的病猪检测ETEC 结果为阴性并不能证明猪群未发生猪大肠杆菌病，还需对未治疗的猪进行重复检测。在实验室诊断中，采用PCR 的方法对ETEC 编码的特征性毒力基因对分离株进行分型验证以区分致病菌株已成为一种常用方法，该方法能快速的诊断出ETEC，但由于其他肠杆菌科可能存在类似的毒力基因也可能影响检测结果。荧光定量PCR检测方法已发展为单独或与其他细菌学诊断方法结合的ETEC 检测方法之一。该方法对大肠杆菌进行了量化显示，是一种很有前景的肠道大肠杆菌病的诊断方法。此外，部分致病性大肠杆菌也可通过O 抗原血清型分型来识别，因为少数特定的O 血清型大肠杆菌与猪大肠杆菌病有关。猪大肠杆菌病的病理学检测也常用于该病的诊断。在患有新生仔猪大肠杆菌病的仔猪可观察到ETEC 黏附于大部分小肠细胞刷状缘膜表面，其他病理变化可包括血管充血出血和炎性细胞数量增加。PWD的微观病变特征是在回肠绒毛上皮细胞顶端表面的斑块中可观察到细菌层。

由于猪肠道疾病的发生通常是由多种病原和因素共同作用的结果，因此单一考虑某种病原和因素可导致临床治疗效果欠佳。此外，ETEC 引起的腹泻与其他病原引起的仔猪腹泻具有一定的相似性，如冠状病毒、轮状病毒、沙门氏菌和胞内劳森菌等，因此在临床大体病变、剖检组织病变以及实验室诊断过程中应注意区分并进行针对性的治疗。

2 抗生素与猪肠道大肠杆菌的治疗

在治疗猪大肠杆菌病时，抗菌治疗是公认的首要目标。在许多猪肠道大肠杆菌病的诊治病例中常应用抗生素来避免致病菌传播和缓解临床症状。在应用抗生素治疗猪大肠杆菌病时，在药物选择和制定给药计划时应首选确定致病菌株对抗生素的敏感性，选择对致病菌具有最佳杀菌或抑菌效果的抗生素是有效治疗的基础。另外，还应考虑用药的剂量和频率，以确保用于治疗的抗生素在主要感染部分达到足够的抗菌浓度。最后，经验性治疗是对畜群体有足够的了解和致病菌抗性模式数据充分分析下进行的快速用药方法。大肠杆菌病的暴发通常需要采取迅速的措施，因此抗生素的使用总是先于耐药模式检测。因此在大多数情况下，正确选择抗生素治疗猪大肠杆菌病是该病防治和缓解致病菌耐药性的产生压力的基础。实验室可通过药物敏感性试验、最小抑菌浓度等试验精准分析病原体对抗生素的敏感程度。

在欧洲的一些国家，如荷兰将所有抗生素分为三类，并根据致病菌株耐药和敏感情况、流行病学调查数据等更新该分类。一般而言，在临床诊断后进行经验性治疗可先使用首选抗生素治疗，在临床治疗或药物敏感性试验验证首选药物无效后选用第二类抗生素，而第三类抗生素则是在前两类抗生素无效的情况下作为最后的选择。在抗生素治疗猪大肠杆菌病相关的肠道疾病时，由于病猪很少进食和饮水，所以应以肠胃外给药方式进行治疗。在日常养殖时，在畜群中出现因大肠杆菌感染所致死亡时应及时处理患病动物和死亡动物，对同畜群的猪可进行预防性治疗。

抗菌治疗取决于病原体对抗菌治疗的敏感度、引起靶向微生物所需的药物结合特征以及在感染部位所能达到的药物浓度。正常使用抗生素，优化抗生素治疗剂量可增加治疗有效性，减少药物毒性和病原体的耐药性。适当剂量的抗生素是控制或清除抗感染部位细菌的关键，也是限制抗生素耐药性的关键，在对剂量优化的同事，也许对治疗的频率和时间等进行优化已达到最佳的临床结果和最低对致病菌的药物选择压力。

近年的研究发现，引起PWD 的ETEC 菌株对越来越多的抗生素表现耐药，耐药谱日益扩大，耐药程度日益加重。对多种抗生素耐药的ETEC 发现，以及ETEC 对用于治疗猪大肠杆菌病的抗生素的耐药趋势是一个令人担忧的现象。猪ETEC 的耐药性在不同的国家和猪群中的情况各不相同，这与各国和各养殖场优选使用抗生素药物的不同有关。

3 结语

猪肠道大肠杆菌病的防控关键在于准确的诊断和适当的预防治疗措施。其中，应提高诊断方法的敏感度和准确性，此外，经济成本也是影响诊断方法应用范围的关键因素，同时也应在养殖场或兽医诊所等建立起标准化的诊断流程。抗生素在治疗新生仔猪和断奶仔猪大肠杆菌病中被广泛应用，在许多国家应用抗生素进行预防性和治疗性使用仍十分普遍。随着从腹泻猪样品中分离的大肠杆菌菌株多重耐药情况越来越流行，人们越来越关注致病性大肠杆菌菌株的抗生素耐药性，并且抗生素替代的治疗和预防方法的研究得到更多的关注，如疫苗、益生菌、中草药、化学药物和饲养管理方式等。即使某些预防方法显示出一定的效果，但目前使用抗生素治疗和控制猪肠道大肠杆菌病的首选方法。如今人们更加关注从养殖动物分离的细菌的抗生素耐药性增加，这迫使相关工作人员更加理性和理智的使用抗生素。

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